垂体生长激素腺瘤基因治疗的动物实验研究

目的利用GE7系统介导的生长激素启动子调控毒性基因治疗裸鼠垂体生长激素腺瘤,评价该系统的治疗效果.方法构建GE7系统介导的生长激素启动子调控基因治疗系统,对垂体生长激素腺瘤裸鼠模型进行治疗,并观察其治疗效果.结果治疗组裸鼠肿瘤体积缩小,而各对照组肿瘤体积均有不同程度的增加;基因治疗后荷瘤裸鼠生存期超过120 d,明显超过对照组的40 d左右(P＜0.01).结论GE7系统介导的生长激素启动子调控自杀基因治疗系统能有效治疗垂体腺瘤动物模型.     

受体介导的基因转移与基因治疗

基因治疗成功的关键在于将治疗基因靶向性转移到细胞或组织，受体介导的基因转移能满足此要求，很有发展潜力的基本转移方法。然而，要将这种转移方法用于基因治疗，与转移系统有关的万分的化学特性与物理反应，靶细胞的受体表达水平，DNA配体复合物怎样逃逸溶酶体的降解以及包含在复合物中的外源基因的表达等都是至关重要的。本文综述了受体介导的基因转移的基本原理。DNA配体复合物形成的最佳条件与性质，影响基因转移与表达的各种因素以及近年来国内外受体介导的基因转移用于基因治疗取得的进展。     

基因工程技术制备以组蛋白为核心的新型基因导入系统

目的　构建以组蛋白为核心的新型靶向性基因导入系统。方法　将各功能肽与核心区成分设计成融合基因 ,在大肠杆菌中加以表达 ,获得的融合蛋白通过静电效应与DNA结合形成靶向性的基因导入系统 ,通过体内外报告基因导入试验检测生物学活性。结果　经体内外基因导入实验证明 ,制备的融合蛋白能将外源报告基因靶向性地导入肿瘤细胞和组织。结论　运用基因工程方法制备的融合蛋白适合大规模生产 ,便于质控 ,为靶向性基因导入系统应用于基因治疗提供了新的思路。     

细胞凋亡调控基因与肿瘤基因治疗

恶性肿瘤基因治疗的候选基因，包括细胞毒基因、细胞因子基因、抑癌基因等。细胞凋亡的调控基因及诱导细胞凋亡的基因是重要的候选基因。细胞凋亡（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）是一个控制细胞消亡的机制，在调节细胞种群时，其作用与细胞分裂相对立，是一个主动的、程序化的细胞...     

体外垂体生长激素腺瘤转录靶向性基因治疗的实验研究

目的评价人生长激素启动子调控的基因治疗系统对垂体生长激素腺瘤的靶向性治疗作用。方法构建生长激素启动子调控的基因系统，体外转染垂体生长激素腺瘤GH3细胞；观察治疗基因HSV—TK在细胞中的表达靶向性，以及该系统杀伤细胞的能力和杀伤靶向性。结果HSV—TK蛋白能够在GH3细胞中靶向性表达，予以更昔洛韦后，GH3细胞增殖速度明显减慢，而对照细胞无明显杀伤作用（P〈0．01）。结论生长激素启动子调控的基因治疗系统能有效地、靶向性地抑制GH3细胞增殖。     

基因功能研究中线粒体定位方法的比较

目的：比较和选择最佳细胞线粒体定位方法及其适用范围。方法：采用免疫细胞化学，免疫组织化学，荧光免疫细胞和化学和活细胞培养法对不同细胞系和癌细胞的线粒体定位方法进行比较。结果：几种线粒体定位方法各有其特征和适用范围，但均具很高的特异性。结论：免疫组化法可用于组织中（即体内）细胞线粒体的显示；免疫细胞化学，荧光免疫细胞化学和活细胞培养法可用于体外基因功能研究中培养细胞的线粒体定位。     

靶向于胰岛素样生长因子受体的基因导入系统

目的：建立一种新的以细胞表面受体为靶向的基因导入系统。方法：根据胰岛素样生长因子Ⅰ号及Ⅱ号受体（IGFIR,IGFⅡR）在人原发性肝癌中过量表达,设计并合成了针对IGFIR及IGFⅡR的14肽E5,同时合成了流感病毒血凝素功能域20肽HA20作为内吞小体释放寡肽（Endosome releasing loigopeptide,EROP),将它们分别与多聚阳离子多肽（Polycatiomic polypeptide,PCP)－多聚赖氨酸（Polylysine,PL)共价连接,通过静电效应与DNA形成受体介导的靶向性非病毒性基因导入系统（E5－PCP,PCP－HA20）。结果：体内、外实验证实此基因导入系统能高效且 相对靶向地将外源基因导入人肝癌细胞并表达。应用此系统将细胞周期素依赖的蛋白激酶抑制物基因p15,p16,p21导入肝癌细胞,明显抑制肝癌细胞生长。体内将p21导入荷瘤裸鼠,显著抑制裸鼠皮下肿瘤的生长。结论：受体介导的非病毒型基因导入系统高效具有相对靶向性,有可能成为新的肝癌基因治疗途径。     

垂体生长激素腺瘤细胞表皮生长因子受体的表达

目的了解大鼠垂体生长激素腺瘤(GH3)细胞的表皮生长因子受体(EGFR)的表达情况.方法应用免疫组化的方法检测GH3细胞及阴性对照U-2OS细胞和阳性对照HO8910PM细胞的EGFR表达情况.结果 GH3细胞和HO8910PM细胞明显黄染,U-2OS细胞无明显染色;GH3、U-2OS和HO8910细胞表达EGFR的阳性细胞率分别为90.57%、4.84%和93.33%.结论垂体生长激素腺瘤细胞中存在着广泛的EGFR表达,而且具有较高的表达强度.     

垂体生长激素腺瘤靶向性基因治疗系统的构建及实验研究

目的构建并评价垂体生长激素腺瘤靶向性基因治疗系统.方法构建GE7系统介导的生长激素启动子调控的基因治疗系统,通过垂体生长激素腺瘤GH3细胞及对照细胞的体外基因转染实验,观察此基因治疗系统对GH3细胞的转染能力和靶向性.结果成功构建基因治疗系统,基因转染后GH3细胞特异性表达报告基因,对照的HO8910PM和U-2OS细胞报告基因的表达不明显.结论应用GE7转染的生长激素启动子调控的基因治疗系统能靶向性地将目的基因转入垂体生长激素腺瘤细胞.     

胰岛素样生长因子受体靶向性基因导人系统的体外和体内导人瘤谱

目的 通过研究E5基因导入系统的体外、体内基因导入瘤谱,建成一个平台技术：一个基因导入系统可用于多种肿瘤的基因治疗。方法 应用E5基因导入系统在体外、体内转移报告基因到IGF I R阳性的多种肿瘤细胞与裸小鼠皮下肿瘤。结果 E5基因导入系统在体外转移报告基因到富于IGF I R的5种肿瘤细胞,在体内将报告基因转移到IGF I R阳性裸小鼠皮下肿瘤,其导入率与IGF I R表达水平呈正相关。而体外、体内均不能将报告基因导入到IGF I R阴性的肿瘤细胞和裸小鼠皮下肿瘤。结论 E5基因导入系统具有相对的靶向性与广谱性,在临床基因治疗研究和应用中具有潜在的价值。