FOXP3调控非小细胞肺癌A549细胞对阿霉素敏感性的作用及其机制

目的：探讨叉头蛋白3 (FOXP3)基因沉默后非小细胞肺癌(NSCLC) A549细胞对阿霉素(Dox)敏感性的变化,阐明其参与Dox耐药的机制。方法：采用脂质体法将FOXP3小干扰RNA(siRNA)片段转染至人NSCLC A549细胞,细胞分为空白对照组(不转染)、si-NC组(转染对照siRNA)和si-FOXP3组(转染FOXP3-siRNA)。采用Westernblotting法和免疫荧光法检测各组A549细胞中FOXP3蛋白表达水平,CCK-8法检测各组A549细胞增殖活性和半数抑制浓度(IC50)值。各组A549细胞中分别加入0、10和20μmol·L^-1 DAPT,作为0、10和20μmol·L^-1 DAPT组;另取A549细胞,分别加入0μmol·L^-1DAPT、 1.0mg·L^-1Dox和1.0mg·L^-1Dox联合10μmol·L^-1DAPT,作为0μmol·L^-1 DAPT组、1.0 mg·L^-1     

Notch1信号通路对肺腺癌细胞侵袭和顺铂耐药的影响及其机制

目的:观察阻断Notch1信号通路对肺腺癌细胞侵袭、血管生成和上皮-间质转化(EMT)及其对顺铂敏感性的影响,阐明Notch1信号通路在肺腺癌侵袭和转移及顺铂耐药中的作用及相关机制.方法:以γ-分泌酶抑制剂(DAPT)作为Notch1信号通路阻断剂作用A549细胞,分为0μmol·L-1 DAPT组(对照组)、10μm...     

IL-17A在非小细胞肺癌组织中的表达及其通过NF-κB信号通路对VEGF表达的调控作用

目的:探讨白细胞介素17A (IL-17A)在非小细胞肺癌(NSCLC)发生发展中的作用及其通过核转录因子κB (NF-κB)信号通路对血管内皮生长因子(VEGF)的调控作用,阐明其相关机制。方法:收集NSCLC术后石蜡标本55例,免疫组织化学染色法检测正常肺组织和NSCLC组织中IL-17A和CD31的表达,分析IL-17A阳性表达率与NSCLC患者临床病理参数的关系,Pearson相关分析法分析IL-17A表达与CD31标记的微血管密度(MVD)的相关性。选取对数生长期的人肺腺癌A549细胞,将A549细胞分为对照组(A549细胞)、外源性重组人IL-17A (rhIL-17A)组、BAY11-7082组(NF-κB信号通路抑制剂)和联合组(rhIL-17A+BAY11-7082),Western blotting法检测各组A549细胞中IL-17受体A (IL-17RA)、P65、磷酸化P65 (p-P65)和VEGF蛋白表达水平,MTT法检测各组A549细胞培养上清液作用人脐静脉内皮细胞(HUVECs) 48 h后各组细胞增殖活性。结果:NSCLC组织中IL-17A阳性表达率明...     

FOXP3 基因沉默抑制肺腺癌 A549 细胞上皮-间质转化和改善 5-氟尿嘧啶耐药性

目的：探究叉头蛋白3(FOXP3)基因沉默对肺腺癌上皮-间质转化（EMT）及5-氟尿嘧啶（5-FU）耐药性的影响。方法：构建2段特异性针对FOXP3基因的siRNA片段，并将其通过脂质体介导转染至肺腺癌A549细胞，同时设立转染无义序列的阴性对照组。将转染后的A549细胞分为3组：si-NC组（阴性对照）、si-FOXP3-1组和si-FOXP3-2组。qRT-PCR和Western blot检测各组细胞中FOXP3的表达水平，Western blot检测各组细胞中E-钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）以及N-钙黏蛋白（N-cadherin）表达水平，Transwell检测各组细胞迁移和侵袭能力，ELISA检测各组细胞上清液中基质金属蛋白酶2(MMP-2)和MMP-9蛋白浓度。qRT-PCR和Western blot检测5-FU处理A549细胞后FOXP3表达水平，CCK-8检测各组细胞对5-FU的敏感性，Western blot检测各组细胞中P-糖蛋白（P-gp）表达水平。结果：与si-NC组相比，si-FOXP3-1和si-FOXP3-2组中FOXP3在...     

基于双重PCR技术的鹿茸及其伪品DNA指纹特征和鉴定

目的：分析鹿茸线粒体细胞色素b （Cytb）和细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ（COⅠ）基因特异性,建立双重PCR技术鉴别鹿茸真伪的分子指纹特征。方法：利用碱变性法提取梅花鹿茸、马鹿茸、驯鹿茸和新西兰鹿茸的基因组DNA,应用引物设计软件Premier 5.0针对Cytb和COⅠ分别设计特异性引物（分别为Cytb1、2和COⅠ1、2、3）,采用单一及双重引物分别进行PCR扩增,筛选特异性强的引物,确定最佳PCR反应条件。结果：采用碱变性法提取的鹿茸基因组DNA片段长度为23 000bp,DNA纯度即A （260）/A （280）为1.80±0.02;应用单一引物进行PCR扩增无法鉴定鹿茸的真伪,而引物Cytb 1和COⅠ1组合后,解链温度为58℃时,梅花鹿茸（吉林、安徽）、马鹿茸均能扩增出395和525bp大小的2个片段,而驯鹿茸和新西兰鹿茸均未能扩增出相应片段;采用该提取方法及最优化的PCR反应条件,对市售样品进行检测,检测结果与实际情况完全一致。结论：双重PCR技术可从分子水平鉴别鹿茸的真伪,该方法特异性高、实用性强,且简便快捷,在鹿茸真伪鉴别方面具有较高的应用价值。