NY-ESO-1致敏树突状细胞诱导的CTL对肝癌细胞株的特异性杀伤作用

目的：探讨肿瘤睾丸抗原NYESO1（New Yorkesophageal1）致敏树突状细胞体外诱导特异性CTL对肝癌细胞株的杀伤作用。方法：重组质粒pGEXESO1经原核诱导表达并纯化GSTESO1融合蛋白肽。重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（rhGMCSF）和白细胞介素4（rhIL4）诱导培养人外周血来源的树突状细胞（dendritic cells, DCs）,经GSTESO1融合蛋白肽致敏后诱导特异性CTL增殖。以此CTL为效应细胞,分别以NYESO1阳性表达的肝癌细胞株HepG2和不表达NYESO1的肝癌细胞株H2P为靶细胞,MTT法检测CTL对肝癌细胞株的杀伤作用。结果：重组质粒pGEXESO1经IPTG诱导,在大肠杆菌中表达相对分子质量约36 000的GSTESO1融合蛋白肽,纯化后的质量浓度为50 μg/ml;经rhGMCSF和rhIL4联合诱导成功培养人外周血DCs,其表型分子HLADR为91.4%、CD86为70.5%、CD83为71.2%、CD80为55.3%。NYESO1致敏的DCs能明显诱导CTL增殖,此CTL对肝癌细胞株HepG2的杀伤率显著高于GST刺激组、未致敏DC组和无DC刺激组(均P<0.05),效靶比为50∶1时杀伤效应达到最高峰\[(53.23±3.78)%,P<0.01\];相同条件下CTL对H2P细胞无特异性杀伤作用。结论： NYESO1抗原致敏的DCs在体外可诱导同种CTL产生和增殖,后者对NYESO1阳性肝癌细胞株具有特异性杀伤效应,该方法为肝癌免疫治疗提供了一条新思路。     

儿童慢性声嘶100例纤维鼻咽喉镜检查分析

<正>关于儿童声嘶的调查资料文献报道甚少.因儿童声带检查有一定难度,间接喉镜检查患儿难合作,暴露不全面,直接喉镜或显微喉镜检查家长难以接受.纤维鼻咽喉镜是一种能在表面麻醉下操作的无创伤性安全检查,大多数患儿能较好合作.本科自1990～1997年,对100例慢性声嘶儿童施行纤维鼻咽喉镜检查,现将结果报告如下.1.临床资料100例中男69例,女31例,年龄2～15岁,病程1月～15年.分为2～3岁、4～6岁、7～9岁、10～12岁、13～15岁五个年龄组,2～3岁10例,男5例,女5例;4～6岁25例,男18例,女7例;7～9岁28例,男20例,女8例;10～12岁20例,男15例,女5例;13～15岁17例,男11例,女6例.所有病例均在表面麻醉下进行纤维鼻咽喉镜检查,其病变情况详见附表.     

金雀异黄素联合5-氟尿嘧啶抑制人结肠癌细胞株 SW480增殖的分子机制

目的：初步探讨金雀异黄素提高结肠癌细胞对5-氟尿嘧啶（5-FU）的敏感性,促进结肠癌细胞凋亡的分子机制。方法选择 SW480结肠癌细胞株为实验对象,将金雀异黄素80μmol／L 和5-FU 30μg／mL 单用或联用48 h 作为药物实验组,另设不加药组为对照组。分别采用实时定量 PCR 和Western 印迹法检测各组细胞的生存素、Bcl-2、p21、caspase3和 caspase 9基因和蛋白表达情况。采用比较阈值法（2－ΔΔCT 法）来确定基因的相对表达量。以β-actin 作为内参照,进行半定量分析计算蛋白相对表达量。电泳迁移率改变分析（EMSA）检测各组细胞 NF-κB 的 DNA 结合活性。多组间样本均数比较采用单因素方差分析,组间两样本均数比较采用 LSD 检验。结果联合用药组的 caspase3、caspase9和p21基因表达（1．903±0．122、2．726±0．050、2．541±0．393）与蛋白表达（0．534±0．077、1．161±0．172、0．463±0．016）高于对照组（1．001±0．052、1．000±0．014、1．001±0．037和0．080±0．043、0．248±0．059、0．139±0．021）、金雀异黄素组（1．559±0．038、2．394±0．095、1．686±0．061和0．335±0．052、0．478±0．059、0．304±0．018）和5-FU 组（1．198±0．063、1．051±0．043、1．399±0．055和0．194±0．015、0．337±0．036、0．231±0．011）,联合用药组的生存素基因与蛋白表达（0．165±0．018和0．216±0．014）低于对照组、金雀异黄素组和5-氟尿嘧啶单组（1．001±0．033、0．775±0．044、0．395±0．030和0．594±0．079、0．375±0．014、0．295±0．014）,差异均有统计学意义（基因表达,F ＝802．865、52．760、39．992、187．288、37．435;蛋白表达,F ＝10．466、44．483、19．490、200．011、45．238;P 均＜0．01）, caspase3、p21在两单药组的表达与对照组相比,差异也有统计学意义（LSD 检验,P ＜0．05）。EMSA 检测显示,与对照组（1067．97±36．01）和5-FU 组（718．83±23．18）相比,金雀异黄素组（461．64±15．41）和联合用药组（585．28±7．82）的 NF-κB 蛋白 DNA 结合活性均有明显降低（LSD 检验,P ＜0．05）。结论金雀异黄素联合5-FU 协同促进结肠癌细胞凋亡,可能通过金雀异黄素抑制 NF-κB 的 DNA 结合活性,进一步上调 caspase3、caspase9、p21以及下调生存素起作用,提示金雀异黄素可能为结肠癌化学治疗提供辅助。     

