Notch信号通路与肝脏发育及肝脏疾病关系的研究进展

Notch基因最早于果蝇体内发现,因其部分功能缺失会导致果蝇翅缘缺刻(Notch)而得名.20世纪80年代中期,Artavanis Tsakonas首次克隆了该基因,发现其编码一类单次跨膜蛋白,即Notch受体.随后发现,从无脊椎动物到脊椎动物多个物种中Notch基因均有表达,其家族成员的结构高度保守.Notch信号通路几乎涉及所有细胞的增殖和分化活动,在调节细胞分化、增殖、凋亡等一系列生理、病理过程中都起重要作用.Notch信号通路在肝脏发育和肝脏疾病的发生、发展中有重要的调控作用,本文就近年来的研究进展做一综述.     

大鼠肝硬化模型中小肝细胞分离培养方法的建立及其表型分析

目的：探讨体外分离培养大鼠小肝细胞（SHC）的方法，并对其进行表型鉴定。方法：利用二乙基亚硝胺饲喂法，建立SD大鼠肝硬化模型。采用改进后两步胶原酶灌注消化法分离细胞。光镜下观察细胞形态。电镜下观察细胞形态及超微结构。采用计数法测定细胞生长曲线，流式细胞术（FCM）测定细胞周期。通过免疫细胞化学染色法进行表型鉴定。结果：原代培养的大鼠SHC，24h内即可见贴壁伸展，48h左右克隆形成。光镜下可观察SHC核仁小而清晰，胞质少，细胞体积较小；电镜下可见SHC表面少量短而小的微绒毛突起，细胞体积小，核浆比例高，呈现未分化细胞的形态。免疫细胞化学染色显示SHC胞质AFP、CK-7、CK-8及CK-19呈棕黄色阳性信号。结论：改进后的两步胶原酶灌注消化方法能较容易地获得大量纯度较高的SHC。     

胰源性门脉高压症

在解剖学上胰腺和门静脉系统存在的密切关系，胰腺的病变有时可以影响门静脉系统的正常血液回流而引起区域性门静脉系统压力升高称为胰源性门脉高压症（pancreatic sinistral portal hypertension PSPH），多是由于胰腺疾病及其并发症致使脾静脉受压、扭曲、管壁炎性增厚或管内堵塞，孤立性脾静脉血栓形成，影响脾静脉回流，导致脾静脉压力增高，最终脾脏肿大和脾胃区静脉压增高。     

大鼠肝癌肺转移灶中边缘群细胞的分离与表型鉴定

目的：建立肝癌远处器官转移灶中边缘群肝癌细胞的分离方法并对其干细胞特征进行鉴定．方法：利用二乙基亚硝胺（DEN）建立大鼠肝癌肺转移灶模型;组织块原代培养法扩增培养肺转移灶中的肝癌细胞,对细胞进行Ho-echst 33342及不同荧光标记的c—kit,Sca-1 mAb染色后,利用流式细胞仪（FACS）分选肝癌肺转移灶中的边缘群及非边缘群细胞,并分析两群细胞表面干细胞标志物的表达特征;软琼脂克隆形成分析两群细胞的肿瘤形成能力．结果：成功建立大鼠肝癌肺转移灶模型,并在此基础上获得性质较为均一并可稳定传代的肺转移肝癌细胞株;FACS分析表明边缘群细胞占肺转移肝癌细胞总细胞量的0．5％,边缘群细胞表面c-妇表达率为85％,Sca-1表达率为75％,而非边缘群细胞表面c-kit及Sca-1表达率分别仅为8％和3％;软琼脂克隆实验结果表明边缘群细胞平均克隆形成率为69．9％,非边缘群细胞平均克隆形成率为15．3％,边缘群细胞肿瘤形成能力显著高于非边缘群细胞（P〈0．01）．结论：肺转移肝癌细胞中的边缘群细胞具备显著的肿瘤干细胞特征．     

肝干细胞与肝癌干细胞

正常肝干细胞在致癌因素作用下发生基因突变，获得无限增殖能力成为肿瘤干细胞，肿瘤干细胞分化成各种分化等级、表型不一的肿瘤。在正常肝干细胞转化成肝癌干细胞的过程中保留了一些干细胞表型特征和进一步向相对成熟细胞分化的能力。正常肝干细胞是肝癌重要起源。     

