蛇床子催眠活性组分对PCPA损伤大鼠松果体细胞的保护作用及钟基因表达调控机制

目的:观察蛇床子催眠活性组分对PCPA松果体损伤大鼠结构、功能的保护作用及生物钟基因表达的影响,探讨蛇床子催眠活性组分催眠作用机制.方法:采用腹腔注射PCPA 450 mg/kg连续2 d,建立大鼠松果体损伤模型,灌胃蛇床子催眠活性组分高、低剂量(60、30 mg/kg)并设褪黑素(10 mg/kg)阳性对照组,检测血...     

蛇床子催眠活性组分对对氯苯丙氨酸致失眠大鼠海马钟基因与氨基酸类神经递质表达的影响

目的观察蛇床子催眠活性组分(SCZ)对失眠大鼠海马神经递质及钟基因表达的影响,探讨其催眠作用机制。方法采用ip对氯苯丙氨酸(PCPA)建立大鼠失眠模型,ig给予低(25 g/kg)、中(50 g/kg)、高(100 g/kg)剂量SCZ,并设阳性对照(地西泮)组,给药3 d,免疫组织化学法检测大鼠海马齿状回γ-氨基丁酸(GABA)和谷氨酸(Glu)受体蛋白的表达;高效液相色谱法和免疫组化法检测大鼠海马GABA和Glu含量的变化;实时荧光定量PCR检测大鼠海马Clock、Bmal1、Cry1、Cry2、Per1、Per2、Per3等生物钟基因的表达水平。结果免疫组化结果显示,与对照组比较,模型组大鼠海马齿状回GABA表达水平显著降低,Glu表达水平显著升高(P0.05、0.01);与模型组比较,SCZ中、高剂量组大鼠海马齿状回GABA表达水平显著升高,Glu表达水平显著降低(P0.01)。HPLC结果显示,与对照组比较,模型组大鼠海马GABA表达水平显著降低,Glu表达水平显著升高(P0.05、0.01);与模型组比较,SCZ中、高剂量组大鼠海马组织Glu表达水平显著降低(P0.05),SCZ高、低剂量组大鼠GABA表达水平显著升高(P0.01)。生物钟基因表达水平检测结果显示,与对照组比较,模型组大鼠Clock、Bmal1基因表达水平显著升高(P0.05),Cry1、Per1、Per2基因表达水平显著降低(P0.05、0.01)。与模型组比较,SCZ中剂量组大鼠Clock、Bmal1基因表达水平显著降低(P0.01);SCZ高剂量组大鼠Cry1、Per1、Per2基因表达水平显著增高(P0.05、0.01),SCZ低剂量组大鼠Per1基因表达水平显著增高(P0.01)。结论蛇床子催眠活性组分通过降低海马Clock、Bmal1表达,提高Cry1、Per1、Per2基因的表达水平,增加抑制性、减少兴奋性氨基酸类神经递质的表达,从而调节睡眠-觉醒周期,达到治疗失眠的效果。     

不同辅料膏方的制备工艺研究

目的 优选不同辅料膏方制备工艺的最佳条件参数.方法 以膏方的性状特征、成膏率及药材检出情况为控制指标,采用多指标综合评分法评价膏方成型性;以辅料的使用量(A)、清膏(B)和成品膏(C)的相对密度为3个因素,采用星点设计进行试验,优选膏方制备工艺.结果 4种不同辅料膏方的制备工艺分别为红糖:A1 18％～23％、B1 1.210～1.260、C1 1.310～1.360;鹿角胶:A2 14％～16％、B2 1.200～1.250、C2 1.230～1.270;龟甲胶:A3 12％～15％、B3 1.190～1.230、C3 1.210～1.240;阿胶:A4 5.0％～8.0％、B4 1.190～1.220、C4 1.190～1.220.结论 优选的不同辅料的膏方制备工艺参数均准确可行,质量符合要求.     

异虎耳草素对原代海马神经元细胞抑制性神经递质及其受体基因表达的影响

目的:观察异虎耳草素对原代海马神经元细胞γ-氨基丁酸(GABA),5-羟色胺(5-HT)含量及受体基因表达的影响,探讨其催眠作用机制。方法:体外培养SD乳鼠原代海马神经元细胞,在细胞生长状态最佳时,经神经元特异性烯醇化酶(NSE)免疫组化鉴定纯度并给药。分为空白组,地西泮组(25 mg·L~(-1)),异虎耳草素低、中、高剂量组(5,10,20 mg·L~(-1)),共5组,给药24 h后流式细胞术检测海马神经元细胞早期凋亡率,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞上清液GABA,5-HT含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测细胞内γ-氨基丁酸A型受体(GABAA)基因GABRA_1,GABRA_5,GABRB_2,γ-氨基丁酸B型受体(GABAB)基因GABBR1,5-羟色胺1A型受体(5-HT1_A)基因5-HT1_(A(A)),5-HT1_(A(B)),5-HT1_(A(C))表达的变化。结果:第7天海马神经元细胞生长状态良好,鉴定纯度 90%;与空白组比较,海马神经元细胞早期凋亡率异虎耳草素中、高剂量组显著降低(P 0. 01),GABA含量异虎耳草素高剂量组显著升高(P 0. 01),GABRA_1,GABRA_5,5-HT1_(A(A)),5-HT1_(A(C))mRNA表达异虎耳草素中、高剂量组显著升高(P 0. 05,P 0. 01),GABBR_1,5-HT1_(A(B))mRNA表达异虎耳草素各组均显著升高(P 0. 05,P 0. 01)。结论:异虎耳草素催眠作用机制可能与抑制海马神经元细胞凋亡,升高抑制性神经递质GABA含量,上调GABA与5-HT相关受体基因表达有关。     