胃息肉患者的临床与病理特点分析

目的：分析胃息肉胃息肉患者的胃镜表现。方法：回顾性分析103例胃息肉患者的临床资料,按照年龄分段对患者的胃镜表现与病理特点进行分析。结果：男、女胃息肉检出比例分别为2.88％、3.51％（ P＜0.05）;年龄≥45岁、＜45岁胃息肉检出比例分别为5.55％、2.14％（ P＜0.05）。年龄≥45岁组患者胃底、胃体及胃窦部位单发胃息肉的检出率高于年龄＜45岁组（P＜0.05）。年龄≥45岁组患者胃底腺息肉、增生性息肉及肿瘤性息肉的检出率高于年龄＜45岁组（P＜0.05）。无痛胃镜对胃息肉的检出率高于普通胃镜（P＜0.05）。结论：无痛胃镜对胃息肉的检出率高于普通胃镜,女性、中老年人群为胃息肉的多发群体,需给予更多关注。     

genistein增强肿瘤化疗药敏感性以及分子机制的研究进展

肿瘤在化疗中原发和获得性耐药现象很普遍,肿瘤耐药是癌症患者生存率低的重要原因,因此迫切需要新型有效的化疗方案。从蔬菜水果中发现的抗肿瘤生物活性成分一直是研究热点。genistein是一种异黄酮类的植物雌激素,广泛存在于大豆中,具有预防肿瘤和抑制多种肿瘤细胞的生长、侵袭、转移等作用。近来研究表明,genistein还可以增强多种耐药肿瘤细胞对化疗药物的敏感性,减少肿瘤化疗的耐药性,其分子机制涉及细胞增殖、凋亡、血管发生以及核因子κB、苏氨酸蛋白激酶、丝裂原活化蛋白激酶等多条细胞信号传导通路。可以预见,随着genistein研究的深入以及临床应用,将使肿瘤的临床治疗跃上一个新的台阶。     

PEDF对胎盘位置附着异常中异常胎盘微血管床形成的研究

目的探讨色素上皮衍生因子(PEDF)对胎盘位置附着异常中胎盘微血管床形成的影响。方法选择2014年6月至2015年8月我院剖宫产分娩的孕妇48例,其中胎盘植入(PA组)16例,前置胎盘(PP组)16例,对照组16例。胎盘进行病理学检查,免疫组化检测三组胎盘组织的MVD;RT-PCR及Western Blot检测胎盘组织中PEDF和VEGF的m RNA和蛋白质表达。结果①三组胎盘组织中PEDF及VEGF蛋白含量、PEDF及VEGF m RNA含量及MVD比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。②胎盘中PEDF与VEGF、MVD均呈负相关关系(r=-0.778,P=0.000;r=-0.827,P=0.000)。③胎盘血管情况:PA组绒毛血管数量丰富,管径粗大,侵及肌壁间血管;PP组绒毛间血管增生程度有所减轻,未侵及肌层;对照组则无上述变化。结论①胎盘位置异常组中胎盘的PEDF表达过低是导致VEGF负性调节不足以及胎盘病理性血管形成的原因,参与了胎盘位置异常的发生。②三组胎盘中PEDF含量均有显著差异,提示PEDF含量可以反映异常胎盘血管的侵袭程度。     

