HSCs改善糖尿病小鼠血-视网膜屏障功能的研究

目的探讨自体造血干细胞动员是否可使成体造血干细胞（HSCs）环境诱导分化，修复受损的视网膜微血管内皮细胞，使血-视网膜屏障得到功能性重建。方法糖尿病小鼠和正常小鼠各分为干细胞动员组和生理盐水对照组。流式细胞术以CD34-／low和scal^＋为标记鉴定外周血HSCs。小鼠视网膜病理切片行苏木精-伊红染色观察和VEGF免疫组织化学分析，伊文思蓝定量检测血-视网膜屏障的破坏程度。结果自体干细胞动员使糖尿病小鼠视网膜的VEGF表达量明显下降。糖尿病小鼠经干细胞动员后清蛋白的渗出量明显下降（P=0．033）。结论自体HSCs动员可以通过外周血干细胞倍增使血-视网膜屏障得到一定程度的功能性修复。     

HTRA1基因过表达对视网膜色素上皮细胞增殖及迁移影响

目的 研究HTRA1基因过表达对人视网膜色素上皮细胞(RPE)的增殖和迁移能力的影响,探讨HTRA1基因在老年黄斑变性(AMD)发病中的作用.方法 用携带人HTRA1基因的慢病毒感染体外培养的人RPE细胞,荧光显微镜下观察细胞的感染效率,RT-PCR和Westem Blot检测HTRAlmRNA和蛋白的表达,MTT比色法检测感染细胞毒性及细胞增殖能力,TransweH小室检测细胞迁移能力变化.结果 与空载体慢病毒感染RPE细胞相比,HTRA1基因慢病毒感染的RPE细胞HTRA1mRNA和蛋白的表达量明显增加,细胞增殖能力及迁移能力均明显下降,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 过表达HTRA1基因能抑制人视网膜色素上皮细胞的增殖及迁移,THRA1基因可能通过影响RPE细胞功能参与AMD的进程.     

外泌体负载的KV11通过VDAC1和自噬机制对角膜新生血管的抑制作用

目的探讨外泌体(EXO)负载的抗新生血管短肽KV11在角膜新生血管(CNV)中的作用及其机制。方法利用EXO锚定肽CP05将KV11结合到血管内皮来源的EXO膜表面, 形成EXO-KV11。通过Apogee纳米流式分析EXO负载KV11的效率和最佳浓度比。选取8周龄SPF级健康雄性SD大鼠100只, 其中10只大鼠不做任何处理, 为正常对照组;其余大鼠在建立碱烧伤诱导CNV大鼠模型后, 采用随机数字表法随机将大鼠分为EXO-KV11组、KV11组和生理盐水组, 每组各30只。从碱烧伤后第1天开始每隔1天, 各组分别结膜下注射100 μl EXO-KV11(25 μg)、KV11(25 μg)或生理盐水。观察第1、4、7、14天时CNV的生成情况;采用荧光素心室灌注、角膜血管造影法计算CNV面积;采用苏木精-伊红染色法观察各组CNV管腔数量;采用免疫组织化学法检测角膜组织中CD31的表达分布;采用Western blot法检测电压依赖性阴离子通道1(VDAC1)和内质网应激、自噬及凋亡相关蛋白的表达水平。结果 Apogee流式分析确定KV11与EXO最佳浓度比为4∶1, EXO负载KV1...     

尿激酶型纤溶酶原活化因子系统与视网膜新生血管

uPA/uPAR系统是一个多向性的活化系统,两者结合后可促使细胞表面的纤溶酶原转变为纤溶酶,降解多种基质蛋白成分,促进细胞迁移.此外,uPAR还可以与β1、β2、β3整合素结合调节细胞黏附、移行,并通过激活Src激酶家系调节细胞信号传递.最近几年的临床和实验已经证明uPA/uPAR系统在眼科病理性新生血管性疾病中发挥着重要作用,文中针对目前研究已经证实的uPA/uPAR系统在新生血管形成和发展过程中的作用机制以及进一步将uPA/uPAR系统作为治疗靶目标,选择性的抑制新生血管形成发展的实验研究进展进行综述.     

