人脐静脉血管内皮细胞的高效分离与培养

目的:建立人脐静脉内皮细胞(HUVEC)体外分离、培养、鉴定的高效方法.方法:胰酶消化法从脐静脉获得HUVEC,观察其形态并传代培养,检测其摄取Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白(Dil-AcLDL)的情况,传3代流式榆测内皮细胞特异性表达.结果:消化分离的细胞呈小圆形且聚集成团;2h细胞开始贴壁,呈条索状;7d细胞增多呈漩涡样生长;此后细胞继续增多接近融合,呈铺路石样改变.流式检测细胞高表达血管内皮细胞特异性标志CD144、vWF、CD31,部分表达CD34,而白细胞共同抗原CD45为阴性表达.镜下发现贴壁细胞原代、第5代摄取Dil-AcLDL,胞浆呈现红色荧光,提示为有活性的内皮细胞.结论:利用胰酶消化法能从人脐静脉获得大量内皮细胞,体外培养后能成功增殖传代.     

机械通气重症患者行持续浅镇静目标导向调控方案的效果研究

目的:探讨机械通气重症患者行持续浅镇静目标导向调控方案的效果。方法:选取ICU收治的84例机械通气重症患者,按照随机数字表法分为两组,每组各42例。其中对照组采用标准镇静方案治疗,观察组采用持续浅镇静目标导向调控方案治疗,比较两组患者的术中、术后疗效指标。结果:观察组入组48 h内的浅镇静达标率(65.85%)显著高于对照组(52.92%)(P<0.05);观察组的谵妄发生率为16.67%,明显低于对照组的38.10%(P<0.05);观察组的机械通气时间[(7.32±1.05) d]、ICU住院时间[(13.62±7.51) d]和非计划拔管率(9.52%)均显著低于对照组(P<0.05);两组30 d生存率差异无统计学意义(P>0.05)。结论:持续浅镇静目标导向调控方案可明显提高机械通气重症患者48 h内的浅镇静达标率,显著改善预后。     

缺氧预处理对脐带间充质干细胞bFGF分泌的影响

目的 探讨氯化钴(CoCl_2)模拟缺氧预处理对人脐带间充质干细胞(UC-MSCs)碱性成纤维生长因子(bFGF)分泌的影响.方法 分离、培养人UC-MSCs,显微镜观察其形态学特征,并运用流式细胞仪检测其表面标志物的表达;选取P3代健康人UC-MSCs,MTT法检测不同浓度(0、50、100、150、200、250μmol/L)CoCl_2对UC-MSCs活力及增殖的影响,然后将细胞分为4组,分别采用0、50、100、150μmol/L CoCl_2处理,于24、48、72h后检测bFGF蛋白及mRNA的表达并分析各组间的差异.结果 经适当浓度(≤150μmol/L)CoCl_2处理后,UC-MSCs生长加快,平台期提前,而高浓度(>200μmol/L)CoCl_2对细胞活力有负面影响.经50、100、150μmol/L CoCl_2处理后,各组bFGF蛋白分泌水平均明显高于0μmol/L CoCl_2处理组(P<0.05),且48、72h时点均高于24h时点(P<0.05),150μnol/L CoCl_2处理组72h时点bFGF蛋白表达水平明显低于48h(P<0.05),100μmaol/L CoCl_2处理组72h时点bFGF蛋白表达水平明显高于48h(P<0.05),而50μmol/LCoCl_2处理组72h时点与48h时点比较无显著差异.bFGFmRNA表达改变与蛋白基本相一致,但50μmol/L CoCl_2处理组在各时点没有显著差异.结论 适当浓度(≤150μmol/L)的CoCl_2对UC-MSCs增殖能力影响较小,可用于细胞模拟缺氧;缺氧预处理对人UC-MSCs的bFGF分泌有一定促进作用.     

脐血CD34＋细胞向内皮细胞诱导分化的体外研究

目的：探讨从脐血中分离CD34＋细胞,并诱导、鉴定其分化为内皮细胞的方法。方法：羟乙基淀粉沉降、密度梯度离心两步法制备脐血单个核细胞,免疫磁珠分选法（MACS）获得CD34＋细胞,在含有细胞因子的M199培养基中诱导。观察细胞形态变化,摄取Dit标记的乙酰化低密度脂蛋白（Dil—AcLDL）的情况,流式鉴定细胞表面标志。结果：分选CD34＋细胞纯度在91％以上,培养3d有明显集落形成及部分细胞贴壁,14d贴壁细胞呈条索状,逐渐增多后呈铺路石样改变。流式检测贴壁细胞表达血管内皮细胞特异性标志物CD144、vWF、CD31、CD34,而白细胞共同抗原CD45为阴性表达,与成熟的脐静脉内皮细胞表达率相近。免疫荧光发现贴壁细胞呈现红色荧光,提示细胞摄取Dil—AcLDL,证明CD34＋细胞分化为有功能的内皮细胞。结论：脐血中存在CD34＋细胞且用两步法和MACS可获得高纯度CD34＋细胞,在特定条件下可分化为内皮细胞。     

