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获得翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)基因后与表达载体pQE-30重组,然后转化大肠杆菌M15,经IPTG诱导后表达TCTP融合蛋白,薄层扫描结果显示目的蛋白占菌体总蛋白的23.4%,目的蛋白中可溶性蛋白所占比例高于非溶性蛋白。Ni-NTA纯化后C端测序,结果C端13个氨基酸序列与由GenBank国际基因库中恶性疟原虫TCTP基因推导出的C端13个氨基酸序列及组成完全一致。结果表明成功地在M15中表达了恶性疟原虫海南株TCTP基因,为进一步研究提供了实验材料。 相似文献
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用长距PCR法构建恶性疟原虫cDNA表达文库 总被引:6,自引:0,他引:6
目的 构建恶性疟原虫cDNA表达库。方法用Trizol试剂盒提取总RNA,以经修饰的SMART寡聚核昔酸引物-CDSⅢ引物直接用总RNA选择性地反转录成单链cDNA,再用长距PCR(LD)方法选择性地扩增出双链cDNA,经蛋白酶K消化和酶切后,用玻璃奶试剂盒回收200bp以上DNA片断,经与载体λTeiplEX2连接和蛋白抽提物体外包装,构建成cDNA库并对库进行了初步的鉴定。结果 构建了高滴度,高重组率的恶性疟原虫cDNA表达库。结论 所构建的疟原虫cDNA库适合进一步筛选抗疟原虫药物结合蛋白基因。 相似文献
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