玻璃体黄斑牵引综合征的手术疗效观察

目的 探讨玻璃体手术治疗玻璃体黄斑牵引综合征的临床效果及光相干断层扫描、荧光素眼底造影对手术疗效的评价.方法 经裂隙灯前置镜、间接眼底镜检查、B超、光相干断层扫描(OCT)、荧光素眼底血管造影(FFA)等检查确诊为玻璃体黄斑牵引综合征行玻璃体手术的患者30例(30只眼)的临床资料进行回顾性分析.结果 30只眼经手术解除玻璃体对黄斑部的牵引.术后20只眼视力提高.术后黄斑区牵引处OCT测量高度平均减小267μm,有明显改善.术前荧光素眼底血管造影检查存在黄斑囊样水肿伴渗漏,术后明显减轻.术前合并高度近视眼者视力预后不佳.结论 玻璃体手术能够有效解除玻璃体对黄斑部的牵引,阻止患者视力进一步下降,减轻黄斑水肿及渗漏,是治疗玻璃体黄斑牵引综合征的有效方法.光相干断层扫描及荧光素眼底造影检查可以对手术疗效进行评价,有利于术后随访.

Abstract：

Objective To evaluate the efficacy of vitreous surgery for patients with vitreomacular traction syndrome. Methods Of 30 patients (30 eyes) who underwent vitrectomy for vitreomacular traction syndrome were retrospectively analyzed. Results Vitreomacular traction was released successfully, and a better visual acuity was obtained in 20 eyes. Mean macular thickness decreased by 267μ m postoperatively. The eyes showed statistically significant improvement in visual acuity and central macular thickness (P <0.05). Optical coherence tomography (OCT) and fluorescein fundus angiography (FFA) showed macular edema gradually alleviated after vitreous surgery. Preoperative high myopia was associated with prognosis of postoperative visual acuity (P<0.05). Conclusions Vitrectomy can relieve macular traction, and is effective for decreasing macular thickness and improvement of vision in vitreomacular traction syndrome. OCT and FFA are useful for evaluation and follow-up for vitreomacular traction syndrome.     

槲皮素对高压氧诱导的人晶状体上皮细胞凋亡的抑制作用

背景 氧化应激诱导的晶状体上皮细胞( LECs)凋亡与c-Jun氨基末端激酶(JNK)细胞信号通路有关;槲皮素能抑制JNK细胞信号通路并且有显著的抗氧化作用,但其对高压氧诱导的人LECs损伤有无保护作用有待研究. 目的 研究高压氧诱导人LECs凋亡的作用及槲皮素对高压氧处理的人LECs的保护作用,探讨JNK细胞信号通路在上述过程中的作用.方法 人LECs细胞系SRA01/04在MEM培养基中进行培养,传至第3代进行实验.实验细胞分为空白对照组、高压氧组(体积分数99％ O2+体积分数1％ CO2)、高压氧+SP600125组和高压氧+槲皮素组,实验前2h分别在后2个组人LECs培养基中加入20μmol/L JNK2特异性抑制剂(SP600125)或1μmol/L槲皮素预孵育,除空白对照组外,其他3个组于588 kPa高压氧舱处理6h后收集人LECs.应用MTT法检测各组人LECs的细胞活力,以570 nm处吸光度(A)值表示.用流式细胞仪以Annexin V-FITC试剂盒检测人LECs处理后各组细胞的凋亡率,通过Western blot法检测各组人LECs中JNK/p-JNK、c-Jun/p-c-Jun、caspase-3、caspase-9的蛋白表达情况. 结果 实验6h后,高压氧组、高压氧+SP600125组、高压氧+槲皮素组人LECs活力分别为0.450±0.083、0.654±0.079、0.649±0.090,明显低于空白对照组(0.835±0.082),差异均有统计学意义(P=0.001);高压氧+SP600125组、高压氧+槲皮素组人LECs活力明显高于高压氧组(P=0.003、0.002).高压氧组、高压氧+SP600125组、高压氧+槲皮素组人LECs凋亡数分别为19.77±1.44、8.45±0.93、7.79±0.78,明显高于空白对照组的3.17±0.74,差异有统计学意义(P=0.000);高压氧+SP600125组、高压氧+槲皮素组人LECs细胞凋亡数明显少于高压氧组,差异均有统计学意义(P=0.000).同时,高压氧组人LECs中p-JNK、p-c-Jun、caspase-3和caspase-9蛋白的表达量明显高于空白对照组,差异均有统计学意义(P=0.000),而高压氧+SP600125组、高压氧+槲皮素组人LECs中p-JNK、p-c-Jun、caspase-3和caspase-9蛋白的表达量明显低于高压氧组,差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 JNK细胞信号通路在高压氧诱导的人LECs凋亡发生发展中起重要作用,SP600125和低浓度的槲皮素能抑制JNK细胞通路和细胞内源性凋亡途径,减轻高压氧引起的人LECs损伤.     

