5株SARS-CoV部分基因序列比较分析

目的　分析SARS CoV部分结构区的基因序列 ,了解其变异程度。方法　采用套式PCR法扩增各结构区基因 ,对阳性PCR产物进行克隆和测序 ,并对序列进行分析。结果　完成了LC1株病毒的M、N、E和S基因的扩增和克隆 ,对LC2、LC3、LC4和LC5株病毒的M区基因进行了扩增和克隆。序列分析显示各结构基因的核苷酸序列与已报道的 18株序列的同源性在 99%以上。结论SARS CoV的基因序列较保守 ,有利于PCR诊断试剂和预防用疫苗的研制。     

中国HIV-1 CRF01_AE流行株结构基因和调节/辅助基因DNA疫苗的构建和免疫原性研究

目的 构建表达gag-env融合基因和tat-rev-integrase(c-holf)-vif-nef融合基因的DNA疫苗,并评价其免疫原性.方法 按人源密码子使用频率对AE2f株的gag、env、tat、rev、integrase、vif和nef基因序列进行优化,构建真核表达质粒.用Western blot法验证体外表达情况;用ELISPOT法检测小鼠的细胞免疫反应.结果 限制性酶切及DNA测序结果表明两个融合基因质粒构建正确,可以表达相应的融合蛋白.ELISPOT结果显示,Gag-Env特异性的T细胞反应强度为(3010±566)SFC/10~6脾细胞;Tat-Rev-Integrase(C-half)-Vif-Nef融合蛋白特异性的T细胞反应为(948±737)SFC/10~6脾细胞,均显著高于空载体组.结论 构建的表达HIV-1 CRF01_AE流行株gag-env融合基因和tat-rev-integrase(c-half)-vif-nef融合基因的DNA疫苗可以正确表达所编码的融合蛋白并有效地激活机体的T细胞免疫反应.     

HIV-1膜蛋白抗原优化改造研究进展

HIV-1的外膜糖蛋白能与T细胞或单核/巨噬细胞表面的CD4受体分子结合,从而起始HIV感染靶细胞的生物学过程。由于HIV-1膜蛋白是中和抗体的主要作用靶位,因此成为HIV疫苗中不可缺少的组分。越来越多的研究表明天然HIV-1膜蛋白不能激发有效的中和抗体,所以需要对膜蛋白进行优化改造,以提高中和表位的免疫原性。本文就近年来HIV-1膜蛋白抗原优化改造研究做一简要回顾以供参考。     

HIV-1包膜蛋白疫苗免疫原选择及改造策略研究进展

尽管经过全球研究人员20多年的共同努力,目前仍无有效的HIV-1疫苗面世.由于HIV-1病毒可以通过多种方式逃避机体免疫应答,所以截至目前仍未找到可以有效诱导广谱中和抗体的免疫原或免疫策略,但该方面的研究从未止步.     

HIV-1膜蛋白抗原优化改造研究进展

HIV-1的外膜糖蛋白能与T细胞或单核／巨噬细胞表面的CD4受体分子结合，从而起始HIV感染靶细胞的生物学过程。由于HIV-1膜蛋白是中和抗体的主要作用靶位，因此成为HIV疫苗中不可缺少的组分。越来越多的研究表明：天然HIV-1膜蛋白不能激发有效的中和抗体，所以需要对膜蛋白进行优化改造，以提高中和表位的免疫原性。本文就近年来HIV-1膜蛋白抗原优化改造研究做一简要回顾以供参考。     

对定量检测整合HIV-1 DNA的PCR方法的评价

1型人类免疫缺陷病毒 ( HIV- 1 ) DNA的整合对于病毒在病人体内复制和持续存在至关重要。 Alu-聚合酶链反应 ( PCR)的基本原理是利用人类基因组中出现的许多 Alu重复序列 ,用一对能与 Alu序列结合的引物和一对 HIV特异性引物进行套式 PCR扩增 ,从而定量测定整合的 HIV基因。接头引物( LP) - PCR的基本原理是用限制性内切酶对染色体 DNA进行消化 ,粘端补平后连上一段寡核苷酸接头 ,再利用一对针对接头的引物和一对 HIV特异性引物进行 PCR扩增 ,来测定基因组中的整合 HIV基因。　　作者在本文中提出了对 Alu- PCR和L P- PC…     

