强力霉素调控的真核表达体系ALC-pTet-on Advanced成釉细胞株的建立

目的:建立可受强力霉素调控的高表达外源基因的真核表达体系ALC-pTet-on Advanced细胞株,用于基因功能的研究。方法:将质粒pTet-on Advanced转染至成釉细胞系(ALC),用1 000μg/mL的G418筛选抗性克隆。用RT-PCR进行DNA的整合鉴定,并瞬时转染荧光素报告基因(pTRE-Tight-Luc)对pTet-on Advanced阳性克隆株的功能进行鉴定。结果:G418压力筛选后,获得了13个细胞克隆株,RT-PCR检测均表达反义四环素转录激活子(rtTA Advanced),PCR产物测序结果与pTet-on Advanced基因序列一致,表明pTet-on Advanced基因片段已整合进小鼠成釉细胞基因组DNA,荧光素报告基因功能鉴定获得l株诱导表达倍率为22.1的克隆株,且pTet-on Advanced基因阳性的成釉细胞株的形态和生长度与正常成釉细胞没有明显差异。结论:通过脂质体转染的方法成功地获得l株诱导表达倍率为22.1的高表达成釉细胞株,为进一步研究EMPs在成釉细胞中功能打下了基础。     

人釉成熟蛋白Amelotin基因的启动子活性区域分析

目的构建人牙釉质蛋白（Amelotin,AMTN）基因不同长度的上游启动子荧光素酶报告基因载体,比较不同的启动子片段在成釉细胞及Hela细胞中的活性,为进一步判定上游启动子的转录调控区奠定基础。方法以PCR方法获取基因上游启动子片段,将其构建至报告基因载体pGL3．Basic中,瞬时转染成釉细胞及Hela细胞,通过检测荧光素酶活性来分析启动子区域的转录调控能力。结果成功地获得了不同长度的Amelo—tin基因启动子目的片段,酶切鉴定表明不同长度启动子荧光素酶报告基因载体构建成功,不同长度的启动子在不同的细胞中活性不同,-190～-358与-35～-93区域为特异的转录调控作用区。结论成功构建了不同长度的Ame｜otin基因启动子的pGL3-Basic荧光素酶报告基因载体,初步确定Amelotin基因启动子的转录活性区,为进一步研究Amelotin基因转录调控特点奠定基础。     

Runx2在牙釉质形成中的作用研究

目的:研究小鼠成釉细胞中Runx2对釉成熟蛋白(Amelotin,AMTN)、成釉蛋白(Ameloblas-tin,AMBN)、牙成釉细胞相关蛋白(odontogenic ameloblast-asssociated protein,ODAM)基因表达的调控作用,为研究Runx 2在牙釉质形成中的作用奠定基础.方法:通...     

TGF-β1调控小鼠成釉细胞Amelotin基因表达的研究

目的：探讨TGF-β1对Amelotin基因表达的影响及作用机制。方法：通过实时定量RT-PCR法观察TGF-β1对釉成熟蛋白（Amelotin）基因表达的影响;利用TGFBR1小RNA干扰（siRNA）技术阻断TGF-β受体I（TGFBR1）表达,或在成釉细胞中过表达活化型TGF-β受体I（T204D）,观察Amelotin基因表达的改变;利用双荧光素酶基因报告系统观察TGF-β1和T204D对成釉细胞Amelotin启动子转录活性的调控作用。结果：TGF-β1刺激成釉细胞后,Amelotin基因表达显著增强;利用小RNA干扰技术使TGFBR1基因沉默,实时定量RT-PCR显示TGF-β1调控Amelotin基因表达的作用减弱,而pCDNA3.1-T204D转染成釉细胞促进了Amelotin基因表达。将pGL3-Amelotin启动子转染成釉细胞,并用TGF-β1刺激成釉细胞,Amelotin启动子的转录活性明显增强。TGFBR1小RNA干扰阻断了TGF-β1诱导的Amelotin启动子转录活性,而将pGL3-Amelotin与T204D共转染成釉细胞后,促进了Amelotin启动子的转录活性。结论：在牙釉质发育过程中,TGF-β1和活化型TGFBR1信号通路调控成釉细胞Amelotin基因表达。     

c-Jun调控成釉细胞Amelotin基因表达的研究

目的:通过过表达及knockdown c-Jun基因,观察小鼠成釉细胞中釉成熟蛋白(amelotin)的表达变化,以初步确定c-Jun对amelotin的调控作用。方法:①应用免疫组化和细胞免疫荧光方法观察体内外成釉细胞中的c-Jun及amelotin的表达情况;②RT-PCR获得c-Jun基因,克隆至pcDNA3.1/myc-hisA,瞬时转染成釉细胞,real time RT-PCR观察其对amelotin表达的影响;③化学合成c-Jun siRNA,瞬时转染成釉细胞,re-al time RT-PCR观察其对amelotin表达的影响。结果:①体内外成釉细胞中c-Jun和amelotin均有表达,c-Jun主要在成釉细胞胞核中表达,amelotin在成釉细胞和釉质全层均有表达;②成功构建c-Jun真核重组表达载体pcDNA3.1/myc-hisA-c-Jun,转染成釉细胞后amelotin mRNA表达水平显著上升;③成功沉默c-Jun,amelotin在转染c-Jun siRNA组表达水平显著下降。结论:在成釉细胞中,c-Jun在转录水平调控amelotin基因的表达。     

牙拔除术后高热1例

牙拔除术后发生高热较为少见,本文报道1例牙拔除术后高热,并结合相关文献对牙拔除术后高热的诊断和防治进行分析.     

整合医学理念在培养口腔专科生临床思维能力中的应用

目的 探讨整合医学理念在培养口腔专科生临床思维能力中的应用效果.方法 针对2017年8月—2018年7月在该院学习的9名口腔专科学生,采用根据临床症状搜集资料、整合多学科相关知识、践行循证口腔医学、强化整体观念来培养其临床思维,采用调查问卷、座谈会的形式进行效果评价.结果 89％ 的学生认为,这种教学模式有助于临床思维...     

TGF-β1调控成釉细胞ODAM基因表达的研究

目的:探讨TGF-β1对ODAM基因表达的作用。方法:通过实时定量RT-PCR法观察TGF-β1对成釉细胞ODAM基因表达的影响;利用c-jun小RNA干扰(siRNA)技术,阻断转录因子c-jun基因表达,观察c-jun基因沉默对TGF-β1诱导ODAM基因表达的影响;利用双荧光素酶基因报告系统研究成釉细胞中TGF-β1对ODAM启动子转录活性的调控作用。结果:TGF-β1刺激成釉细胞后,ODAM基因表达显著增强;利用小RNA干扰技术使c-jun基因沉默,实时定量RT-PCR法研究显示,TGF-β1调控ODAM基因表达的作用减弱。将pGL3-ODAM转染成釉细胞后,用TGF-β1刺激成釉细胞一定时间,ODAM启动子的转录活性增强。c-jun基因沉默抑制了TGF-β1对ODAM启动子的激活作用。结论:在釉质发育过程中,TGF-β1通过转录因子c-jun调控成釉细胞ODAM基因表达。