氢醌对K562细胞着色性干皮病基因D甲基化的影响

目的：了解不同剂量苯代谢物氢醌（ HQ）对人白血病细胞株K562细胞着色性干皮病基因D（ XPD）甲基化水平的影响。方法：分别以终浓度为0、15、30和60μmol/L HQ溶液重复处理K562细胞48 h,采用MTT比色法检测K562细胞增殖能力,采用亚硫酸氢盐处理后测序法检测XPD甲基化水平;观察各组细胞存活率及甲基化率。结果：HQ 0、15、30、60μmol/L 处理后,K562细胞存活率分别为（100.00±0.00）％、（85.46±0.60）％、（63.46±7.02）％和（51.20±6.49）％,15μmol/L 组与0μmol/L 组比较,差异无统计学意义（ P ＞0.05）,30μmol/L和60μmol/L组与0μmol/L组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）;XPD基因甲基化水平分别依次为1.03％（3/290）、0.34％（1/290）、0.34％（1/290）和0.70％（2/290）,15、30、60μmol/L组与0μmol/L组比较,差异无统计学意义（χ2=1.531,P＞0.05）。结论：HQ对K562细胞生长有明显的抑制作用,但对细胞中XPD基因甲基化水平无影响。     

去甲斑蝥素对环磷酰胺诱导的白细胞减少症模型大鼠骨髓造血功能的影响

目的:探讨去甲斑蝥素(NCTD)对环磷酰胺(CTX)诱导的白细胞减少症模型大鼠骨髓造血的影响及机制。方法:采用CTX腹腔注射法复制白细胞减少症模型,以NCTD干预模型大鼠,全自动血细胞分析仪检测外周血白细胞(WBC)数量,骨髓组织作切片HE染色观察病理改变,流式细胞术检测骨髓细胞增殖周期、凋亡率,免疫组织化学法检测骨髓组织中凋亡相关蛋白BCL-2、BAX的表达。结果:NCTD干预白细胞减少症模型后,外周血WBC显著升高;模型大鼠骨髓骨髓组织结构破坏,造血细胞明显减少,NCTD干预后促进骨髓组织细胞结构显著恢复;NCTD可促使白细胞减少症模型大鼠骨髓细胞增殖及周期的转化,显著抑制CTX所诱导的骨髓细胞凋亡与坏死,上调抑凋亡蛋白BCL-2表达,下调促凋亡蛋白BAX的表达。结论:NCTD可刺激CTX诱导的白细胞减少症模型大鼠骨髓造血,促进外周血白细胞水平的恢复,其机制可能与NCTD调控骨髓细胞周期、抑制细胞凋亡等有关。     

WRN基因在氢醌致U937细胞DNA损伤中的作用

目的 WRN基因在氢醌(HQ)致U937细胞DNA损伤中的作用.方法 常规培养白血病细胞U937至生长对数期,低剂量HQ组、中剂量HQ组、高剂量HQ组分别以10、20、40μmol/L HQ染毒24 h及48 h,以等体积的完全培养基培养的细胞组为完全空白对照组.采用单细胞凝胶电泳(SCGE)检测细胞DNA损伤;采用免疫印迹法检测WRN蛋白的相对表达量.结果 (1)HQ可导致细胞DNA损伤,且损伤效用随染毒浓度增加而增大,48 h比24 h的DNA损伤程度增加,呈时间—剂量依赖性(P＜0.05);(2)免疫印迹结果显示,HQ染毒24 h,WRN蛋白相对表达量在各组差异无统计学意义(P＞0.05);HQ染毒48 h高剂量组分别与空白组、低剂量、中剂量中比较,WRN蛋白相对表达量呈降低的趋势(P＜0.05).结论 HQ诱导WRN蛋白表达下调影响U937细胞DNA损伤修复.     

DNA损伤修复基因甲基化与肿瘤关系的研究进展

机体细胞内DNA会受到多种因素的影响,导致其化学结构或编码特性的改变,如电离辐射、化学物质、异常代谢产物等都会导致DNA损伤,这种损伤若不能及时得到修复,就会影响机体正常活动,进而诱发一系列遗传疾病的产生。正常机体具有完善的DNA损伤修复机制,修复由各种原因导致的DNA损伤,其主要机制有两种：一种是损伤恢复（ reversal of damage）,即损伤直接被移除,使碱基恢复为原来状态;另一种是切除修复（ excision re-pair）,是指切除损伤 DNA 后,再合成一段新的DNA来替代损伤DNA,切除修复包括核苷酸切除修复（ nucleotide excision repair,NER）、碱基切除修复（ base excision repair,BER）、同源重组修复（ ho-mo logous recombination,HR）和错配修复（ mismatch repair,MMR）等多条途径,它们共同构成维持遗传信息稳定的保护机制,以保证遗传物质的稳定性［1］。     