HIV-1感染者全基因多肽特异性T细胞免疫应答的初步研究

目的 探讨HIV-1感染者人群分泌γ干扰素(IFN-γ)的HIV-1特异性T细胞反应的特征.方法 对HIV-1感染者进行6个月和12个月随访,采用ELISPOT试验检测HIV-1特异性T细胞反应,采用流式细胞术计数CD4+ T细胞.结果 6个月随访,CD4+T细胞计数与病毒载量呈负相关,具有统计学意义;分泌IFN-γ的HIV-1特异性T细胞反应最强的是Nef肽库;高强度特异性T细胞反应频度最高的是Nef(72%)肽库.12个月随访,CD4T细胞计数与病毒载量呈负相关,具有统计学意义;分泌IFN-γ的HIV-1特异性T细胞反应最强的是Nef肽库;高强度特异性T细胞反应频度最高的是Nef(74.1%)肽库.结论 HIV-1 B亚型的所有蛋白均可以诱导产生分泌IFN-γ的HIV-1特异性T细胞反应.6个月和12个月两次随访的研究结果均表明,针对Nef、Gag表位的HIV-1特异性T细胞反应最强、频度最高.     

不同感染时间与感染途径的HIV-1感染者全基因组CTL免疫反应比较研究

目的 分析研究不同感染时间和不同途径感染HIV/AIDS感染者覆盖全基因组的CTL应答特征.方法 将75例HIV/AIDS感染者分为3组,血液感染1～2年组(10例)、血液感染＞10年组(43例)和性接触感染1～2年组(22例);以HIV-1 B亚型构建全基因组17个肽库作为抗原,采用ELISpot检测各组HIV特异性CTL应答;采用流式细胞术检测各组CD4计数;采用实时定量RT-PCR检测各组HIV病毒载量.结果 血液感染1～2年组、血液感染＞10年组和性接触感染1～2年组感染者对HIV-B亚型17个肽库的平均应答频率分别为40%、65%、23%,经单向方差分析,3组感染者对HIV-1 B亚型17个肽库的应答频率差异有统计学意义(F=19.96,P＜0.01);3组感染者对HIV-B亚型17个肽库总应答强度范围分别为0～5 835 SFCs/106 PBMC、0～7 225 SFCs/106PBMC、0～9 740 SFCs/106PBMC,且3组感染者对HIV-B亚型17个肽库的应答强度差异亦有统计学意义(H=101.90,P＜0.01);此外,3组感染者对HIV-1 B亚型17个肽库的应答广度分别为7(2～11)个、11(9～14)个、4(2～6)个,3组感染者应答广度的差异也有统计学意义(H=34.75,P＜0.01).3组感染者应答频率、应答强度和应答广度从高到低依次为血液感染＞10年组、血液感染1～2年组、性接触感染1～2年组.不同感染时间和不同感染途径的感染者对Nef肽库和Gag肽库的应答百分比和应答强度均高于其他肽库.CD4计数＜200/μl、CD4计数为200～500/μl和≥500/μl3组感染者对17个肽库的总应答强度范围分别为0～18 475 SFCs/106 PBMC、350～34 095 SFCs/106PBMC、490～21 550 SFCs/106 PBMC,但差异无统计学意义(H=2.93,P=0.23);3组感染者CTL应答广度分别为3(0～8)个、10(2～17)个、10(1～17)个,3组间差异有统计学意义(H=14.72,P＜0.01),CD4计数＜200/μl的感染者CTL应答广度低于CD4计数为200～500/μl和≥500/μl组.不同病毒载量3组(＜LDL、LDL-1×104拷贝/ml和≥1×104拷贝/ml)标本对17个肽库的总应答强度范围分别为490～18 475 SFCs/106PBMC、0～24 115 SFCs/106PBMC、770～34 095 SFCs/106 PBMC,但3组间差异无统计学意义(H=0.79,P=0.67);应答广度分别为8(1～17)个、11(0～17)个、8(1～16)个,3组间差异也无统计学意义(H=5.27,P=0.07).结论 中国HIV/AIDS感染者中CTL应答多集中在Nef和Gag,这两个抗原为HIV/AIDS感染的优势抗原;感染时间和感染途径对CTL应答可产生显著影响;随感染时间的延长,免疫反应的强度与应答比例均增加.这些信息对设计针对中国人群的AIDS疫苗有较重要意义.

