血小板生成素是人红白血病HEL细胞自分泌因子的证据

为了研究人红白血病HEL细胞有自分泌血小板生成素(Tpo)的能力,采用细胞原位杂交检测mRNA,采用免疫荧光方法、生物素亲和素系统检测蛋白质,采用细胞传感器检测细胞电化学行为。结果表明:Mpl是细胞膜受体;HEL细胞内存在Tpo蛋白质;在培养基中加入rhTpo后HEL细胞增殖;可溶性受体融合蛋白可以阻断HEL细胞增殖,阻断后HEL细胞的电子传递数减少,但细胞数高于接种细胞数。实验结论提示Tpo可能是HEL细胞的自分泌因子。     

抗人TPO单克隆抗体的制备

目的：制备抗人血小板生成素（hTPO）单克隆抗体，用于建立ELISA方法和检测TPO的表达。方法：用基因重组的hTPO免疫Balb／c小鼠，常规法做细胞融合，用ELISA法筛选出阳性杂交瘤细胞株。结果：获得一杂交瘤细胞株（46-6），其免疫球蛋白亚类为IgG1经ELISA和免疫印迹技术证明，此单抗能特异识别TPO。结论：46－6单克隆抗体（McAb）特异性强。用其建立的夹心ELISA检测TPO的方法线性好，灵敏度可达50ng／L。     

紫外线致大鼠角膜上皮细胞凋亡的研究

目的：探讨紫外线对角膜的损伤机制中是否有细胞亡的存在。方法：用400μw/cm^2的紫外线照射大鼠角膜,取下后迅速固定,作石蜡切片,然后用原位末端标记技术（ISEL）检测凋亡的细胞。结果：照射5min组与对照组无明显差异（P＞0．05）,而照射15min组与对照组及照射5min组均有明显差异（P＜0．001）。结论：紫外线照射大鼠角膜,经过一定的潜伏期后,可以诱导其上皮细胞凋亡。     

含重组人血小板生成素基因的小鼠成纤维细胞的克隆筛选与鉴定

目的:获取稳定表达重组人血小板生成素(thrombopoie tin, TPO)的NIH3T3成纤维细胞克隆,为开展成纤维细胞介导的TPO基因治疗研究提供细胞学基础.方法:以重组人T PO cDNA为目的基因, 构建真核细胞表达重组体pcDNA3/TPO,藉脂质体将其转染于NIH3T3细胞,经G418筛选,获得稳定表达重组人TPO的细胞克隆,应用PCR、RT-PCR及Western印迹等技术鉴定目的基因的导入及表达.结果:pcDNA3/TPO可藉脂质体转染NIH3T3细胞,转染细胞可稳定表达并分泌TPO.结论:已获得所需细胞克隆,为应用人TPO cDNA进行基因治疗奠定了基础.     

胆红素的体外酶促合成

利用差速离心、硫酸铵分级沉淀及柱层析技术制备血红素加氧酶和胆绿素还原酶,分别用NADPH和NADH作为辅酶,以血红素为作用物,体外酶促合成胆红素,测得NADPH的Km值为45μmol/L,NADH的Km值为0.9mmol/L。     

分子克隆人血小板生成素基因

目的：克隆人血小板生成素基因，方法：采用ＲＴ一ＰＣＲ的方法。结果：从人胎肝中克隆出全长的血小板生成素（ＴＰＯ）基因，并亚克隆至ＰＵＣｌｌ８载体中。该ｃＤＮＡ全长１０６２ＢＰ，编码３５３个氨基酸，经序列测定与Ｂａｒｔｌｅｙ等人报道的完全一致［１］。结论：已获得人血小板生成素基因，此项工作为基因工程生产ＴＰＯ奠定了良好基础。     

子宫肌瘤中抑癌基因p53和Rb的表达

探讨抑癌基因ｐ５３和Ｒｂ在子宫肌瘤发生发展中的作用。用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ Ｂｌｏｔ方法检测１４例子宫肌瘤和３例子宫平滑肌肉瘤中ｐ５３和Ｒｂ基因的ｍＲＮＡ表达。结果：Ｐ５３和Ｒｂ基因在分泌期子宫肌肉中的表达水平明显高于增殖期，在子宫肌瘤中的表达水平明显低于分泌期子宫肌肉组织，在子宫肉瘤中的表达水平低于子宫肌瘤。     

rhTPO的分子克隆表达及活性测定

目的；分子克隆并表达具有生物学活性的人血小板生成素（rhTPO）。方法：采用PCR、序列测定、原核表达及亲和层析法。结果：以人全长的TPOCDNA为模板[1]，用PCR法获得了编码195个氨基酸残基的hTPO195cDNA并克隆至原核表达质粒pMal－p2中，以麦芽糖融合蛋白（MBP）方式进行了表达。经Amylose树脂系和层析纯化获得了较高纯度的rhTPO195融合蛋白。生物学活性测定结果显示，其促进体外培养的巨核细胞集落形成与日本麒麟（Kirin）公司产品类似。结论；获得了具有天然生物学活性rhTPO，并在原核细胞中获得表达。     

人类大肠癌细胞系中ras基因表达的研究

ras基因家族是癌基因家族中较为活跃的一支,近年来已有许多实验证明,在多种肿瘤中都能检测到ras基因的异常激活和表达。本实验分别构建了含不同ras基因片段的重组质粒pN-ras 8.8、pEJ-Ha-ras 6.6和pV-kiras 1.0,并从中提纯探计进行放射性标记,用斑点印迹杂交和Northern印迹杂交检测了人类大肠癌细胞系(Lovo)中ras基因的表达情况,以期为探索人类大肠癌发生和发展的机理提供参考。