表达人JNK基因重组腺病毒的构建和鉴定

目的 制备表达人c-jun氨基末端激酶(JNK)复制缺陷型重组腺病毒.方法 将重组穿梭载体pAdTrack-CMV-WT-JNK线性化后,与pAdEasy-1共转化大肠杆菌BJ5138,进行同源重组得到重组腺病毒载体.将重组腺病毒载体转染入包装细胞HEK293内制备复制缺陷型重组腺病毒,并经PCR及DNA测序鉴定.结果 JNK重组腺病毒载体能有效转染HEK293细胞并在细胞内成功包装,5 d后可以观察到绿色荧光蛋白(GFP)明显表达,搜集的病毒经过PCR扩增得到特定JNK基因片段并测序鉴定.动物实验证实构建的Ad-WT-JNK能有效在肝组织表达.结论 该研究成功构建了JNK重组腺病毒载体及相应重组腺病毒颗粒,为进一步研究JNK的作用及应用JNK进行相关疾病的基因治疗奠定了基础.     

DN—JNK基因重组腺病毒的构建和鉴定

目的制备表达人c-jun氨基末端激酶（JNK）复制缺陷型重组腺病毒（Ad—DN—JNK）,并通过动物实验进行功能鉴定。方法将重组穿梭载体pAdTrack—CMV—DN—JNK线性化后,与pAdEasy—1共转化大肠杆菌BJ5138,进行同源重组得到重组腺病毒载体。将重组腺病毒载体转染入包装细胞HEK293内制备复制缺陷型重组腺病毒,并经PCR及DNA测序鉴定。Western blot检测Ad—DN-JNK在SD大鼠肝组织中JNK1蛋白表达情况,及胰岛素受体底物1丝氨酸307（IRS-1^Ser307）磷酸化水平。结果JNK重组腺病毒载体能有效转染HEK293细胞并在细胞内成功包装,5d后观察到绿色荧光蛋白（GFP）明显表达,搜集的病毒经过PCR扩增得到了特定JNK基因片段并测序鉴定。所制备的Ad—DN—JNK滴度为2．5×10^10pfu／ml,动物实验证实构建的Ad—DN-JNK能有效在肝组织表达。结论该研究成功构建了DN—JNK重组腺病毒载体及相应重组腺病毒颗粒,动物实验证明Ad—DN—JNK能有效介导DN—JNK基因蛋白表达并下调IRS-1^Ser307磷酸化水平。为进一步研究JNK的作用及应用DN—JNK进行相关疾病的基因治疗奠定基础。     

抗幽门螺杆菌治疗对2型糖尿病患者炎症因子的影响

目的探讨分析抗幽门螺杆菌治疗对2型糖尿病患者炎症因子的影响。方法研究对象选择2014年11月‐2015年11月该院收治的2型糖尿病伴幽门螺杆菌感染患者200例,随机分为抗幽门螺杆菌组(100例)和常规降糖组(100例)两组,其中,常规降糖组实施常规降糖治疗,抗幽门螺杆菌组在常规降糖治疗同时实施抗幽门螺杆菌治疗。对比两组幽门螺杆菌根除率和治疗前后炎症因子肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素(IL-6、IL-8)的变化。结果抗幽门螺杆菌组患者幽门螺杆菌根除率明显高于常规降糖组,组间数据比较差异有统计学意义(P0.05)。抗幽门螺杆菌组炎症因子TNF-α、IL-6、IL-8治疗后明显优于常规降糖组,组间数据比较差异有统计学意义(P0.05)。结论根除幽门螺杆菌可有效降低2型糖尿病伴幽门螺杆菌感染患者炎症水平,值得推广。     

