干扰肥胖小鼠心肌组织中CPT1b的表达对活性氧簇代谢的影响

摘 要 目的 研究干扰肥胖小鼠心肌CPT1b的表达对心肌活性氧簇（ROS）的影响。方法 4周龄的雄性C57小鼠，随机分为三组，分别为正常对照组（N-mock）、肥胖对照组（O-mock）及肥胖干预组（O-CPT1b），对肥胖组小鼠进行高脂饮食造肥胖模型。6周龄时，向干预组小鼠心肌注射靶向CPT1b （O-CPT1b）或靶向无关基因（N-mock、O-mock）的重组慢病毒。继续喂养10周后，取小鼠心肌，Western blot检测CPT1b的蛋白表达量；行油红O染色检测心肌组织中性脂质含量；使用冷冻切片染色法及流式细胞术检测心肌细胞中 ROS。结果 RT-PCR 和Western blot结果显示，携带CPT1b基因的短发夹RNA显著下调了O-CPT1b小鼠心肌组织中CPT1b的表达；肥胖引起心肌组织内中性脂质蓄积增多，下调CPT1b的表达增加了心肌内中性脂质的含量；高脂饮食还导致心肌ROS的含量显著增加，而下调CPT1b的表达可以改善甚至逆转这一进程。结论 CPT1b在肥胖小鼠心肌的ROS生成增多中起重要作用，下调小鼠心肌组织的CPT1b表达或许会通过减轻心肌氧化应激而改善肥胖性心脏重构。     

高同型半胱氨酸血症促进白介素-8的表达及辛伐他汀的拮抗作用

目的 研究高同型半胱氨酸血症(Hbcy)对白介素-8(IL-8)的表达和NF-κB活化的影响，以及辛伐他汀对此的拮抗作用。方法 21只雄性新西兰兔随机分成3组，对照组(正常饮食)，蛋氨酸组(高蛋氨酸饮食)，辛伐他汀组(高蛋氨酸饮食 辛伐他汀)，12周后，测定血浆同型半胱氨酸(Hcy)，ELNA方法检测IL-8蛋白水平，免疫组化检测血管NF-κB表达和活化。结果 高蛋氨酸饮食显著增加了血浆Hcy水平，蛋氨酸组IL-8的产生增加，主动脉内皮细胞NF-κB表达增强。辛伐他汀降低IL-8水平，减少了NF-κB的表达和活化。结论 Hbcy诱导NF-κB的活化，从而促进IL-8的表达，该作用可以被辛伐他汀所拮抗。     

糖尿病和血管疾病:病理生理、临床结果和治疗 第二部分

在第一部分中 ,讨论了连接糖尿病和动脉粥样硬化 (AS)的病理生理过程。在这部分中 ,将着重讨论糖尿病AS性血管疾病的临床表现和治疗策略。1　糖尿病病人AS的临床表现1.1　冠状动脉疾病 :糖尿病使冠状动脉疾病进展的危险增加 2 4倍。对于有糖尿病而没有冠状动脉疾病证据的病人 ,     

白杨素抑制血小板源性生长因子诱导的血管平滑肌细胞增殖的机制研究

目的研究白杨素对血小板源性生长因子(PDGF)-BB诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响及细胞周期调控机制。方法WST-1法测定VSMCs增殖,5-溴-2'-脱氧尿苷掺入法测定DNA合成,流式细胞术分析VSMCs细胞周期,Western blot法测定细胞周期关键调控因子周期蛋白依赖性激酶(CDK)4、CDK6和CDK抑制物p27^kip1的表达。结果20ng/ml PDGF-BB显著增强VSMCs增殖及DNA合成,而白杨素呈剂量依赖性抑制PDGF-BB刺激的VSMCs增殖及DNA合成。12.5μmol/L白杨素预处理使PDGF-BB刺激的VSMCs阻滞于G₀/G₁期,并能显著降低VSMCs中CDK4和CDK6的蛋白表达水平,同时升高p27^kip1蛋白水平。结论白杨素抑制PDGF-BB刺激的VSMCs增殖,其机制可能与CDK4和CDK6表达下调而p27^kip1表达上调导致的细胞周期阻滞有关。     

糖尿病和血管疾病:病理生理、临床结果和治疗 第一部分

糖尿病在全世界影响了大约一亿人，其中5％～10％为1型糖尿病，90％～95％为2型糖尿病。2型糖尿病的发生可能与引起肥胖的生活方式有关。血管疾病是糖尿病病人致死，致残的主要原因。大血管病变包括动脉粥样硬化(AS)和中膜钙化。小血管病变，如视网膜病和肾病是致盲和终末肾衰的主要原因。内     