全科住院医师规范化培训毕业学员的岗位胜任力调查

目的了解全科住院医师规范化培训(住培)毕业学员的岗位胜任力情况。方法该研究为问卷调查。于2022年1至3月采用单纯随机抽样的方法抽取于苏州市立医院完成全科住培的2009至2021届学员, 对其进行问卷调查, 进一步对其中仍从事全科医疗的学员进行岗位胜任力调查。自行设计问卷, 内容包括学员的基本情况, 与岗位胜任力相关的临床、公卫、人文、科研教学能力的相关问题。每项能力满分100 分, 分为4个等级, 即A级86～100分、B级 70～85分、C级55～69分、D级0～54分, 评分为A级者认为该项能力优秀。统计各项能力达优秀学员的占比。结果 (1)基本情况:调查有效问卷回收率为96.3%(157/163)。纳入分析的157名毕业学员中男性62名(39.5%), 毕业后工作单位属性主要是城市社区卫生服务机构[78名(49.7%)], 所在岗位属性大部分仍为全科医疗[119名(75.8%)]。(2)临床诊疗能力:毕业学员的病史采集、基本药物使用、常见病多发病诊疗以及慢性非传染性疾病管理能力自评达优秀者占比均在半数以上, 分别为58.8%(70/119)、57.1%(68/119)、54.6...     

缺氧脐带间充质干细胞对脐血CD34＋祖细胞免疫反应的影响

目的：探讨脐带来源的缺氧间充质干细胞（MSCs）是否能有效抑制脐血CD34＋祖细胞免疫排斥反应,影响反应过程中免疫调节细胞因子的分泌。方法：从脐带中分离、培养MSCs,观察其生长形态,流式细胞术检测其表面标志;将缺氧处理后的脐带MSCs加到脐血CD34＋祖细胞、外周血单个核细胞（PBMc）共培养体系中,96h后收集上清液,ELISA检测IFN-γ和IL-10水平。结栗：脐带MSCs不表达CD40、CD80、CD86、HLA—DR、CD34;缺氧的脐带MSCs能抑制共培养体系中淋巴细胞IFN-γ的分泌（与对照组比,P〈0．05）,同时促进IL-10分泌（与对照组比,P〈0．05）,但与非缺氧脐带MSCs组相比,IFN-γ的分泌量增多,IL-10的分泌量减少。结论：缺氧脐带MSCs能抑制脐血CD34＋祖细胞的免疫排斥反应,抑制IFN-γ的分泌,同时促进IL-10分泌,但与非缺氧脐带MSCs相比,免疫调节功能下调。     

间充质干细胞对心肌损伤修复的研究进展

在过去的10年中,干细胞已成功地应用于治疗各种疾病:胰岛移植治疗糖尿病;利用胚胎神经前体细胞和神经干细胞治疗神经系统疾病(帕金森综合征、癫痫、休克、脊髓损伤);肝细胞和肝的干细胞治疗肝脏疾病.近几年,干细胞移植治疗缺血性心脏病已成为一个热点话题.大量的动物实验和前期临床试验表明这种治疗对心肌细胞再生和心脏血流动力学改变有着明显的疗效.在各种干细胞中,由于骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)具有取材方便、体外易培养和可诱导分化的特点,对其研究更加广泛和深入.现对MSCs在治疗心肌病中的应用作一综述.     

CoCl2缺氧处理对脐带间充质干细胞促血管生长因子表达的影响

目的: 探讨氯化钴(CoCl2)模拟缺氧预处理对人脐带间充质干细胞(UC-MSCs)中碱性成纤维生长因子(bFGF)和血管内皮生长因子(VEGF)基因表达及蛋白分泌的影响。方法: 分离、培养UC-MSCs。取第3代的UC-MSCs,运用含150 μmol/L的CoCl2培养液培养细胞72 h,用流式细胞仪检测缺氧对UC-MSCs表面标志物(CD34、CD45、CD90、CD105、CD29及CD49)的影响。依据CoCl2的浓度(0、50、100 μmol/L及150 μmol/L)将UC-MSCs分为4个组,即对照组、低、中、高CoCl2组,每个组处理24 h、48 h和72 h。用SYBRGREN荧光定量RT-PCR检测bFGF、VEGF mRNA的表达,用ELISA法检测bFGF和VEGF蛋白的表达。结果: 经含150 μmol/L CoCl2的培养液缺氧处理,没有改变细胞的形态和表面标记物。在缺氧培养时间相同的情况下,bFGF、VEGF基因的表达均随着CoCl2浓度的增加而增加,CoCl2为150μmol/L时达到峰值（P<0.05）。当CoCl2浓度为150μmol/L培养不同时间(24h、48 h及72 h)时,随着缺氧预处理时间的延长,bFGF、VEGF基因的表达随之增加,于48 h时达到峰值（P<0.05）,bFGF、VEGF基因的表达分别为8.15±0.10和16.67±0.17,延长缺氧培养的时间基因的表达减小（P<0.05）;蛋白与基因表达的变化基本一致。在含150 μmol/L CoCl2的培养液培养48 h,bFGF和VEGF的表达达到顶峰（P<0.05）,分别为(69.63±7.90) ng/L和(89.55±5.45) ng/L。结论: 适当浓度的CoCl2(<150 μmol/L)对UC-MSCs的生物学功能影响轻微。CoCl2可用于细胞的模拟缺氧,缺氧对UC-MSCs bFGF、VEGF的分泌具有时间和剂量依赖性,以含150 μmol/L CoCl2的培养液培养48 h,为促进bFGF、VEGF基因和其蛋白表达的最适条件。     