IL-18对大鼠非酒精性脂肪肝病形成的作用

目的: 分析在高脂饮食诱发大鼠非酒精性脂肪肝病(NAFLD)形成过程中胰岛素抵抗(IR)与IL-18之间的相关性,并探讨IL-18对大鼠NAFLD形成的作用.方法: 将48只♂SD大鼠随机分为正常饮食组(NG)及高脂饮食组(FG),各24只,喂养至第2、4、6、8周末时,2组各随机抽取6只,抽取门静脉血测空腹血糖(FBS)、空腹胰岛素(FINS),计算空腹胰岛素抵抗指数(FIRI);检测血清及肝组织匀浆IL-18浓度;光镜检查肝组织切片以评价肝脏脂肪变性程度.结果: FG第4周末开始出现IR,血清及肝组织匀浆IL-18均随喂养时间的延长逐渐升高,各期均高于NG,肝组织匀浆IL-18在第2、4、6、8周末均与同期NG比较均有统计学差异均P<0.05),而血清IL-18是第4、6、8周末与同期NG比较均有统计学差异(均P<0.05). FINS、FIRI、血清及肝组织匀浆IL-18均与肝脂肪变性呈正相关( r = 0.951,0.971,0.950,0.937,均P<0.05). 血清IL-18与FINS、FIRI及肝组织匀浆IL-18与FINS、FIRI均成正相关( r = 0.951,0.933,0.929,0.913,均P<0.05).结论: IR在高脂饮食诱发的NAFLD的发生发展中有重要作用,IL-18与IR形成有关,并与NAFLD的形成相关联.     

颈源性头痛临床诊断依据的分析研究

目的:分析颈源性头痛患者的临床症状、体征和影像学检查,讨论其临床诊断依据,为临床诊断提供参考指标.方法:分析2007年3月～2009年3月在我院收治的诊断为颈源性头痛的患者共108名,按就诊顺序分为A组和B组.对两组患者的年龄、性别、病程、头痛程度的VAS评分,头痛部位、头痛的性质、颈部僵硬感、颈部阳性体征及颈部影像学检查等临床表现进行logistic回归分析,以讨论其诊断依据.结果:在颈源性头痛的各项临床表现中,颈部僵硬感、颈部阳性体征、诊断性神经阻滞有效以及颈部影像学检查结果阳性是最主要的表现.结论:颈部僵硬感、颈部阳性体征、诊断性神经阻滞有效以及影像学阳性结果是颈源性头痛最主要的诊断依据.     

c-jun氨基末端激酶在非酒精性脂肪肝病胰岛素抵抗大鼠中的表达及意义

目的 观察c-jun氨基末端激酶(JNK)在非酒精性脂肪肝病(NAFLD)大鼠中的表达及在胰岛素抵抗(IR)发生中的意义.方法 雄性SD大鼠32只,随机分为8周对照组、12周对照组、8周模型组和12周模型组各8只,分别给予正常饮食或高脂饮食喂养8周和12周.于第8周和第12周用生化法检测大鼠血清甘油三酯(TG)、空腹血糖(BS)含量;正糖高胰岛素钳夹实验检测IR水平;免疫组织化学和Western blot技术检测肝组织中lNK表达变化.结果 大鼠NAFLD IR模型组TG、BS含量较对照组增高,随着喂养时间的延长,大鼠肝细胞脂肪变性及IR水平逐渐加重.JNK阳性细胞和lNK蛋白表达强度逐渐增加,JNK的表达强度与IR呈正相关.差异均有显著性(P＜0.05).结论 高脂饮食喂养8周能够成功构建NAFLD IR大鼠模型,肝细胞JNK可能参与了NAFLD IR的发生和发展.     

miRNA-3677-3p介导HBx促肝癌肿瘤干性和化疗抵抗的机制研究

目的:探讨miRNA-3677-3p/FOXA3/Wnt/β-catenin通路介导HBx促进肝癌肿瘤干性和化疗抵抗的分子机制。方法:TargetScan预测miRNA-3677-3p的靶基因,培养HEK293T细胞后双荧光素酶实验分析miRNA-3677-3p与FOXA3的靶向关系。培养人肝癌细胞株Huh7和正常肝细胞株HL-7702,RT-qPCR检测细胞内miRNA-3677-3p及FOXA3的表达情况,分别过表达或干扰miRNA-3677-3p、FOXA3在Huh7细胞中的表达后,通过CCK-8、Transwell和流式细胞仪分别检测Huh7细胞增殖活力、侵袭数目和CD133、EpCAM阳性表达率。培养耐药的Huh7/ADM细胞,分析miRNA-3677-3p与FOXA3对细胞化疗抵抗的影响,Western blot检测Wnt/β-catenin通路相关蛋白表达。上调HBx在Huh7细胞中的表达,分析Huh7细胞肿瘤干性和化疗抵抗,检测miRNA-3677-3p基因表达情况。最后分析下调miRNA-3677-3p表达对裸鼠成瘤的影响。结果:Huh7细胞中miRNA-3677-3...     

