开放式实验教学在七年制分子生物学实验课中的应用

开放式实验教学是一种新的教学模式，克服了传统实验教学的弊端。通过对七年制学生的分子生物学实验课进行开放式实验教学的尝试，阐述了实行开放式实验教学的形式和内容及其优越性和必要性。     

Oxidative modification of high density lipoprotein induced by cultured human arterial smooth muscle cells

Objective: To observe the oxidative modification of high density lipoprotein (HDL) induced by culturedhuman arterial smooth muscle cells (SMCs). Methods: HDL cocultured with SMCs at 37℃ in 48 h was subjected,and native HDL (N-HDL) served as control. Oxidative modification of HDL was identified by using agarose gel electro-phoresis. Absorbances of conjugated diene (CD) and lipid hydroperoxide (LOOH) were measured with ultravioletspectrophotometry at 234 and 560 nm respectively, and fluorescence intensity of thiobarbuturic acid reaction substance     

人TNFα—EGF重组质粒的构建

本实验将编码人ＴＮＦα分子上与其受体相关的部分核苷酸序列缺失，代之以人ＥＧＦ基因ｃＤＮＡ，实现基因重组，转化子经快速细胞破碎法切初筛，经Ｄｏｔ ｂｌｏｔ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ鉴定，从中挑选出２０个人ＴＮＦα－ＥＧＦ阳性重组质粒。为进一步获得重组嵌合人ＴＮＦα－ＥＧＦ分子和ＴＮＦα分子和ＴＮＦα作用机制的深入探讨奠定了初步基础。     

一DXFD52相关人肝细胞cDNA的部分序列分析及其反转录病毒载体的构建

为了寻找和研究新的人类基因ｃＤＮＡ，本实验以Ｔ７ＤＮＡ聚合酶对一ＤＸＦＤ５２相关人肝细胞ｃＤＮＡ（ＤＥ）进行了分段部分测定，并将所测各部分序列分别在ＥＭＢＬ（欧洲分子生物学库）中进行核酸同源性检索，结果在库中没有找到任何具有同源性的人类基因或ＤＮＡ片段。因此，我们初步认为ＤＥ为一新的人类基因ｃＤＮＡ片段。同时为初步探讨ＤＥ的功能，我们还成功地将ＤＥ构建于反转录病毒载体ＰＬＸＳＮ上。     

人可溶性B淋巴细胞刺激因子结合小肽的筛选及其免疫抑制功能分析

目的筛选和鉴定B淋巴细胞刺激因子(BLyS)的抑制性小肽。方法用重组人BLyS筛选噬菌体构象型7肽库、人工合成小肽鉴定其免疫抑制功能。结果经过筛选，得到两个阳性噬菌体克隆．人工合成的两个小肽在体外能特异性地抑制BLyS刺激细胞增生的活性。结论获得了两个能够抑制BLyS功能的小肽。     

重组小鼠高迁移率族蛋白B1抗菌活性研究

目的:制备具有功能活性的重组小鼠高迁移率族蛋白B1(recombinant mouse high-mobility group box-1,rmHMGB1)并观察其抗菌活性,为深入研究HMGB1抗菌功能创造条件.方法提取BALB/c小鼠脾脏总RNA,经RT-PCR扩增得到编码小鼠HMGB1的cDNA片段,序列测定正确后,构建于原核表达载体pQE-80L,转化于大肠杆菌DH5α,经IPTG诱导表达目的蛋白,再经Ni2 -NTA亲和层析柱纯化后,通过试管稀释法、琼脂扩散法两种抗菌实验观察并比较rmHMGB1对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌(JM109、ATCC25922、DH5α)、绿脓杆菌抗菌活性的差异.结果RT-PCR扩增得到了约648bp的cDNA片段,序列分析与GenBank中报道的编码小鼠HMGB1的cDNA序列一致,纯化后的rmHMGB1对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌(JM109、ATCC25922、DH5α)有明确的抗菌活性,其抗菌活性强弱依次为金黄色葡萄球菌＞JM109＞ATCC25922＞DH5α,对绿脓杆菌则无抗菌活性.结论利用大肠杆菌可表达重组小鼠HMGB1,所获得纯化产物对部分细菌确有抗菌活性,此研究为进一步探讨HMGB1抗菌功能的机制奠定了基础.     

抗人结肠癌单抗MC5的功能性ScFv在大肠杆菌中的可溶性表达

目的：制备抗人结肠癌单抗MC5的具功能活性的可溶性单链可变区片段（ScFv）。方法：从分泌MC5的杂交瘤细胞分离mRNA，RT-PCR分别扩增抗体质量、轻链可变区基因（VH和VLDNA），经linkerDNA连接形成ScFvDNA。将ScFvDNA与噬粒载体pCANTAB5E的连接产物转化于大肠杆菌TG1，转化菌经辅助噬菌体M13KO7感染后，获得重组噬菌体。以高表达MC5结合抗原的人结肠癌细胞系SW480对重组噬菌体进行2轮筛选后，经ELISA筛选呈现抗体ScFv片段的噬菌体单克隆。取2个强阳性克隆的噬菌体感染大肠杆菌HB2151，用于表达可溶性ScFv。经点印迹和Western印迹对可溶性ScFv进行鉴定，经ELISA检测可溶性ScFv的抗原结合活性。结果：所获得的VH、VL和ScFvDNA分别约为340、320和750bp。对重组哓菌体经2轮亲和筛选后，经ELISA从25个克隆中筛检出10个抗原阳性克隆。源于2个强阳性克隆的可溶性ScFv的分子质量为32000u，且浓集于细菌周质腔中，可溶性ScFv具有抗原结合活性，其结合位点与亲本单抗MC5相同。结论：针对MC5的具功能活性的可溶性ScFv的成功制备，为人结肠癌的体外（乃至体内）研究提供了新的靶向载体分子。     

包涵体复性的研究进展

大肠杆菌表达的外源基因产物通常是不可溶的包涵体。包涵体需要经过溶解和复性才能得到有活性的蛋白质。复性是蛋白质从未折叠到折叠形式的过程，受到许多因素的影响，包括变性剂对包涵体的溶解度、变性剂的去除、一些小分子对复性的帮助等等。现就影响蛋白复性的相关因素进行阐述。     

过表达长链非编码RNA H19促进miR-124-3p表达抑制肝癌细胞增殖

目的 探讨长链非编码RNA H19 (long non-coding RNA H19,IncRNA H19)对miR-124-3p表达的影响及在肝癌细胞增殖中的作用.方法Real-time PCR检测肝癌细胞系及临床标本中lncRNA H19和miR-124-3p的表达;在肝癌细胞系HepG2和SMMC7721中过表达lncRNA H19,Real-time PCR 检测miR-124-3p及其靶基因cyclinD1的表达;Western blot检测cyclinD1蛋白表达水平;CCK-8法检测lncRNA H19对细胞增殖的影响;过表达lncRNA H19同时加入antagomiR-124-3p后,检测miR-124-3p及其靶基因表达情况及细胞增殖情况.结果lncRNA H19和miR-124-3p在肝癌细胞系及肝癌组织中均低表达(P＜0.05);过表达lncRNA H19后miR-124-3p表达显著增加(P＜0.05),miR-124-3p的靶基因cyclinD1蛋白和mRNA表达明显下降(P＜0.05),细胞增殖受到抑制(P＜0.05);过表达lncRNA H19同时干扰miR-124-3p后,细胞增殖抑制作用减弱(P＜0.05).结论长链非编码RNA H19通过促进miR-124-3p表达,进而抑制其靶基因cyclinD1表达而抑制肝癌细胞增殖.