N-甲基-N-亚硝脲诱导的大鼠视网膜感光细胞损伤模型中Müller细胞增殖和细胞因子分泌的变化

目的：建立N-甲基-N亚硝脲（N-methyl-N-nitrosourea,MNU）损伤视网膜的模型,研究视网膜神经元凋亡对Müller细胞生物学特性的影响及神经营养因子的表达变化.方法：腹腔注射MNU建立视网膜损伤模型,免疫荧光染色方法研究感光细胞缺失对Müller细胞的生物学特性的影响,并检测主要神经营养因子表达的变化.结果：TUNEL法显示,腹腔注射MNU后2 d,视网膜外核层细胞凋亡现象明显.核增殖抗原（PCNA）及细胞周期素CyclinD1的表达明显增高.与此同时,Müller细胞也开始表达神经干细胞抗原巢蛋白（nestin） RT-PCR显示胰岛素样生长因子（IGF）,碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）和肝细胞生长因子（HGF）mRNA的表达均升高.结论：在视网膜受到损伤时,Müller细胞增殖、去分化呈现出干细胞的特性.而视网膜中IGF、bFGF和HGF等细胞因子的表达明显增高,提示视网膜损伤后可能通过大量分泌细胞生长因子,促进Müller细胞的增殖.     

bFGF诱导人胚视网膜色素上皮细胞转分化的研究

目的 探讨bFGF体外诱导早期人胚视网膜色素上皮（RPE）细胞转分化现象及其分子机制,为视网膜发育的进一步基础研究和临床RPE细胞移植奠定基础.方法 取4～6代人胚（6 w～10 w）RPE细胞,bFGF（20 ng/ml）诱导培养（4 d～6 d）后观察RPE细胞形态学的改变,用免疫细胞化学作转分化RPE细胞鉴定.RT-PCR分析转分化RPE细胞小眼畸形基因（MITF）的表达.结果 bFGF诱导培养后的人胚RPE细胞呈现类神经样细胞表型,不仅表达自身上皮细胞标记物角蛋白（Keratin）,同时还表达多种神经视网膜上皮细胞标记物（MAP2、GS、GFAP、Peripherin、Opsin,但不表达NCAM）;用RT-PCR方法没有检测到转分化RPE细胞MITF-A mRNA表达.结论 早期人胚RPE细胞的发育具有一定的可塑性,bFGF可以诱导早期人胚RPE细胞表达多种神经视网膜上皮细胞标记物,可能是通过抑制MITF-A的分子信号通路.     

乳酸脱氢酶同工酶C_4与男性不育的关系

用自制的抗人乳酸脱氢酶同工酶C_4(LDH-C_4)单克隆抗体(McAb),以免疫荧光、BA-ELISA及聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)等方法,测定了110例正常及各种不育症患者精子及精浆中LDH-C_4的含量。结果表明:不明原因性不育症、少精症及无精症患者精液中LDH-C_4的含量明显低于正常对照组,与正常组比较P值均<0.001,有极显著性差异;免疫荧光还发现不育症组伴有各种畸形精子。LDH-C_4含量的明显降低可能与男性不育有关。     

影响大鼠胚胎视网膜祖细胞体外增殖的两个因素

目的探讨在体外培养条件下影响大鼠胚胎视网膜祖细胞增殖的因素。方法取第18天大鼠胚胎,用无血清培养技术扩增视网膜祖细胞,以形成悬浮生长的细胞球,经免疫细胞化学、扫描电镜与透射电镜技术鉴定细胞球中已分化的细胞,并观察不同细胞接种密度对祖细胞增殖率的影响。结果①细胞球中出现分化细胞形态和NF及Nestin阳性细胞;②提高接种细胞密度,祖细胞增殖率增加。结论①此期的祖细胞分裂产生分化细胞,导致祖细胞增殖能力差;②接种细胞密度影响祖细胞增殖率。     

临床型3.OT MR在裸鼠原位胶质瘤模型确认及监测中的应用

目的 建立人源性裸鼠原位胶质瘤模型,探讨临床型3.OT MR对其进行成像的可行性和正确性.方法 以U87MG细胞混悬液注入17只裸鼠脑实质,建立裸鼠原位胶质瘤模型.分别于接种后各时间点以临床型3.OT MR TlW、T2W及增强TlW扫描;扫描结束后处死荷瘤裸鼠,并行HE染色观察.于MRI及HE片上分别测量肿瘤最大截面积,并进行相关性分析.结果 14只裸鼠建模成功,T2WI及增强T1WI均可见明显肿瘤形成.接种后30天T2WI及增强TlWI测得的肿瘤最大截面积分别为(27.62±5.56)mm3、(28.80±5.42)mm3,均与HE测得结果[(25.65±4.95)mm3]成正相关(r=0.975、0.972,P均<0.01).结论 临床型3.0T MR能无创检测裸鼠的脑内成瘤情况,T2WI及增强T1WI均可很好地显示肿瘤,且能动态观察肿瘤生长情况.     

BMP-4在视网膜与视神经中的分布及对少突胶质前体细胞分化的影响

目的:研究骨形态发生蛋白4(bone morphogenetic protein4,BMP-4)在视网膜与视神经上的表达情况及其对少突胶质前体细胞(oligodendrocyte precursor cells,OPCs)分化的影响,进一步探讨视神经乳头处无髓鞘形成的原因。方法:取生后7d SD大鼠视神经,用免疫组织化学方法研究BMP-4的表达情况。采用恒温振荡法和差速贴壁法分离纯化新生SD大鼠OPCs。用BMP-4诱导OPCs分化,通过免疫细胞化学方法研究OPCs的分化方向。通过Western Blot方法研究BMP-4浓度与OPCs细胞体系内Olig2蛋白表达水平之间的相互关系。结果:(1)在发育过程中,BMP-4仅选择性表达在视神经乳头处;(2)成功纯化的OPCs在PDGF和bFGF撤除后自发分化为少突胶质细胞;(3)OPCs经BMP-4诱导后向II型星形胶质细胞分化;(4)OPCs内Olig2蛋白的表达量随着BMP-4浓度的逐渐增高而逐渐降低。结论:在视神经乳头表达的BMP-4蛋白有可能作用于迁移至此处的OPCs,通过激活相关信号途径以下调OPCs内Olig2蛋白的表达水平,抑制OPCs向少突胶质细胞方向分化,从而抑制视神经乳头髓鞘形成。     

大鼠视神经内微血管的三维构筑

目的:研究大鼠视神经内血管分布规律.方法:用10%明胶-墨汁混合液经心灌注SD大鼠后取出其视神经,OCT包埋,20μm连续切片,Olympus图像处理系统拍照,用Photoshop 9.0 cs对图像进行处理并用Image-J软件进行分析.用Amira 3.1.1软件将二维切片图像重建成三维可视化图像.结果:三维重建及图像分析显示大鼠视神经内血管围绕神经束排列,球后0～5 mm、5～8 mm、8 mm至视交叉的视神经内血管网形度大于0.5的百分比分别为(55.5±2.7)%、(67.4±4.6)%、(76.8±1.7)%.结论:大鼠视神经内的微血管数量多,走行变化大,从球后到视交叉沿视神经轴由横行逐渐变为纵行.