乙肝病毒X蛋白对人肝细胞内β-catenin定位及转录活性的影响

目的 研究HBx对Wnt/Wingless信号传导通路中主要信号分子 -catenin的影响,探讨HBV相关性HCC的发生机制。方法 Ad-HBx转染人肝细胞系L02细胞,免疫细胞化学和Luciferase检测细胞中?-catenin细胞定位及活性变化。结果 免疫细胞化学：转染重组HBx腺病毒前L02细胞中β-catenin仅在细胞质有少量表达,转染后胞质表达明显增强,并出现胞核的大量积聚;Luciferase检测：实验组TOP荧光素酶活性与对照组及空白组相比明显增强,为阴性对照的11倍（P<0.05）,Ad- HBx感染后24和36h 的TOP荧光素酶活性无显著差异。结论 Ad-HBx重组腺病毒在体外能有效转染人肝细胞系L02细胞,受感染细胞能有效表达HBx蛋白,HBx影响了人肝细胞系L02细胞中β-catenin的细胞定位及转录活性。     

HBx对肝细胞中β-catenin表达的影响

目的:乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)是一种反式作用因子,它通过增强各种转录和调控因子的表达影响肝细胞的增殖和凋亡.在原发性肝癌(HCC)的发生发展中发挥重要的作用.Wnt/β-catenin信号转导通路在胚胎发育和肿瘤发生中也发挥了重要的作用.本实验利用腺病毒表达系统,研究HBx与Wnt信号转导通路中主要信号分子β-catenin的相互作用及对它的影响,探讨HBV相关性肝癌的发生机制.方法:通过HEK293细胞扩增腺病毒获得高滴度的Ad-GFP和Ad-GFP-HBx,采用表达有绿色荧光蛋白的腺病毒高表达载体系统将HBx基因有效转入人正常肝细胞L02细胞系.通过Western blot证实HBx在L02细胞中有效表达.RT-PCR、Western blot检测转染Ad-GFP-HBx的L02细胞中β-catenin表达的变化.结果:HEK293扩增腺病毒获得的Ad-GFP滴度为:1.5×109 pfu/ml,Ad-GFP-HBx的滴度为:1.0×108pfu/ml.Ad-GFP-HBx腺病毒感染细胞后能使HBx在L02细胞中有效表达,且感染Ad-GFP-HBx后HBx的表达显著增加L02细胞中β-catenin mRNA的表达量(P<0.05)和β-catenin蛋白的表达量(P<0.05).结论:HBx可以上调人正常肝细胞系L02细胞中β-catenin的表达,提示HBx可能通过调控β-catenin的异常表达激活Wnt信号通路.促进原发性肝癌的发生.Wnt信号传导主要取决于β-catenin在细胞内的水平,当β-catenin水平低下,Wnt途径关闭;当β-catellin水平升高时,Wnt途径开启,而Wnt信号的激活与肿瘤的发生密切相关.可见,HBx能增强β-catenin的表达,提示HBx可能是调控β-catenin的关键因子,而β-catenin的异常表达又能激活Wnt信号通路,最终导致肝癌的发生.这也间接证明了HBx在肝癌的发生发展中具有重要的作用,且该作用与Wnt信号中的关键分子β-catenin密切相关.     

浅析新大纲下提高生物化学教学质量的方法

生物化学是一门非常重要的医学基础课程。由于其信息量大,化学反应多,知识抽象,所以医学学生学习难度较大。而新大纲的教学学时的减少,更加大了教师的教学难度。在这种情况下,如何有效地提高生物化学的教学质量显得尤为重要。本文主要从课前准备、课堂教学及课后巩固三个方面初步探索提高生化教学质量的方法。作为一名生化教师,需要不断总结经验,改进教学方法,提高教学质量,以增加学生学习生化的积极性,使学生能系统地掌握生化知识,为将来学好临床打下坚实的基础。     

乙型肝炎病毒X基因在肝细胞凋亡中的作用

HBV基因组中的x基因能整合至肝细胞基因组，编码产生的HBx蛋白表现出复杂多样的生物学活性。近年来随着对HBX基因结构与功能的深入研究，发现HBx能够对肝细胞的凋亡起双向调控作用，对肝细胞肝癌（HCC）的发生发展具有重要意义。一方面，HBX能抑制肝细胞凋亡，使细胞过度增生，这对HCC的发展起着重要的作用，另一方面，HBx还具有诱导或促进肝细胞凋亡的作用，该作用在HBV相关疾病中的具体作用还不甚清楚。HBVx基因可能在肝细胞凋亡方面发挥着不同的作用，对揭示HCC发病机制有着重要意义。     

HPV-16 E6基因沉默对宫颈癌CaSki细胞的影响

目的: 研究特异性抑制HPV E6基因的表达对宫颈癌CaSki细胞的影响. 方法: 构建表达HPV-16 E6基因siRNA重组质粒,体外转染CaSki细胞后检测E6 mRNA表达变化及E6主要作用靶分子P53的蛋白变化;流式细胞术分析细胞周期. 结果: 特异RNAi表达质粒转染CaSki细胞后明显降低了E6 mRNA水平,且P53蛋白水平增高. 流式细胞仪测定发现细胞停滞在G0-G1期,细胞增殖受到抑制. 结论: 采用RNA干扰技术能沉默CaSki细胞中整合的HPV-16 E6基因的表达,使细胞中抑癌蛋白P53水平增高,导致肿瘤细胞生长停滞.     

低温冷冻对不同月龄大鼠生殖功能的影响

目的 研究低温冷冻应激对下丘脑-垂体-性腺轴影响及不同衰老程度的影响.方法 青年(2月龄)及老年(15月龄)雌性Wistar大鼠各20只.随机分为青年(2月龄)对照组(10只)和老年(15月龄)对照组(10只)和青年(2月龄)应激组(10只)和老年(15月龄)应激组(10只),共4组.对照组设定(16±1)℃.应激组设定(3±1)℃.各组接受应激刺激28d.各组均于应激结束后即刻以称重法了解生殖器官的发育变化.然后取血2ml.以放射免疫法测定血清雌二醇含量.结果 与对照组相比.应激组大鼠卵巢重量和子宫重量和血清雌二醇水平均显著下降(P<0.05);老年组大鼠较青年组大鼠变化显著(P<0.01).结论 低温冷冻应激对不同月龄大鼠的应激损伤程度存在差异,应激对老年大鼠的外显行为和生殖内分泌功能的损伤程度均较青年大鼠严重,提示衰老是影响机体应激反应性的重要因素之一.     

乙型肝炎病毒X基因在肝细胞凋亡中的作用

HBV基因组中的x基因能整合至肝细胞基因组,编码产生的HBx蛋白表现出复杂多样的生物学活性。近年来随着对HBX基因结构与功能的深入研究,发现HBx能够对肝细胞的凋亡起双向调控作用,对肝细胞肝癌(HCC)的发生发展具有重要意义。一方面,HBX能抑制肝细胞凋亡,使细胞过度增生,这对HCC的发展起着重要的作用,另一方面,HBx还具有诱导或促进肝细胞凋亡的作用,该作用在HBV相关疾病中的具体作用还不甚清楚。HBV x基因可能在肝细胞凋亡方面发挥着不同的作用,对揭示HCC发病机制有着重要意义。