调控Smo活性对成年大鼠神经干细胞增殖和迁移的影响

目的 探讨Shh信号通路中G蛋白偶联受体Smoothened（Smo）对成年大鼠神经干细胞（ANSCs）增殖、迁移的影响并阐明其作用机制。方法 培养ANSCs,分别添加Smo的激动剂Purmorphamine及其抑制剂Cyclopamine,细胞增殖-毒性实验（CCK8）检测其对ANSCs增殖的影响;细胞划痕实验检测其对ANSCs迁移能力的影响;实时荧光定量PCR（RT-PCR）技术检测Sonic Hedgehog（Shh）信号通路的细胞表面Patched蛋白（Ptch1）、G蛋白偶联受体Smo、转录因子（Gli1）以及神经导向因子（Slit1）和脑源性神经营养因子（BDNF）表达量的变化。结果 Smo激动剂PM对ANSCs的增殖有明显促进作用,48 h后PM组ANSCs的吸光度明显升高（P<0.01）;PM可以促进ANSCs的迁移,48 h后的PM组ANSCs划痕面积显著减小（P<0.01）;Smo抑制剂CPM对ANSCs的增殖和迁移均有显著的抑制作用;RT-PCR实验显示PM组细胞中的Ptch1、Smo、Gli1及Slit1、BDNF表达水平均明显增加（P<0.05）。结论 调控Smo的活性可以促进或抑制成年神经干细胞的增殖和迁移,其作用机制可能与调节BDNF和Slit1的表达有关。     

非交联染色质免疫共沉淀及其二代测序技术建库方法的优化

目的优化非交联染色质免疫共沉淀及其二代测序（Native ChIP-seq）技术，简化操作步骤，得到高质量ChIP-seq数据。方 法裂解细胞，MNase切割DNA释放核小体，用组蛋白修饰的特异性抗体将组蛋白与DNA的复合物进行免疫共沉淀，蛋白酶K 消化后进行DNA纯化，染色质免疫共沉淀（ChIP）产物用Tn5转座酶建库与传统建库两种方法进行文库构建并测序。结果与 传统建库方法相比，Tn5转座酶建库经过Tn5片段化后直接进行目的DNA的扩增，操作简单，更加省时，效率更高；IGV可视化 信号分布峰图显示两种建库方式获得的富集峰基本相同；两种建库方法获得的测序数据中，Tn5转座酶建库比传统建库获得更 多的富集峰；Tn5转座酶建库后结果显示重复性良好，信噪比达到50%以上。结论Tn5转座酶建库能提高建库效率并得到更好 的数据质量，适用于组蛋白修饰的检测，为表观遗传研究提供更好的技术选择。