携带flk1的重组减毒沙门氏菌的构建及其抗肿瘤血管生成的研究

目的:观察携带鼠血管内皮生长因子受体-2(vascular endothelial growth factor receptor-2,flk1)的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌诱导的flk1特异性免疫应答及抗肿瘤血管生成作用.方法:构建真核表达载体pcDNA3.1-flk1,并将其转化到减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7207中,体外感染小鼠巨噬细胞,用Western印迹对表达产物进行鉴定,将重组菌口服免疫小鼠,分析免疫后小鼠体内的特异性CTL应答.采用藻酸盐微囊实验观察其对体内肿瘤血管生成的影响.结果:免疫印迹试验表明携带pcD-NA3.1-flk1表达载体的重组菌感染的小鼠巨噬细胞能表达flk1蛋白,免疫小鼠脾淋巴细胞产生针对flk1的特异性CTL活性.重组疫苗菌的免疫能够明显抑制小鼠体内肿瘤血管的形成.结论:携带flk1的重组减毒沙门氏菌经口服免疫,诱导小鼠产生抗flk1的特异性免疫反应,且能明显产生抗肿瘤血管生成作用.     

基底节区高血压脑出血治疗分析

高血压脑出血是原发性脑出血最为常见的类型,约75%患者有高血压病病史[1],出血部位以基底节区多见.目前,对中量(30～40ml)出血且具有手术指征的患者,选择何种治疗方法仍存争议.天津市环湖医院自2006年1月-2008年5月分别采用保守治疗、锥颅血肿引流术和开颅血肿清除术治疗142例中量基底节区高血压脑出血患者,为探讨更为适宜的治疗方法,笔者对3种方法进行比较,报告如下.     

AAV—AS联合环磷酰胺治疗大鼠皮下胶质瘤效果观察

目的观察腺相关病毒为载体血管抑素重组质粒（AAV-AS）联合环磷酰胺（CTX）治疗大鼠皮下胶质瘤的效果。方法大鼠皮下抑制胶质瘤C6细胞,建立荷C6胶质瘤大鼠模型,当肿瘤体积达250～280mm3时,随机分为对照组、CTX组、AAV-AS组及联合组,分别腹腔内注射生理盐水、CTX、AAV-AS、CTX＋从V—AS。每隔3d测量肿瘤的长、短径计算体积;于22d后处死大鼠,采用免疫组化染色法标记抗CD31抗体计算瘤组织中的微血管密度（MVD）,TUNEL法测算肿瘤细胞凋亡指数（AI）。结果对照组肿瘤体积为（2060．339±82．028）mm3,MVD为（20±3）条／HP,AI为1．442±0．329;CTX组分别为（1763．867±124．237）mm3、（18±5）条／HP、1．719±0．464,AAV—AS组分别为（1229．910±141．646）mm3、（13±2）条／HP、3．653±0．238,联合组分别为（1098．320±70．880）mm3、（8±3）条／HP、3．886±0．361。联合组肿瘤体积和MVD与其他组比较,P均〈0．05;联合组AI与对照组及CTX组比较,P均〈0．05,但与AAV—AS组比较,P〉0．05。结论AAV-AS联合CTX治疗大鼠皮下胶质瘤,可减小肿瘤体积,降低血管密度,间接促进肿瘤细胞凋亡。     

血管内降温治疗重型颅脑创伤安全性及有效性的研究

目的 对血管内降温治疗急性重型颅脑创伤患者的安全性及有效性进行前瞻性的研究.方法 共30例患者,均于伤后12 h内行血管内降温治疗,体内温度控制在33℃～35℃,持续4-7 d,平均(121.5±13.7)h.患者均于伤后6个月时根据COS评估法判定疗效.结果 经6个月随访,良好11例,中残5例,重残6例,植物生存6例,死亡2例.本组患者没有出现与血管内降温系统相关的严重并发症.结论 血管内降温具有降温速度快、目标温度维持稳定、波动性小以及复温速度容易控制等优点.对于重型颅脑创伤的患者是一种安全、有效的治疗方法.     

腺相关病毒介导重组血管抑素联合雷公藤红素对大鼠颅内C6胶质瘤的抗血管生成作用

目的:腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)介导的重组血管抑素(angiostatin,AS)联合应用雷公藤红素(celastrol)治疗大鼠颅内C6胶质瘤,观察其对肿瘤体积、新生血管密度及肿瘤细胞凋亡的影响,探讨抗血管生成重组基因联合雷公藤红素对胶质瘤治疗的前景。方法:建立颅内原位荷C6脑胶质瘤大鼠模型,7d后随机分为4组,分别给予0.9%氯化钠溶液(作为对照)、AAV-AS、雷公藤红素及两者联合用药。每隔7d行头部强化MRI检查,计算肿瘤体积。于22d后处死动物,检测AS蛋白表达、血管密度及肿瘤细胞凋亡情况。结果:联合治疗组及AAV-AS治疗组均检测到AS蛋白表达,证实基因转导成功。联合治疗组第22天时肿瘤体积、血管密度和凋亡指数均与对照组、雷公藤红素组及AAV-AS治疗组相比差异有统计学意义(P<0.05),联合治疗可以抑制肿瘤生长,降低新生血管密度,促进肿瘤细胞凋亡。结论:基因治疗联合雷公藤红素可通过抑制胶质瘤血管生成而抑制肿瘤生长;两者联合应用具有协同作用,可弥补两者单独应用的不足之处。     