CoCl2缺氧处理对脐带间充质干细胞促血管生长因子表达的影响

目的：探讨氯化钴（CoCl2）模拟缺氧预处理对人脐带间充质干细胞（UC-MSCs）中碱性成纤维生长因子（bFGF）和血管内皮生长因子（VEGF）基因表达及蛋白分泌的影响。方法：分离、培养UC-MSCs。取第3代的UC-MSCs,运用含150μmol/L的CoCl2培养液培养细胞72 h,用流式细胞仪检测缺氧对UC-MSCs表面标志物（CD34、CD45、CD90、CD105、CD29及CD49）的影响。依据CoCl2的浓度（0、50、100μmol/L及150μmol/L）将UC-MSCs分为4个组,即对照组、低、中、高CoCl2组,每个组处理24 h、48 h和72 h。用SYBRGREN荧光定量RT-PCR检测bFGF、VEGF mRNA的表达,用ELISA法检测bFGF和VEGF蛋白的表达。结果：经含150μmol/L CoCl2的培养液缺氧处理,没有改变细胞的形态和表面标记物。在缺氧培养时间相同的情况下,bFGF、VEGF基因的表达均随着CoCl2浓度的增加而增加,CoCl2为150μmol/L时达到峰值（P〈0.05）。当CoCl2浓度为150μmol/L培养不同时间（24 h、48 h及72 h）时,随着缺氧预处理时间的延长,bFGF、VEGF基因的表达随之增加,于48 h时达到峰值（P〈0.05）,bFGF、VEGF基因的表达分别为8.15±0.10和16.67±0.17,延长缺氧培养的时间基因的表达减小（P〈0.05）;蛋白与基因表达的变化基本一致。在含150μmol/L CoCl2的培养液培养48 h,bFGF和VEGF的表达达到顶峰（P〈0.05）,分别为（69.63±7.90）ng/L和（89.55±5.45）ng/L。结论：适当浓度的CoCl2（〈150μmol/L）对UC-MSCs的生物学功能影响轻微。CoCl2可用于细胞的模拟缺氧,缺氧对UC-MSCs bFGF、VEGF的分泌具有时间和剂量依赖性,以含150μmol/L CoCl2的培养液培养48 h,为促进bFGF、VEGF基因和其蛋白表达的最适条件。     

脐带间充质干细胞对脐血CD_(34)~+祖细胞免疫反应的影响

目的 探讨脐带来源的间充质干细胞(UC-MSCs)是否能有效抑制脐血CD_(34)~+祖细胞的免疫反应,影响反应过程中免疫调节细胞因子的分泌.方法 从脐带中分离、培养MSCs,观察其生长形态,流式细胞术检测表面标志;将不同数量的UC-MSCs加入脐血CD_(34)~+祖细胞、外周血单个核细胞(PBMC)共培养体系中作为实验组,不加UC-MSCs的CD_(34)~+祖细胞、PBMC共培养体系为阴性对照;另设用Tramwell将UC-MSCs和脐血CD_(34)~+祖细胞、外周血单个核细胞共培养体系分隔培养,分别收集各组上清液,ELISA检测IFN-γ和IL-10水平.结果 UC-MSCs高表达CD_(105)、CD_(90)、CD_(29)、CD_(49);不表达CD_(40)、CD_(80)、CD_(86)、HLA-DR;加UC-MSCs组与阴性对照组相比,IFN-γ的分泌量减少(19.30±0.78) vs(27.00±1.11),(P＜0.05);IL-10的分泌量增多(50.28±1.29)、vs(31.68±3.08),(P＜0.05).而且具有数量依赖性;Transwell分隔培养组与阴性对照组相比,IFN-γ的分泌量减少(18.33±0.475)vs(27.00±1.11),(P＜0.05);IL-10的分泌量增多(48.47±1.18)vs(31.68±3.085,(P＜0.05);与接触培养组相比,IFN-γ的分泌量增多(18.33±0.47)vs(7.14±0.13),(P＜0.05),IL-10的分泌量减少(85.19±2.36)vs(48.47±1.18),(P＜0.05).结论 UC-MSCs能抑制脐血CD_(34)~+祖细胞的免疫反应中IFN-γ的分泌,同时促进IL-10分泌,并且这种作用部分依赖于细胞间的相互接触.UC-MSCs和CD_(34)~+祖细胞共移植可作为干细胞移植治疗缺血性心肌病的有效方式.