Nd:YAG激光治疗鼻腔及口腔海绵状血管瘤

1994年至1996年我们采用Nd：YAG激光治疗6例鼻腔、口腔较广泛的海绵状血管瘤，现报告如下。临床资料6例中男性4例，女性2例。年龄14至45岁。病变部位及范围：左侧鼻底波及鼻前庭1例；舌底波及右舌1例；上唇波及鼻前庭1例；悬雍垂、右侧软腭、右舌腭弓1例；左侧舌面前三分之一1例；右侧咽喉弓1例。治疗方法：患者取坐位，病灶粘膜处用l％地卡因行表面麻醉三次，皮肤处用1％利多卡因局部浸润麻醉。采用Nd：YAG医用激光器，波长1．06pm，最大输出功率100W，光纤芯直径0．srnm。将光纤外包层削露1．5～Zcm长，输出功率约45W，边脚踩开关，…     

NY-ESO-1致敏树突状细胞诱导的CTL对肝癌细胞株的特异性杀伤作用

目的:探讨肿瘤睾丸抗原NY-ESO-1(New York-esophageal-1)致敏树突状细胞体外诱导特异性CTL对肝癌细胞株的杀伤作用.方法:重组质粒pGEX-ESO1经原核诱导表达并纯化GST-ESO1融合蛋白肽.重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和白细胞介素4(rhIL-4)诱导培养人外周血来源的树突状细胞(dendritic cells, DCs),经GST-ESO1融合蛋白肽致敏后诱导特异性CTL增殖.以此CTL为效应细胞,分别以NY-ESO-1阳性表达的肝癌细胞株HepG2和不表达NY-ESO-1的肝癌细胞株H2P为靶细胞,MTT法检测CTL对肝癌细胞株的杀伤作用.结果:重组质粒pGEX-ESO1经IPTG诱导,在大肠杆菌中表达相对分子质量约36 000的GST-ESO1融合蛋白肽,纯化后的质量浓度为50 μg/ml;经rhGM-CSF和rhIL-4联合诱导成功培养人外周血DCs,其表型分子HLA-DR为91.4%、CD86为70.5%、CD83为71.2%、CD80为55.3%.NY-ESO-1致敏的DCs能明显诱导CTL增殖,此CTL对肝癌细胞株HepG2的杀伤率显著高于GST刺激组、未致敏DC组和无DC刺激组(均P<0.05),效靶比为50 ∶1时杀伤效应达到最高峰[(53.23±3.78)%,P<0.01];相同条件下CTL对H2P细胞无特异性杀伤作用.结论: NY-ESO-1抗原致敏的DCs在体外可诱导同种CTL产生和增殖,后者对NY-ESO-1阳性肝癌细胞株具有特异性杀伤效应,该方法为肝癌免疫治疗提供了一条新思路.     

Genistein联合5-FU对人结肠癌细胞株SW480增殖与凋亡的影响

目的:研究金雀异黄素(genistein)与5-FU对人结肠癌细胞株SW480增殖、凋亡的影响.方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度genistein和5-FU单用或联用对结肠癌细胞株SW480的抑制作用;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡情况,并在透射电镜下观察凋亡细胞超微结构的改变;流式细胞术(FCM)分析药物作用后细胞周期的改变.结果:1)genistein与5-FU单用均能抑制SW480细胞的增殖,存在浓度依赖性和时间依赖性.2)genistein与5-FU联合作用时对抑制SW480细胞增殖有协同相加效应,在两者联合作用48 h,浓度分别为80 μmol/L和30 μg/mL时协同作用最明显(CI=0.51).3)TUNEL技术观察到genistein与5-FU单用或双用均可引起SW480细胞凋亡,且以双药效果为著.4)电镜观察到凋亡细胞核电子密度增加,核碎裂,可见凋亡小体,以双药联用最为显著.5)FCM分析SW480细胞经genistein处理后细胞生长阻断于G2期,与5-FU作用机制不同.结论:genistein可通过诱导细胞凋亡协同5-FU对大肠癌细胞株SW480的杀伤作用,为提高化疗药对结肠癌的治疗疗效提供新思路.