热休克蛋白70在百草枯诱导的肺部炎性反应中的表达

目的 探讨百草枯中毒致急性肺损伤中热休克蛋白70(HSP70)的表达.方法 72只健康Wistar大鼠随机平均分成3组,分别腹腔注射生理盐水(A组)、20 mg/kg百草枯(B组)和40 mg/kg百草枯(C组).分别于1,2,3,6,12和24 h留取标本,应用免疫组织化学染色、Western blot方法测定肺组织中HSP70的蛋白表达.结果 B组和C组大鼠肺组织发生急性肺损伤.B组大鼠2 h后HSP70表达与A组相比开始增强,6 h为表达高峰,12 h表达减少,24 h表达水平与A组相当.C组1 h后HSP70表达与A组相比明显增强,3 h达到高峰,24 h后与A组水平一致.结论 百草枯诱导的急性肺损伤可引起支气管、细支气管和肺泡上皮细胞HSP70应激性表达,提示HSP70对肺损伤起保护作用.     

孕妇血浆DNA中内参基因拷贝数稳定性的评价

目的: 探讨孕妇血浆和非孕妇血浆游离DNA中常用内参基因的拷贝数稳定性,为孕妇血浆游离DNA的定量研究提供参考。方法: 选择孕龄为12周左右的健康孕妇及健康未孕女性各18名,取外周静脉血并提取血浆DNA,将DNA样本分为孕妇与非孕妇整体组、孕妇组、非孕妇组、母体与胎儿整体组、母源DNA组和胎源DNA组,选取β-珠蛋白(HBB)、端粒酶(TERT)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)、白蛋白(ALB)、β-肌动蛋白(ACTB)和T细胞受体γ(TRG)为内参基因。采用实时荧光定量PCR(qPCR)法分析血浆DNA中内参基因Ct值,分别采用3款统计学软件geNorm、NormFinder和BestKeeper比较6种内参基因在各组样本中的拷贝数稳定性。结果: 1qPCR法,6种内参基因的所有PCR产物均特异性扩增。各组内参基因Ct值比较差异均无统计学意义(P>0.05)。各组ACTB的Ct值最低,HBB次之,即血浆DNA中ACTB和HBB拷贝数最高。2按照geNorm软件计算结果基因稳定值(M)由高到低的顺序、NormFinder软件计算结果含量稳定性由高到低的顺序、BestKeeper软件计算结果相关系数(R)由高到低的顺序,在各组样本中将6种内参基因按照其拷贝数稳定性由高到低进行排序。综合分析3种软件的分析结果,在孕妇与非孕妇整体组、孕妇组、非孕妇组、母体与胎儿整体组、母源DNA组和胎源DNA组中,拷贝数稳定性最高的内参基因分别为TERT、ACTB、ALB、HBB、HBB及HBB。3母体与胎儿整体组、母源DNA组、母源DNA组和胎源DNA组内参基因的Ct值比较差异均有统计学意义(F=114.84,P<0.05)。结论: 当采用qPCR法对来自于孕妇与非孕妇整体、孕妇、非孕妇、母体与胎儿整体、母源DNA和胎源DNA的血浆游离DNA进行定量分析时,推荐分别选择TERT、ACTB、ALB、HBB、HBB及HBB作为校正内参基因。     

5种血浆游离DNA提取方法的比较

目的分别应用5种方法进行血浆游离DNA的提取,从而判定与筛选最佳的血浆cfDNA提取方法。方法采集19例健康人血浆标本,针对每一样本取350ml血浆分别应用经1次／2次酚-氯仿-异戊醇抽提法,经1次／2次酚-氯仿-异戊醇抽提配合微量DNA助沉剂法和介孔纳米磁珠法5种方法进行cfDNA提取,应用紫外分光法测定提取cfDNA的含量与纯度,应用实时荧光定量PCR方法以提取血浆cfDNA为模板进行扩增反应,以验证提取效果。结果应用5种方法从19例350ml血浆样本中提取的血浆cfDNA含量分别为（6971．43±1934．40）ng／ml、（2196．86±823．94）ng／ml、（12397．14±4197．37）ng／ml、（5568．29±1618．17）ng／ml和（7458．57±3706．83）ng／ml,A260／A280值分另0为0．93±0．07、1．09±0．12、1．15±0．05、1．16±0．12和0．89±0．19,RT-qPCR扩增成“功率为100％。结论经1次酚-氯仿-异戊醇配合微量DNA助沉剂法提取量大,纯度高,所提取的血浆cfDNA可以为RT-qPCR提供模板,进行后续实验。     

孕妇外周血中游离胎儿DNA富集与分离方法及在无创性产前诊断中的应用

在我国,每年新生儿出生缺陷多达80万至120万,尽早进行产检筛查和诊断是最有效的应对措施,然而目前常规的诊断方法皆为有创性方法,对胎儿和孕妇都有一定的危险性,因此发展新的无创性产前诊断具有重要的临床意义。1997年Lo等发现在孕妇血浆中存在着少量的游离胎儿DNA（Cell-freefetalDNA,effDNA）,为无创性产前诊断方法提供了新的途径。     

呼吸按摩法在减轻产妇自然分娩疼痛中的作用

目的 初产妇常常对自然分娩产生紧张、恐惧的心理,甚至发生心理上的难产.文中从产前夫妻共同参与产前健康教育来探讨呼吸按摩法在自然分娩中缓解产妇阵痛的作用. 方法 对100名参与及100名未参与产前健康教育的初产妇夫妻分别进行自行设计的问卷调查,内容涉及产妇对运用呼吸法及临产初期丈夫正确使用按摩法对产妇缓解阵痛的作用. 结果 通过调查发现,参与产前健康教育的产妇对正确使用呼吸法及临产后丈夫运用呼吸按摩法帮助产妇缓解阵痛的满意率均高于未参加产前健康教育的产妇. 结论 呼吸按摩法在产妇临产后因丈夫的积极参与,能起到保持产妇良好情绪、缓解阵痛的作用,利于其顺利完成自然分娩,防止心理难产的发生.