氢醌对 K562细胞着色性干皮病基因 D转录及表达的影响

目的：探讨苯代谢物氢醌（ HQ）对人白血病细胞株K562细胞中着色性干皮病基因D（ XPD）mRNA转录及蛋白表达的影响。方法：分别用终浓度为0、15、30、60μmol/L HQ溶液处理K562细胞48 h后,单细胞凝胶电泳实验检测细胞DNA损伤效应,Taqman探针实时荧光定量PCR法检测XPD基因mRNA转录水平,蛋白印迹法分析XPD基因蛋白表达水平,观察荧光显微镜下细胞的尾矩,计算mRNA及蛋白的相对表达量。结果：不同浓度HQ处理后,各组细胞尾矩与0μmol/L HQ组比较,差异有统计学意义（ P＜0.05）;不同浓度HQ处理后, K562细胞中XPD基因mRNA和蛋白相对表达量与0μmol/L HQ组比较,差异无统计学意义（ P＞0.05）。结论：HQ处理K562细胞48 h后,细胞中DNA有明显的损伤效应,但XPD基因mRNA及蛋白无变化。     

苯代谢物氢醌对K562细胞WRN基因转录及表达的影响

目的 探讨苯代谢物氢醌(HQ)对人白血病细胞K562中解旋酶WRN基因mRNA转录及蛋白表达的影响.方法 常规培养白血病细胞K562至生长对数期,低剂量HQ组、中剂量HQ组、高剂量HQ组分别以15、30、60μmol/L浓度HQ重复间隔柒毒48及72 h,以等体积的PBS培养的细胞组为空白对照组.采用单细胞凝胶电泳法(SCGE)检测细胞DNA损伤;采用Taqman探针实时荧光定量PCR法检测WRN基因mRNA水平,采用免疫印迹分析WRN基因蛋白表达水平,计算mRNA及蛋白的相对表达量.结果 (1)HQ可导致细胞DNA损伤,且损伤效应随染毒浓度增加而增大,72 h比48 h的DNA损伤程度增加,呈时间-剂量依赖性;(2)HQ染毒48 h,WRN基因mRNA在各组差异均无统计学意义(P＞0.05);HQ染毒72 h,各剂量组与空白对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),低、中剂量组与高剂量组比较,差异有统计学意义(P＜0.05),低剂量组与中剂量组组间差异无统计学意义(P＞0.05);(3)HQ染毒48 h,WRN蛋白相对表达量在各组差异无统计学意义(P＞0.05);HQ染毒72 h,各剂量组与空白对照组比较,蛋白表述随着染毒剂量增大而降低,差异有统计学意义(P＜0.05),HQ各剂量组之间两两比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 HQ可导致K562细胞DNA损伤,且呈时间-剂量依赖性,其机制可能与HQ下调WRN基因mRNA转录及蛋白的表达有关.     

氢醌对人白血病细胞凋亡及相关蛋白Bcl-2、Bax及Caspase-3表达的影响

目的 研究氢醌对白血病细胞株U937细胞凋亡及相关蛋白Bcl-2、Bax及Caspase-3表达的影响。方法 用不同浓度的氢醌处理U937细胞24 h、48 h后,采用MTT法来检测细胞增殖抑制率;经瑞-吉染色后,观察细胞形态变化;采用流式细胞仪检测细胞凋亡;采用免疫印迹法检测Bcl-2、Bax及Caspase-3蛋白表达。结果 (1)U937细胞的增殖抑制率随氢醌作用时间及浓度的增加而增加,呈时间-剂量依赖性(P<0.05);(2)氢醌作用后,部分细胞体积增大,胞浆中有空泡,胞核发生畸形;(3)流式细胞术结果显示,细胞凋亡率随着氢醌作用时间及浓度的增加而增加,呈时间-剂量依赖性(P<0.05);(4)免疫印迹结果显示,与空白组相比较,染毒48h时,细胞Bax蛋白的表达量增加(P<0.05),而Bcl-2蛋白表达量减少(P<0.05),Bcl-2/Bax比值下降(P<0.05),染毒24 h时,细胞Caspase-3蛋白的表达量增加(P<0.05);与染毒24 h各组相比较,染毒48 h时细胞Caspase-3蛋白的表达量随时间延长呈增加趋势(P<0.05)。结论 氢醌可以诱导U937细胞凋亡,其机制可能与调控凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及Caspase-3的表达有关。     

氢醌HQ对K562细胞WRN基因甲基化水平及DNMT1表达的影响

目的：探讨氢醌（hydroquinone,HQ）对K562细胞中WRN基因甲基化水平及DNMT1表达的影响。方法：K562细胞生长至对数期后,设置空白对照组,低（15 μmol/L）、中（30 μmol/L）、高（60 μmol/L）剂量HQ组,重复间隔染毒72 h,空白对照组加入等量的PBS培养。MTT比色法检测细胞存活率;重亚硫酸盐测序法（bisulfite sequencing PCR,BSP）检测细胞WRN基因甲基化水平;FQ-PCR法检测DNMT1基因的mRNA表达情况;免疫印迹法检测DNMT1基因的蛋白表达情况。结果：①MTT结果显示,细胞存活率随着HQ染毒浓度增加而下降（P=0.000）。②BSP检测结果显示,低、中、高剂量HQ组甲基化率与对照组比较,差异有统计学意义（χ2=7.50,P=0.048）。③与对照组比较,低、中、高剂量HQ组DNMT1基因mRNA及蛋白表达量呈下降趋势（P=0.000）。结论：HQ染毒K562细胞可引起WRN基因甲基化水平增高,同时下调DNMT1基因的表达。