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目的:探讨基因修饰过表达VCAM-1对小鼠间充质干细胞(MSC)成脂分化能力的影响与作用机制。方法:将稳定过表达VCAM-1的MSC细胞(MIGR1-VCAM-1)和转入空载体的MSC细胞(MIGR1)分别向脂肪细胞诱导分化,以原位油红O染色和real-time PCR检测成脂分化能力与相关关键转录因子C/EBPα和PPARγ的表达;Western blot检测相关信号通路P38、ERK和JNK通路的活化。利用信号通路抑制剂处理MSC,观察其成脂分化能力的变化。结果:无论是自分化组还是诱导分化组,过表达VCAM-1的MIGR1-VCAM-1/MSC与对照组MIGR1/MSC相比,脂滴变大,脂肪细胞数量显著增加(P0.01);同时在mRNA水平调控成脂分化的关键转录因子C/EBPα和PPARγ表达显著上调;Western blot检测相关信号通路,结果表明JNK通路在VCAM-1调控成脂分化中明显下调,P38及ERK通路则显著上调;加入通路抑制剂后,JNK通路抑制可显著上调MIGR1-VCAM-1/MSC成脂分化能力,脂肪数量明显增加(P0.01),且相关转录因子C/EBPα和PPARγ的mRNA表达也显著上升;而抑制P38及ERK通路则使MIGR1-VCAM-1/MSC的C/EBPα和PPARγ的mRNA表达水平下调,脂滴及脂肪细胞数则更小、更少。结论:过表达VCAM-1可促进小鼠MSC成脂分化,VCAM-1可能通过抑制JNK信号通路,活化P38及ERK通路促进小鼠MSC成脂分化能力。 相似文献
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目的 探索成纤维细胞生长因子-21(FGF21)改善糖尿病肾病纤维化的机制。方法 C57BL/6J小鼠腹腔内注射链脲佐菌素(STZ)诱导1型糖尿病(DM)模型, 对照组给予等体积的柠檬酸盐缓冲液,成模后按照分组以100μg/(kg·d)的剂量给予FGF21。干预4个月后留取24h尿样检测各组小鼠肾功能后,处死小鼠后收集血清及组织,观察各组小鼠肾脏纤维化情况同时检测肾脏纤维化指标蛋白含量变化、与肾脏纤维化发生关系密切的细胞外基质(ECM)相关蛋白的表达变化及上皮-间质转化(EMT)生物标志物的表达水平。结果 糖尿病成模后4个月小鼠组织学检测显示,与非糖尿病小鼠比较,肾小球和肾小管中出现明显的胶原蛋白累积诱导纤维化。同时肾脏中多种纤维化标志蛋白的表达水平显著升高,细胞外基质在细胞内堆积程度显著增加,诱导细胞外基质堆积的上皮细胞间充质转化也显著增强。FGF21给予干预后,上述过程均得以改善。结论 FGF21干预能通过抑制上皮细胞间充质转化,降低细胞外基质在肾内堆积,从而改善最终环节糖尿病导致的肾脏纤维化改变。 相似文献
3.
目的:利用siRNA技术建立稳定低表达血管间粘附分子1(VCAM-1)基因的小鼠间充质干细胞系(C3H10T1/2)并探讨其对小鼠间充质干细胞免疫调节能力的影响。方法:利用基因重组技术构建逆转录病毒质粒GV118-VCAM-1-RNAi,应用酶切及测序方法进行相关鉴定,转染包装细胞系T293,收集病毒上清并感染C3H10T1/2细胞(C3),应用荧光倒置显微镜及流式细胞术检测转染效率,淋巴母细胞转化实验(LTT)和混合淋巴细胞反应(MLR)检测其免疫调节能力。结果:酶切和测序鉴定表明,成功构建了低表达VCAM-1的重组逆转录病毒载体GV118-VCAM-1-RNAi,感染C3H10T1/2细胞后,应用荧光显微镜和流式细胞术分选获得稳定低表达VCAM-1的间充质干细胞GV118-VCAM-1/C3;LTT和M LR实验结果显示,低表达VCAM-1基因的M SC抑制T淋巴细胞增殖的能力显著下降,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:敲减VCAM-1可显著下调MSC抑制T淋巴细胞增殖的能力。这为进一步研究VCAM-1基因与MSC免疫抑制功能的相关性提供了可靠的实验基础。 相似文献
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