Abstract：

Objective To investigate and compare the features of the HIV-1-specific CTL responses among three HIV-infected groups with varied infection history. Methods Three HIV-infeeted groups were enrolled in this study, including two groups infected by blood transmission (one group has been infected for more than 10 years and the other for 1-2 years) and one group of the man who have sex with man. The HIV-1-specific CTL responses were quantified by an IFN-γ based ELISPot assay with a peptide matrix system containing overlapping peptides spanning the entire HIV-1 Clade B genomic consensus sequences. Results The responding rate of CTL responses against all 17 peptide pools among the group that infected 1-2 years,the group infected more than 10 years and the group of MSM were 40% ,65% ,23%. One way ANOVO analysis showed that the responding rate of CTL responses against all 17 peptide pools were statistical significant among the three groups (F=19.96, P＜0.01);the magnitude of CTL responses of the three groups were 0-5 835 SFCs/106 PBMC, 0-7 225 SFCs/106PBMC, 0-9 740SFCs/106pBMC, Kruskal-Wallis test showed that the magnitude of CTL responses were statistical significant among the three groups( H = 101.90 , P ＜0.01);the breadth of CTL were 7 ( 2-11 ), 11(9-14) and 4 (2-6) respectively and Kruskal- Wallis test showed that the breadth of CTL had no statistical significant among the three groups( H = 34. 75 ,P ＜0. 01 ). The sequence of responding rate, magnitude and breadth of CTL from high to low was the group that had been infected for more than 10 years, the group infected 1-2 years and the sex transmission group. The common characteristics of the CTL response among the three groups were that the responding rate and the magnitude of the peptide Nef and Gag was higher than other peptide's. The magnitude of CTL responses among three different CD4count groups (CD4 ＜ 200/μl, CD4 200-500/μl, CD4 ≥500/μl,) was 0-18 475 SFCs/106pBMC, 350-34 095 SFCs/106pBMC, 490-21 550 SFCs/106 PBMC and had no statistic difference among the three different CD4 groups(H=2.93, P=0.23) while the breadth of CTL was 3(0-8), 10(2-17), 10 (1-17)respoctively and the breadth of CTL was lower in the group of CD4 count less than 200/μl than the other two groups( H = 14. 72, P ＜ 0. 01 ). The magnitude of CTL responses among three different viral load (VL)groups (VL＜ LDL, LDL ＜ VL ＜ 1 × 104 copys/ml, VL≥1 ×104 copys/ml) was 490-18 475 SFCs/106pBMC, 0-24 115 SFCs/106pBMC, 770-34 095 SFCs/106 pBMC and had no statistic difference among the three different viral load groups ( H = 0.79, P=0.67) and the breadth of the three different viral load groups CTL was 8( 1-17), 11 (0-17), 8 (1-16) and Kruskal-Wallis test showed that there was no statistic difference among the three different viral load groups (H =5.27, P =0. 07). Conclusions All groups predominantly develope T cell immune responses against Nef and Gag proteins. With the elapse of HIV infection, the CTL responses are increased in both magnitude and responding rate. This information is important for vaccine development.