高脂饮食构建胰岛素抵抗脂肪肝大鼠模型

目的通过高脂饮食构建非酒精性脂肪肝病（NAFLD）大鼠模型;分析胰岛素抵抗（IR）在NAFLD形成过程中的作用。方法将48只雄性SD大鼠随机分为正常饮食组（NG）及高脂饮食组（FG）各24只。第2、4、6、8周末时,2组各随机抽取6只,称体重,测空腹血糖、空腹胰岛素、甘油三酯、总胆固醇、丙氨酸氨基转移酶和天门冬氨酸氨基转移酶,并计算空腹胰岛素抵抗指数;然后计算肝指数（肝湿重（g）／体重（g）×100％）;制备肝组织匀浆测丙二醛、超氧化物歧化酶以及光镜检查肝组织切片以评价肝脏脂肪变性程度。结果FG组大鼠的体重增长比NG组快;肝指数在第2、4、6、8周末均大于NG;第2周末时已出现肝细胞脂肪变,其程度随喂养时间的延长逐渐加重,第4周末开始出现IR、高TG、TC血症、肝脏转氨酶异常及肝脏脂质过氧化损害,第6周末时形成轻度脂肪肝,第8周末时发展为中度脂肪肝。结论SD大鼠用改良型高脂饲料持续喂养6周可形成伴有IR的NAFLD,IR在NAFLD的发生发展中有重要作用。     

miR-5188在肝癌细胞中的作用及网络调控机制研究

目的 探究miR-5188在肝癌细胞中的作用及网络调控机制。方法过表达或敲低miR-5188表达后,检测肝癌细胞HepG2的增殖能力。利用miRNA靶基因预测数据库miRDB获取miR-5188潜在的靶基因,使用小干扰RNA(siRNA)敲低HepG2细胞中的上述靶基因后检测细胞增殖能力。采用实时荧光定量PCR法检测正常肝细胞LO2和HepG2细胞中mi R-5188、pre-miR-5188和pri-miR-5188的表达水平,并分析长链非编码RNA NEAT1（下文简称NEAT1）、NONO/PSF复合体对pri-miR-5188的影响。结果过表达mi R-5188后,HepG2细胞的增殖能力增强;敲低miR-5188表达后,HepG2细胞的增殖能力减弱,差异均有统计学意义（P均<0.05）。敲低DIDO1表达后,HepG2细胞的增殖能力增强;过表达DIDO1后,HepG2细胞的增殖能力减弱,差异均有统计学意义（P均<0.05）。过表达miR-5188后,HepG2细胞中DIDO1的表达水平降低;敲低miR-5188表达后,HepG2细胞中DIDO1的表达水平升高,差异...     

等离子髓核低温消融术结合三氧注射术治疗腰椎间盘突出症的疗效分析

目的应用等离子髓核低温消融术结合三氧注射术治疗腰椎间盘突出症与单纯三氧注射术治疗的疗效比较。方法对我院40例腰椎间盘突出症20例行等离子髓核低温消融加三氧注射术（A组）,另20例采用单纯三氧注射术（B组）,观察两组治疗效果、治疗后不同时间的VAS评分。结果A组治疗后的优良率为95％（19／20例）,治疗前、后VAS评分有统计学差异（P〈0．05）;B组优良率为70％（14／20例）,治疗后1个月两组间VAS评分有统计学差异（P〈0．05）。结论等离子髓核低温消融术结合三氧注射术比单纯三氧注射术治疗腰椎间盘突出症的疗效好。