美托洛尔下调CaMKⅡδC-p38通路对异丙肾上腺素诱导心力衰竭的保护机制

目的研究美托洛尔下调CaMKⅡδC-p38通路对异丙肾上腺素诱导心力衰竭的保护机制。方法40只SD大鼠随机分成四组,正常对照组(Control)、异丙肾上腺组(Iso)、异丙肾上腺 美托洛尔组(Iso Meto)和美托洛尔组(Meto),每组10只,所有动物均自由进食进水。(1)Iso组大鼠背部皮下注射Iso 5 mg/(kg·d),连续10 d;对照组背部皮下注射相同体积的生理盐水;Iso Meto组大鼠背部皮下注射Iso 5 mg/(kg·d),连续10 d,在背部皮下注射Iso前1天开始Meto 10 mg/(kg·d)灌胃,连续4周;Meto组给予10 mg/(kg·d),连续4周灌胃;(2)所有大鼠饲养4周后,采用Millar P-V Loop导管经颈动脉插管至左心室,使用Powerlab生理记录系统测量血流动力学相关指标;统计各组大鼠心脏重量和心脏重量/体重比值;(3)TUNEL法和Caspase-3活性检测心肌细胞凋亡;(4)ELISA分析CAMKⅡ活性;(5)Western blot检测CaMKⅡδ、p-CaMKⅡδ、CaMKⅡδC和MAPKs家族(p-38、JNK、ERK)、和凋亡相关基因Bcl-2/Bax的蛋白表达水平。结果40只SD大鼠实验过程精神状态好,进食进水正常,无呼吸困难及水肿。(1)Iso和Meto干预SD大鼠心脏重塑和血流动力学指标有显著改变,与Control组相比,Iso组心脏重量和心脏重量指数明显增加(P<0.05);而Iso Meto组心脏重量和心脏重量指数明显低于Iso组(P<0.05);大鼠体重、肝重和肺重四组间也无明显差异。大鼠血流动力学指标心率(HR)、平均动脉血压(MBP)和左室舒张末压(LVEDP)Iso组明显高于Control组;但左室压力变化速率(LV±dp/dt max) Iso组明显低于Control组(P<0.05);而Iso Meto组HR、MBP和LVEDP明显低于Iso组(P<0.05),但Iso Meto组±dp/dtmax明显高于Iso组(P<0.05);(2)Iso组SD大鼠心肌细胞TUNEL阳性细胞数和Caspase-3活性明显高于Control组(P<0.05);Western杂交分析检测Iso组抗凋亡蛋白bcl-2表达明显低于Control组(P<0.05),而促抗凋亡蛋白Bax表达明显高于Control组;(3)CaMKⅡ活性分析结果显示Iso组明显高于Control组(P<0.05)。说明Iso诱导了明显的心肌细胞凋亡,并且心肌细胞凋亡和CaMKⅡ活性明显正相关;(4)CaMKⅡδ异构体、MAPKs家族在β1-AR持久兴奋的SD大鼠心肌表达情况,我们用Western blot方法分析结果显示Iso组CaMKⅡδC和p-CaMKⅡδ、p38 MAPK、JNK蛋白表达明显高于Control组(P<0.05),但与Control组比较,Iso组ERK蛋白表达明显减少(P<0.05)。与Iso组相比,β1-AR阻滞剂Meto可减少CaMKⅡδC和p-CaMKⅡδ、p38 MAPK、JNK蛋白表达,增加ERK蛋白表达(P<0.05)。结论(1)持久兴奋β1-AR激活CaMKⅡδC-p38通路诱导心肌细胞凋亡,导致心肌重塑、心力衰竭;(2)β1-AR阻断剂美托洛尔可阻断β1-AR持久激活CaMKⅡδC—p38导致心肌细胞凋亡途径,对心脏有保护效应。     

美托洛尔下调CaMKIIδC-p38通路对异丙肾上腺素诱导心力衰竭的保护机制

目的研究美托洛尔下调CaMKIIδC—p38通路对异丙肾上腺素诱导心力衰竭的保护机制。方法40只SD大鼠随机分成四组，正常对照组（Control）、异丙肾上腺组（Iso）、异丙肾上腺＋美托洛尔组（Iso＋Meto）和美托洛尔组（Meto），每组10只，所有动物均自由进食进水。（1）Iso组大鼠背部皮下注射Iso5my／（kg·d），连续10d；对照组背部皮下注射相同体积的生理盐水；Iso＋Meto组大鼠背部皮下注射Iso5mg／（kg·d）．连续10d，在背部皮下注射Iso前1天开始Meto10mg／（kg·d）灌胃，连续4固；Meto组给予10mg／（kg·d），连续4周灌胃；（2）所有大鼠饲养4周后，采用MillarP-V Loop导管经颈动脉插管至左心室，使用Powerlab生理记录系统测量血流动力学相关指标；统计各组大鼠心脏重量和心脏重量／体重比值；（3）TUNEL法和Caspase-3活性检测心肌细胞凋亡；（4）ELISA分析CAMKII活性；（5）Westernblot检测CaMKIl8、p-CaMKIIδ、CaMKIIδC和MAPKs家族（p-38、JNK、ERK）、和凋亡相关基因Bcl-2／Bax的蛋白表达水平。结果40只sD大鼠实验过程精神状态好，进食进水正常，无呼吸困难及水肿。（1）Iso和Meto干预SD大鼠心脏重塑和血流动力学指标有显著改变，与Control组相比．Iso组心脏重量和心脏重量指数明显增加（P〈0．05）；而Iso＋Meto组心脏重量和心脏重量指数明显低于Iso组（P〈0．05）；大鼠体重、肝重和肺重四组间也无明显差异。大鼠血流动力学指标心率（HR）、平均动脉血压（MBP）和亢事舒张末压（LVEDP）Iso组明显高于Control组；但左室压力变化速率（LV±dp/dt max）Iso组明显低于Control组（P〈0．05）；而Iso＋Meto组HR、MBP和LVEDP明显低于Iso组（P〈0．05），但Iso＋Meto组±dp／dtmax明显高于Iso组（P〈0．05）；（2）Iso组SD大鼠心肌细胞TUNEL阳性细胞数和Caspase-3活性明显高于Control组（P〈0．05）；Western杂?     