胃肠康定胶囊的质量标准研究

目的 建立胃肠康定胶囊的质量控制方法.方法 采用TLC法鉴别方中黄连、延胡索、三七;采用HPLC法对芍药苷进行含量测定.结果 本品定性鉴别薄层色谱特征明显,专属性强;芍药苷在0.0636～1.272μg的范围内线性关系良好(r=1),平均回收率为98.15％,RSD=1.32％(n=6).结论 所建立的方法简单,准确,重复性好,可作为胃肠康定胶囊的质量控制标准.     

HPLC测定颈腰康片中士的宁的含量

目的：建立颈腰康片中士的宁含量的测定方法。方法：采用反相高效液相色谱法,Hypersil BODC18（5um,250mm×4．6mm）,流动相：甲醇-1％冰乙酸-三乙胺（24：76：0．1）,检测波长254nm,流速1．0mL／min,柱温20℃。结果：士的宁在4．052～30．440ug/mL范围内线性关系良好（r=0．9996）,平均回收率为99．65％,RSD=0．76％（n=5）。结论：该法操作简便、准确,适用于颈腰康片的质量控制。     

基于ITS2条形码鉴定藏柴胡及其易混品

目的 采用DNA条形码分子鉴定技术鉴定藏柴胡（又名窄竹叶柴胡）Bupleurum marginatum及其易混品,以确保柴胡药材质量及临床用药安全。方法 收集柴胡药材共50份,对其ITS2序列进行PCR扩增并双向测序,所得序列用CodonCode Aligner软件校对拼接后,利用MEGA 6.0对序列进行分析比对,计算种内、种间遗传距离,利用邻接法（NJ）构建系统聚类树,并应用ITS2数据库网站预测其ITS2二级结构。结果 藏柴胡种内遗传距离明显小于它与其同属的种间遗传距离,基于ITS2建立的NJ树和网站预测的ITS2二级结构,均能准确将藏柴胡药材与其易混药材区分。结论 基于ITS2序列可以科学准确地鉴别藏柴胡药材及其易混品,为确保临床用药安全提供更多先进可靠的技术手段。     

谱效关系分析蛇床子镇静催眠的活性物质

目的：利用指纹图谱与药效相关性分析,研究蛇床子镇静催眠活性目标化合物。方法：采用高效液相色谱法,固定相为EliteSinoChromODS—BP5μm（4．6mm×250mm）,流动相为乙腈-0．1％醋酸水溶液;梯度洗脱程序为：0～15min乙腈由23％增加到45％,15～30min乙腈由45％增加到100％,30～40min乙腈为100％;检测波长245nm（0—26min）,322nm（26～30min）,245nm（30～40min）;柱温：40℃;建立蛇床子指纹图谱。对蛇床子采用不同极性溶剂提取,观察戊巴比妥钠持续睡眠时间,比较各提取物镇静催眠活性,并建立相应的指纹图谱。利用SPSS17．0统计分析软件计算各指纹峰峰面积与持续睡眠时间的Pearson相关系数,寻找与镇静催眠活性相关性大的指纹峰。结果：蛇床子各提取物指纹图谱中有8个共有峰,其中6#峰为欧前胡素,7#峰为蛇床子素。分析各指纹峰峰面积与镇静催眠活性相关性发现,5#峰与镇静催眠活性有显著相关性。结论：除已知具有催眠活性的蛇床子素、欧前胡素外,还发现1种镇静催眠活性目标化合物。     

西藏胡黄连中1个新的葫芦烷型糖苷化合物

采用柱色谱方法对西藏胡黄连Picrorhiza scrophulariiflora乙醇提取物进行提取分离,并通过HR-MS、1D和2D NMR等技术鉴定结构,同时采用CCK-8法检测细胞毒性。结果分离得到4个葫芦烷型糖苷,分别为2β-D-葡萄糖氧基-3β,16α,20β-三羟基-9-甲基-19-去甲羊毛甾-5,25-二烯-22-酮(1)、2β-D-葡萄糖氧基-3β,16α,20β-三羟基-9-甲基-19-去甲羊毛甾-5,24-二烯-22-酮(2)、25-乙酰氧基-2β-葡萄糖氧基-3β,16α,20β-三羟基-9-甲基-19-去甲羊毛甾-5-烯-22-酮(3)、25-乙酰氧基-2β-葡萄糖氧基-3β,16α,20β-三羟基-9-甲基-19-去甲羊毛甾-5,23-(E)-二烯-22-酮(4),其中化合物1为1个新的葫芦烷型糖苷。对4种肿瘤细胞的半数抑制浓度均大于100μmol·L^-1,表明这4个化合物无明显细胞毒作用。     

一测多评法同时测定扶正固本颗粒中6种成分的含量

目的:建立扶正固本颗粒中2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯基葡萄糖苷、黄芩苷、淫羊藿苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素等6种成分含量的测定方法.方法:采用高效液相色谱法.色谱柱为Dikma Diamonsil C18,流动相为乙腈-0.1％磷酸水溶液(梯度洗脱),检测波长为275 nm(0～8 min)、320 nm(8～9...