腹腔镜脾切除联合贲门周围血管离断术治疗门静脉高压上消化道出血

从胃大弯侧中部开始向头侧方向切断胃结肠韧带,凝闭切断胃网膜左血管、胃短血管直到胃底和贲门左侧。切断胃胰皱襞,在胰尾部上缘显露并夹闭脾动脉主干。继续凝断脾结肠韧带、脾肾和脾膈韧带,在脾门处显露胰尾,以切割闭合器切断脾蒂,完成脾切除。凝断食管下端和胃近端覆盖的韧带和血管,暴露两侧膈肌脚和膈肌裂孔,切断小弯侧肝胃韧带,向膈肌裂孔内继续切断食管周围高位和异位门体交通支,切断和夹闭胃左和胃右动脉交通支,闭合器切断胃左动、静脉,完成贲门周围血管离断。胃底行内翻折叠缝合。常规取标本,冲洗、止血、放置引流管。     

冷沉淀在门奇静脉断流术治疗门静脉高压患者中的应用

目的探讨使用冷沉淀对降低门奇静脉断流术围手术期大出血等风险的作用,及其对术后并发症的影响。方法68例门脉高压患者实施脾切除、门奇静脉断流术。患者随机分为两组,34例为冷沉淀使用组,于术中输注冷沉淀10单位;34例为对照组,术中不使用冷沉淀。比较两组患者术后创面出血情况、凝血酶原时间、术后恢复情况及消化道再出血、门静脉系统血栓等并发症的发生率等。结果与对照组比较,输注冷沉淀的门奇静脉断流患者,术后创面失血明显减少,腹腔内及消化道大出血的发生率降低。患者恢复较快,术后平均住院日低于对照组。门静脉系统血栓等并发症不高于对照组。结论门奇静脉断流术中输注冷沉淀可改善凝血机能,有效预防围手术期大出血的发生,有助于患者术后恢复。其使用未增加门静脉系统血栓等并发症的发生,安全有效。     

经典Notch信号途径通过JAK2／STAT3信号途径抑制细胞内ROS对肝细胞缺血再灌注损伤发挥保护作用

肝脏缺血再灌注（ischemiareperfusion，I／R）损伤中，再灌注后早期细胞内蓄积的过量的活性氧族（reactiveoxygenspecies，ROS）是启动细胞损伤的最主要因素，然而关于细胞调控ROS产生及清除的机制尚不明确。     

大鼠小肝细胞移植对急性肝损伤的影响

目的 探讨小肝细胞(small heptocytes,SHCs)移植对四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)+2/3肝切(partial hepatectomy,PH)所致急性肝损伤的影响.方法 选择健康SD大鼠20只,饲喂含二乙基亚硝胺(DEN)饲料建立SD大鼠SHCs增殖模型.分离、培养、鉴定(电镜、免疫细胞化学)原代SHCs.SHCs行PKH26膜荧光染色.将实验用同一近交系SD大鼠30只随机平均分成空白对照组(B)、损伤造模组(M)和SHCs移植组(T).B组腹腔注射生理盐水.M组、T组腹腔注射CCk.24 h后戊巴比妥腹腔麻醉,消毒开腹.M、T组行2/3肝切,B、M组门静脉注入生理盐水,T组门静脉注入经膜荧光标记SHCs悬液.4周后.采血测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST),并取病理标本做冰冻切片荧光显微镜下观察及HE染色普通光镜下观察.结果 电镜下观察可见SHCs表面少量短而小的微绒毛突起,核浆比例高.呈现未分化细胞的形态.免疫细胞化学观察SHCs胞质AFP、CK-19染色呈棕黄色阳性信号.SHCs移植可以显著降低CCl4+2/3PH致肝损伤血清ALT、AST水平,可以明显改善CCl4+2/3PH致肝损伤肝脏病理改变.T组冰冻切片荧光显微镜下可以观察到由SHCs分化的肝细胞形成的肝板结构.结论 SHCs移植对CCl4+2/3PH所致急性肝损伤有一定治疗作用.