高同型半胱氨酸血症致血管炎症作用

目的 探讨高同型半胱氨酸血症是否引发兔主动脉的血管炎症反应。方法 20只雄性新西兰兔随机分成对照组（正常饮食）和蛋氨酸组（高蛋氨酸饮食），每组各10只，12周后测定血浆同型半胱氨酸。观察主动脉病理变化，酶联免疫吸附法检测白细胞介素8蛋白水平，免疫组织化学检测血管核因子κB的表达和活化。结果 高蛋氨酸饮食显著增加血浆同型半胱氨酸水平，蛋氨酸组主动脉切片发现内皮细胞脱落，局部内膜增厚；白细胞介素8分泌增加；主动脉内皮细胞核因子κB表达增强。结论 高同型半胱氨酸血症可以导致血管炎症反应。而炎症反应是高同型丰胱氨酸血症加速动脉粥样硬化潜在的分子机制之一。     

腺相关病毒介导的转人C－反应蛋白基因诱导大鼠高血压形成

目的研究过度表达人C-反应蛋白（hCRP）对大鼠血压的影响及其相关机制。方法以重组腺相关病毒为载体，介导hCRP基因（CRP组）或对照基因（GFP组）在大鼠体内表达，观察实验动物血压变化，并以westernblot方法检测大鼠主动脉血管紧张素l型受体（AT1），血管紧张素2型受体（AT2）的表达。结果CRP组大鼠血压从基因注射后2月开始升高，升高血压的效应在基因导入3月后保持稳定（与对照组相比约升高21mmHg）并持续到实验结束。而GFP组血压无明显变化。Western blot结果显示，与对照组相比，CRP组大鼠主动脉AT1蛋白水平升高，而AT2蛋白水平降低。结论重组腺相关病毒介导的hCRP过表达可以导致大鼠血压升高，其机制与增加主动脉AT1表达，降低AT2表达有关。     

β1-AR持久兴奋通过CaMKIIδ-内质网应激凋亡通路导致心力衰竭的机制

目的研究β1-AR持久兴奋通过CaMKIIδ内质网应激（ERS）凋亡通路导致心力衰竭的机制。方法30只SD大鼠随机分成三组，正常对照组（Control）、异丙肾上腺组（Iso）和、异丙肾上腺＋美托洛尔组（Iso＋Meto），每组10只，所有动物均自由进食进水。（1）Iso组大鼠背部皮下注射Iso5mg／（kg·d），连续10d；Control组背部皮下注射相同体积的生理盐水；Iso＋Meto组大鼠背部皮下注射Iso5mg／（kg·d），连续10d，在背部皮下注射Iso前一天开始Meto 10mg／（kg·d）灌胃，连续4周；（2）所有大鼠饲养4周后，采用美国Millar公司P—V Loop导管经颈动脉插管至左心室，使用Pow—erlab生理记录系统测量血流动力学相关指标；统计各组大鼠心脏重量和心脏重量／体重比值；（3）TUNEL法和Caspase-3活性检测心肌细胞凋亡；（4）Western blot分析CaMKIIδERS相关基因（GRP78、CHOP和caspase-12）和凋亡相关基因Bcl-2／Bax的表达水平。结果30只SD大鼠实验过程精神状态好，进食进水正常。（1）与Control组比较，Iso组SD大鼠心脏重塑和血流动力学指标有显著性差异（P〈0．05）；而Iso＋Meto组心脏重塑和血流动力学指标与Iso组相比明显改善（P〈0．05）；（2）TUNEL法原位检测各组大鼠心肌细胞凋亡示与Control组比较，Iso组TUNEL阳性细胞数明显增高（P〈0．05）；而Iso＋Met组明显低于Iso组（P〈0．05）。心肌细胞Caspase-3活性和TUNEL凋亡阳性细胞核指数各组变化一致。Western blot检测心肌细胞凋亡相关基因bcl-2／Bax蛋白表达。与Control组相比，Iso组bcl-2蛋白表达明显降低和Bax蛋白表达明显增加（P〈0．05）；而Iso＋Met组与Iso组相比,bcl-2明显增高和Bax明显降低（P〈0．05）；（3）Western blot分析CaMKIIδp-CaMKIIδ白表达显示，与Control组比较，Iso组CAMKII活性和p-CaMKIIδ蛋白表达明显增加；而Iso＋Meto组与Iso组相比，CAMKII活性和p-