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目的: 分离与鉴定刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)RH株速殖子外泌体。方法: 收集弓形虫速殖子与人结肠癌SW480细胞共培养上清液,经离心、过滤,采用基于聚合物沉淀技术的试剂盒法分离外泌体;透射电镜观察外泌体形态特征,纳米颗粒跟踪分析(nanoparticle tracking analysis,NTA)检测外泌体粒径大小,蛋白质印迹法检测外泌体经典标志分子CD63、HSP70以及弓形虫特异蛋白表面抗原1(surface antigen 1,SAG1)、棒状体蛋白16(rhoptry protein 16,ROP16)、ROP18和致密颗粒蛋白1(dense granule protein 1,GRA1)。结果: 从弓形虫与细胞共培养上清液中分离出囊泡样物质,其外形为圆形,有完整的膜结构,直径为30~150 nm;表达外泌体特异性蛋白CD63、HSP70;检测出弓形虫特异性蛋白SAG1、ROP16、ROP18和GRA1。结论: 从弓形虫速殖子与SW480细胞共培养上清液中获得弓形虫外泌体。 相似文献
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我一直喜欢"怀抱"这两个字。初中三年级军训时,我们要在太阳底下暴晒,长时间立正,上下身必须"纹丝不动"。结果,我坚持了3分多钟就轰然倒下,手疾眼快的后排男同学阿亮一个箭步过来,揽腰把我扶住,并迅速自作主张地把我抱到树荫下……这是我一辈子都不会忘记的镜头。后来的后来,这个叫阿亮的男生就成了我的丈夫。 相似文献
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目的 探讨Wistar大鼠海马生后发育过程中,活化的Caspase-3与凋亡之间的关系. 方法 应用免疫荧光方法观测活化的Caspase-3和赫斯特荧光染料33342(Hoechst 33342)在生后不同时期大鼠海马CA1、CA3区和齿状回(DG)中的表达情况. 结果 在CA1区,活化的Caspase-3的表达在生后7d(P7)达到高峰;在CA3区,P2达到高峰,然后逐渐减弱.在DG,P7后又有所增强,到P14达到高峰,并在所观测的其余时段维持此水平.观测的3个区的凋亡细胞数目都在P7达到高峰,然后逐渐减少. 结论 在大鼠海马生后发育过程中,活化的Caspase-3的表达存在特定的时空格局.活化的Caspase-3在CA1区与CA3区有丝分裂后期细胞和DG神经前体细胞中的作用和机制不同. 相似文献
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目的: 原核表达阴道毛滴虫巨噬细胞迁移抑制因子(macrophage migration inhibitory factor of Trichomonas vaginalis,TvMIF)并制备多克隆抗体。方法: 采用PCR技术扩增TvMIF基因,并克隆至pTG19 T载体,酶切及测序鉴定后,再定向插入pET 30a(+)载体。将重组载体转化至大肠埃希菌BL21(DE3)中,用IPTG诱导蛋白表达。采用镍柱亲和层析法纯化TvMIF蛋白,并免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,蛋白质印迹法检测多克隆抗体。结果: 从阴道毛滴虫cDNA中扩增出TvMIF基因片段,测序结果与基因库收录序列一致。成功构建pET 30a TvMIF重组质粒,重组TvMIF蛋白约为15.5 kDa,以可溶性蛋白形式存在。获得TvMIF重组蛋白的多克隆抗体,蛋白印迹法检出TvMIF的特异性条带。 结论: 成功获得阴道毛滴虫MIF蛋白并制备了多克隆抗体,可用于后续研究阴道毛滴虫致病机制。 相似文献
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NR1、NR2A与PSD-95在生后大鼠海马发育中的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:探讨N-甲基-D-天冬氨酸受体亚单位1(N-methy1-D-aspartate receptor subunit1,NR1)、N-甲基-D-天冬氨酸受体亚单位2A(N-methy1-D-aspartate receptor subunit2A,NR2A)与突触后密度蛋白-95(Postsynapticdensity protein 95,PSD-95)在Wistar大鼠海马生后发育过程中的表达。方法:应用免疫荧光染色方法检测NR1、NR2A与PSD-95在生后不同时期大鼠海马CA1、CA3区和齿状回(DG)中的表达情况。结果:NR1于生后各期海马CA1、CA3区和DG的表达均增强,P14~P21达高峰期后减弱。NR2A于生后在海马CA1和CA3区的表达略有减弱,P4后增强至高峰期P14,然后轻微减弱,在DG中NR2A的表达生后略有减弱,P4后在增强的趋势中于P7、P14和P28后均有不同程度的减弱,高峰期在P28。PSD-95于生后各期海马CA1、CA3区和DG的表达均增强,P21~P28达高峰期后轻微减弱。结论:NR1、NR2A和PSD-95在CA1、CA3区和DG中的表达具有特异的时空分布模式,此模式可能与其在生后发育中发挥的不同生理功能相关。 相似文献
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目的构建人可溶性生长刺激表达基因2(sST2)蛋白的重组真核表达载体,获得高纯度的人sST2重组蛋白。方法根据人sST2基因序列设计引物,利用RT-PCR技术获得人sST2基因;构建人sST2-pcDNA3.1-his(-)重组真核表达载体;脂质体法转染COS7细胞,表达人sST2重组蛋白,并用镍柱亲和层析法纯化;用western blot和ELISA法对人sST2重组蛋白进行鉴定。结果PCR扩增产物用琼脂糖凝胶电泳分析,结果显示产物长度与预期一致,约为1000 bp;同源性比对分析结果显示,人sST2基因成功插入PGH-T载体;用Bam HⅠ和Hin dⅢ对重组真核表达载体双酶切后凝胶电泳分析,结果显示产物电泳位置与预期一致;表达产物经SDS-PAGE电泳结果显示在相对分子质量(M r)约为65000处有一明显条带,与预期蛋白质位置一致;western blot鉴定结果显示人sST2重组蛋白有His标签,ELISA鉴定结果显示人sST2重组蛋白有与抗sST2抗体结合的特异性抗原表位。结论通过重组DNA技术成功构建人sST2基因重组真核表达载体,通过蛋白质纯化技术成功获得人sST2重组蛋白。 相似文献
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目的 探讨Wistar大鼠生后海马发育过程中钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)的表达。 方法 应用免疫荧光方法检测CaMKⅡ在生后不同时期大鼠海马CA1、CA3区和齿状回(DG)中的表达情况(n =48)。结果 CaMKⅡ于生后各期海马CA1区和DG的表达逐渐增强,生后第10天(P10)达高峰期,此后逐渐减弱;于CA3区的表达在P4和P10时均较高。其中,CaMKⅡ在CA3区的表达高于在CA1区和DG的表达,在多形层和分子层的表达高于在锥体细胞层或颗粒细胞层的表达。结论 CaMKⅡ在CA1、CA3区和DG中的表达具有特异性的时空分布模式,这可能与其在生后发育过程中的突触发生,树突、轴突形成,海马的成熟以及学习记忆功能相关。 相似文献