糖尿病大鼠后肢缺血与内皮型一氧化氮合酶解耦联的关系

目的 探讨糖尿病大鼠后肢缺血损伤的血管内皮功能障碍与内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase,eNOS）解耦联的关系.方法 15只SD大鼠随机分为正常组（5只）、糖尿病组（5只）及糖尿病后肢缺血组（5只）,建立糖尿病模型及糖尿病后肢缺血模型.建模2周后,用酶联免疫法检测各组股动脉一氧化氮（NO）的表达;用二氢乙锭（dihydroethidium,DHE）荧光探针法检测各组股动脉冰冻切片中超氧阴离子（O2-）的表达;Western blot检测各组股动脉1型三磷酸鸟苷环化水解酶（GPT cy-clohydrolase 1,GTPCH-1）的表达.结果 ①与正常组比较,糖尿病组股动脉NO表达降低,糖尿病后肢缺血组降低更为显著,3组间比较差异具有统计学意义（P=0.000,P=0.000,P=0.001）.②与正常组比较,糖尿病组O2-的表达明显增加,但不及糖尿病后肢缺血组.③与正常组比较,糖尿病组股动脉GTPCH-1的表达降低,糖尿病后肢缺血组降低更为显著,3组间比较差异具有统计学意义（P =0.001,P=0.000,P=0.012）.结论 在糖尿病大鼠后肢缺血血管损伤中存在eNOS解耦联.     

2型糖尿病大鼠后肢缺血模型的建立及评价

目的建立2型糖尿病大鼠后肢缺血模型并进行评价,为后续的干预实验提供研究平台。方法将15只SD大鼠随机分为正常对照组、糖尿病组及糖尿病后肢缺血组,每组5只。糖尿病组及糖尿病后肢缺血组的10只大鼠均给予高脂饮食喂养4周后,腹腔注射链脲佐菌素（STZ,40mg／kg）以建立2型糖尿病模型。糖尿病后肢缺血组大鼠建模成功后行双侧髂总动脉结扎术以建立后肢缺血模型,正常对照组和糖尿病组大鼠仅分离髂总动脉,不予结扎。2周后对3组大鼠股动脉的起始段行彩色多普勒超声检查,以检测股动脉的血流峰值速度和血流加速时间;取缺血部位的小腿三头肌及大腿股四头肌组织,分别行HE染色及免疫组化SP染色,以观察3组大鼠肌细胞的营养状况及血管再生情况。结果后肢缺血模型建模2周后,正常对照组、糖尿病组和糖尿病后肢缺血组大鼠的血流峰值速度分别为（22．49±3．02）cm／s、（17．36±2．60）cm／s和（11．23±1．26）cm／s,血流加速时间分别为（0．080±0．009）S、（0．120±0．009）S和（0．160±0．020）s,糖尿病后肢缺血组大鼠的股动脉血流峰值速度小于正常对照组和糖尿病组（P〈0．05）,而血流加速时间较长（P〈0．05）。HE染色结果显示：糖尿病后肢缺血组大鼠小腿三头肌的结构破坏,有大量炎症细胞浸润,肌肉损伤程度重于正常对照组和糖尿病组。免疫组化sP染色结果显示：糖尿病后肢缺血组大鼠大腿股四头肌的毛细血管密度[（1．40±0．55）个／HPF]小于正常对照组[（6．80±0．84）个／HPF]及糖尿病组[（4．60±0．55）个／HPF],差异均有统计学意义伊〈O．05）。结论对SD大鼠给予高脂饮食联合小剂量STZ注射可以成功诱导2型糖尿病模型,在此模型基础上结扎髂总动脉可以成功制备糖尿病后肢缺血模型。