携带flk-l的减毒沙门疫苗菌抗胶质瘤血管生成的研究

目的观察表达鼠血管内皮生长因子受体2(VEGFR2,flk-1)的重组减毒鼠伤寒沙门疫苗菌对胶质瘤荷瘤小鼠的抗肿瘤血管及肿瘤生长抑制作用。方法构建真核表达载体pcDNA3 1.-flk-l,通过电转化法将pcDNA3 1.-flk-1导入减毒鼠伤寒沙门菌SL7207中,经由胃管饲于C57BL/6J小鼠,对胶质瘤荷瘤小鼠进行免疫预防及治疗。通过观察免疫动物的生存期,免疫荧光法检测肿瘤血管密度,评价重组疫苗菌的抗血管及肿瘤生长抑制作用。分离免疫小鼠的脾细胞,分析重组疫苗菌免疫后小鼠体内的特异性细胞毒性T细胞(CTL)应答。结果重组疫苗菌免疫能够明显减少肿瘤血管密度,延缓胶质瘤的生长,延长小鼠生存期,获得明显的抗肿瘤效果。重组疫苗菌免疫后可诱导小鼠脾淋巴细胞产生针对flk-l的CTL活性。结论表达鼠flk-l的重组减毒鼠伤寒沙门疫苗菌经口服免疫,可打破小鼠对于自身抗原flk-1的免疫耐受,诱导小鼠产生抗flk-1的特异性免疫反应,特异性杀伤肿瘤血管内皮细胞,预防和治疗小鼠胶质瘤。     

靶向抗原递呈细胞激活Flk1重组减毒鼠伤寒沙门菌的构建及其抑制树突状细胞凋亡的初步研究

目的 观察靶向抗原递呈细胞激活血管内皮生长因子受体-2(Flk1)的重组减毒鼠伤寒沙门菌对树突状细胞凋亡的抑制作用.方法 构建含Flk1与靶向抗凋亡基因BAK siRNA的重组质粒载体pFlk1-U6BAK,将其转化至减毒鼠伤寒沙门菌株中,携带pFlk1-U6BAK和pFlk1的重组减毒鼠伤寒沙门菌分别感染经体外培养的小鼠树突状细胞;Western blotting法检测树突状细胞Flk和BAK表达水平,MTT法检测树突状细胞增殖活性.结果 成功构建了含Flk1和靶向抗凋亡基因BAK siRNA的重组质粒载体pFlk1-U6BAK.经携带pFlk1-U6BAK的重组减毒鼠伤寒沙门菌感染后,树突状细胞在稳定表达Flk的同时,BAK表达水平显著降低;而经携带pFlk1-U6BAK的重组减毒鼠伤寒沙门菌感染后,树突状细胞增殖活性明显升高.结论 携带pFlk1-U6BAK的重组减毒鼠伤寒沙门菌可以在稳定表达Flk的同时,通过下调凋亡基因BAK表达水平而抑制树突状细胞凋亡,有望成为较为有效的抗肿瘤血管生成疫苗.     

Anti-angiogenesis Effect on Glioma of Attenuated Salmonella Typhimurium Vaccine Strain with flk-1 Gene

To investigate the anti-vasculature effects and the anti-glioma effects of attenuated Salmonella typhimurium vaccine strain expressing VEGFR2 (flk-1) gene, plasmid pcDNA3, 1-flk1 was constructed and electro-transfected into live attenuated Salmonella typhimurium strain SL7207. Mouse models of intracranial G1261 glioblastoma were treated with an orally administered attenuated Salmonella typhimurium expressing flk-1 gene. The survival period was recorded and vessel density was observed by immunofluorescence. CTLs activity was measured by MTT assay. Our results showed that attenuated Salmonella typhimurium vaccine strain expressing flk-1 gene could significantly inhibit glioblastoma growth, reduce vessel density, prolong the survival period and improve the survival rate in these mice. The flk-1 specific CTLs activity was increased obviously after the vaccination. Our study showed that attenuated Salmonella typhlmurium vaccine strain expressing flk-1 gene could break peripheral immune tolerance a in glioma gainst this self-antigen and kill endothelial cells by the orally administered vaccine and can be used for both prophylactic and therapeutic purposes.     

完全前额叶孤立术的手术技术及适应证初探

目的额叶癫痫致痫灶切除术后有效率低于颞叶癫痫,对于术后无效或复发病例目前仍缺乏有效的治疗方法,探讨采用完全额叶孤立术解决这一问题的可行性。方法利用尸头进行前额叶相关术中显微解剖研究,指出前额叶切开的解剖标志,并对1例致痫灶切除术后无效的额叶癫痫患者施行额叶孤立术,为保证前额叶彻底孤立,在额叶切开的同时离断前连合和胼胝体前部。结果术后随访16个月,虽然病侧脑电图仍偶有类尖波发放,但临床发作完全停止。结论前额叶孤立术是治疗额叶癫痫的有效方法,手术的关键是将目标区域即前额叶与脑的其他区域完全离断,切开前连合和胼胝体前部保证这一目的的实现。     

前额叶孤立术治疗顽固性癫痫

目的总结8例大脑前额叶孤立术治疗顽固性癫痫的临床经验,探讨采用完全额叶孤立术治疗顽固性癫痫的可行性。方法以大脑半球切开术及后象限切开术为基础术式,将彻底孤立致痫灶的概念引入这种病例的治疗中,对8例致痫灶切除术后无效的额叶癫痫患者施行了额叶孤立术,为保证前额叶彻底孤立,在额叶切开的同时离断前连合和胼胝体前部。术后随访16个月,16个月后对8例患者统一以Engel分级法评估手术疗效。结果 8例患者手术过程均顺利,2例术后发热,行腰大池引流术,均恢复良好。术后疗效评估Engel分级Ⅰ级(术后癫痫停止发作)5例,Ⅱ级(每年发作1~2例)2例,Ⅲ级(发作频率减少75%以上)1例。结论前额叶孤立术可能是治疗难治性额叶癫痫的比较有效的方法之一。