虹膜色素上皮细胞自体移植的研究

虹膜色素上皮 (iris pigment epithelium ,IPE)与视网膜色素上皮 (retinal pigment epithelium,RPE)都来源于神经外胚层 ,二者可能具有许多相似的功能 [1 - 4 ] 。国外进行了 IPE细胞移植的研究 ,但主要是异种或同种异体间的移植。自体 IPE细胞移植已应用于临床 ,然而 ,自体 IPE细胞移植后移植结果的组织学研究报道甚少。我们将兔的自体 IPE细胞移植到视网膜下腔并对其进行了光镜和电镜观察 ,现将结果报告如下。1　材料和方法1.1　IPE细胞的准备12只健康有色兔 (青岛大学医学院动物中心提供 ) ,摘除右眼 ,分别取其 IPE细胞单独培…     

整合素连接激酶与缺氧状态下VEGF表达的实验研究

目的探讨缺氧状态下整合素连接激酶(ILK)的表达是否增高以及这种增高与血管内皮生长因子(VEGF)的表达上调是否相关。方法将恒河猴视网膜脉络膜血管内皮细胞(RF/6A)置于94%N2、5%CO2和1%O2的低氧环境,检测0、1、2、3、4hILK,HIF-1α和VEGF的mRNA及蛋白表达水平,进一步用LY294002抑制ILK的活性或RNA干扰抑制ILK的表达后再次检测缺氧4h上述3种因子的表达情况。结果在缺氧0hILK、HIF-1α和VEGF的mRNA及蛋白表达均较低,而缺氧1～4hILK、HIF-1α和VEGF的mRNA及蛋白表达均明显增高,但这种增高都会因为ILK的表达或活性受到抑制而被抑制。结论缺氧状态下在RF/6A细胞中ILK的表达增高,并且ILK的表达增高也会使HIF-1α和VEGF表达上调,说明ILK参与缺氧状态下RF/6A细胞VEGF的表达。     

重组腺伴随病毒载体介导Kringle5基因对SD大鼠视网膜神经细胞及血管内皮细胞的影响

目的:研究腺伴随病毒载体介导Kringle5基因对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUC)及视网膜神经细胞影响作用.方法:亚克隆构建pSNAV-Kringle5-gfp 载体,腺伴随病毒包装形成rAAV-Kringle5-gfp;HUC培养及SD大鼠视网膜神经细胞培养;按设计分为试验组、阴性对照组和空白对照组;聚合酶链反应(PCR),MTT法对各组进行细胞活力测定;荧光显微镜照相.结果:腺伴随病毒载体介导 Kringle5基因产生Kringle5物质对HUC有抑制作用,实验组与对照组比较P＜0.01,实验组与空白对照组比较P＞0.05:腺伴随病毒载体介导Kringle5基因产生Kringle5物质对SD大鼠视网膜神经细胞实验组和空白对照组没有影响,实验组与对照组及实验组与空白对照组比较P＞0.05.结论:腺伴随病毒载体介导Kringle5基因能够对新生血管有抑制作用而对视网膜神经细胞无不良影响作用.