类精神分裂症小鼠视觉恐惧模型建立及TRPC3、TRPC6在脑的表达

目的建立基于图形视觉的条件性恐惧实验范式,探究类精神分裂症小鼠在视觉恐惧建立和消退过程中僵直度的变化并考察瞬时感受器电位C离子通道3(Transient receptor potential canonical channel,TRPC3)、TRPC6在脑内的表达变化。方法将48只C57小鼠随机分为正常对照组、空白对照组、苯环利定(Phencyclidine,PCP)组、苯环利定+氯氮平(Clozapine,CLZ)组,每组12只,后二组小鼠皮下注射苯环利定建立类精神分裂症小鼠模型,其中苯环利定+氯氮平组给予氯氮平治疗,然后空白对照组、苯环利定+氯氮平组、苯环利定组小鼠在改装后superFcs型条件性恐惧实验系统进行视觉恐惧训练,并在随后的四天恐惧消退期内每日给予视觉刺激,记录僵直度变化;条件性恐惧三组及正常对照组小鼠行全脑切片用于免疫组化染色以检测TRPC3、TRPC6在脑的表达。结果(1)在恐惧训练期(Day1),苯环利定+氯氮平组的僵直度显著大于空白对照组和苯环利定组(P0.05),而苯环利定组僵直度大于空白对照组,差异无显著意义(P0.05),苯环利定+氯氮平组与苯环利定组相比无显著意义(P0.05)。三组实验小鼠的僵直度在测试期第1天(Day2)较训练期(Day1)均增大,尤其是苯环利定+氯氮平组和苯环利定组均显著增大(均P0.05);之后在测试期第2,3,4天(Day3-5)三组实验小鼠僵直度逐渐减小,苯环利定组与前一天比较均有显著性差异(均P0.05),苯环利定+氯氮平组在测试期第2、3与前一天比较均有显著性差异(均P0.05),而空白对照与前一天比较均无显著性差异(均P0.05)。(2)免疫组化结果显示与正常对照组相比,苯环利定+氯氮平组、苯环利定组、空白对照组TRPC3阳性细胞面积百分比在海马CA2区明显减小,差异有统计学意义(P0.05)。在前额叶与苯环利定组相比苯环利定+氯氮平组明显减小,差异有统计学意义(P0.05);苯环利定+氯氮平组与空白对照组相比明显减小,差异有统计学意义(P0.05);小脑苯环利定组与正常对照组相比明显增大,差异有统计学意义(P0.05);在小脑中与苯环利定组相比,苯环利定+氯氮平组TRPC3阳性细胞面积百分比明显减小,差异有显著性(P0.05)。TRPC3在海马其余各区、顶叶无明显变化(P0.05)。TRPC6阳性细胞面积百分比在前额叶、小脑、海马分布和表达无明显变化(P0.05),与苯环利定+氯氮平组相比,苯环利定组和正常对照组TRPC6阳性细胞面积百分比在顶叶明显减小,差异有统计学意义(P0.05);在顶叶与正常对照组相比空白对照组TRPC6阳性细胞面积百分比明显增大,差异有统计学意义(P0.05)。结论本研究成功建立了基于图形视觉的条件性恐惧实验范式。类精神分裂症小鼠易产生视觉条件性恐惧,消退较快;氯氮平治疗对恐惧消退的影响不显著。TRPC3、TRPC6在脑内不同区域分布和表达差异,提示可能参与类精神分裂症小鼠视觉恐惧活动过程。     

TRPC3和TRPC6分子在类精神分裂症小鼠模型中的表达

目的建立苯环利定诱导的类精神分裂症小鼠模型,进一步用来观察TRPC3、TRPC6蛋白在大脑的分布和表达变化。方法将24只8周龄健康雄性C57BL/6小鼠分为PCP(phencyclidine,苯环利定)组(n=12)及对照组(n=12),实验样本适应环境7天,从第2周开始连续皮下注射PCP(注射用量1.5 mg/kg/d,注射体积4 m L/kg/d)。第三周为药物洗脱期。第四周用免疫组化检测TRPC3、TRPC6蛋白在脑的分布和表达变化。结果 (1)免疫组化检测结果进一步显示,在海马CA1、CA2、CA3区,PCP组TRPC3阳性细胞平均光密度比对照组十分明显地增加,差异有统计学意义(P0.01),PCP组TRPC3阳性细胞面积比对照组十分明显地上升,差异有统计学意义(P0.01)。在前额叶和顶叶PCP组TRPC3阳性细胞平均光密度值十分明显地高于对照组,差异有统计学意义(P0.01)。但在小脑无十分明显地变化。前额叶、顶叶和小脑PCP组TRPC3阳性细胞面积十分明显地小于对照组,差异有统计学意义(P0.01)。(2)免疫组化检测结果进一步显示,在海马CA1、CA2、CA3区,PCP组的TRPC6阳性细胞平均光密度值十分明显地高于对照组,差异有统计学意义(CA1和CA2区P0.01,CA3区P0.05)。在海马CA1区PCP组的TRPC6阳性细胞面积十分明显地大于对照组,差异有统计学意义(P0.01)。然而在海马CA2区和CA3区,PCP组的TRPC6阳性细胞面积稍微高于或低于对照组,差异没有统计学意义(P0.05)。在前额叶和顶叶PCP组TRPC6阳性细胞平均光密度对照组显著增大,差异有统计学意义(P0.01)。但在小脑没有十分明显地变化(P0.05)。在前额叶、小脑PCP组TRPC6阳性细胞面积十分明显地低于对照组,差异有统计学意义(前额叶P0.01,小脑P0.05)。顶叶阳性细胞面积对照组差异无统计学意义(P0.05)。结论在类精神分裂症小鼠模型中,TRPC3和TRPC6在脑中分布和表达均有所变化,这意味着它们在上述模型中具有潜在的靶标可能。