雌激素在煤焦沥青烟致小鼠肺癌模型建立 过程中的作用研究

目的 建立以煤焦沥青（CTP）烟提取物灌胃诱发雌性KM小鼠肺癌的动物模型,并以雌二醇（E2）为代表,研究雌激素在该CTP致小鼠肺癌模型过程中的作用。方法 将260只5周龄清洁级雌性KM小鼠按随机原则分为9组,分别为CTP组（27只）、CTP+E2组（28只）、CTP+TAM组（29只）、CTP+E2+TAM组（28只）、E2组（34只）、TAM组（30只）、E2+TAM组（29只）、溶剂对照组（27只）、空白对照组（28只）,每组分别给予不同的染毒处理,观察并记录小鼠的生长、活动、饮食和健康状况,并称量体重。染毒后10周处死,收集各组肺组织,HE染色后,显微镜观察组织病理变化情况;观察肿瘤发生数,计算肺癌发生率。结果 CTP+E2+TAM组小鼠肺癌发病率为32.14%,其肺癌发病率和肿瘤数均低于CTP+E2组,差异无统计学意义（P＞0.05）;CTP组小鼠肺癌发病率为26.92%,其肺癌发病率和肿瘤数均高于溶剂对照组和空白对照组（P＜0.05）;CTP+E2组的肺癌发病率最高,为57.14%,其肺癌发病率和肿瘤数均高于对照组和单纯E2组（P＜0.05）;肿瘤结节HE染色确诊的肿瘤均为腺瘤,与正常肺组织分界清楚。肿瘤组织呈腺样排列,主要位于核膜下。结论 建立了CTP烟提取物诱发雌性KM小鼠肺癌的动物模型,E2能够促进CTP烟提取物诱发的小鼠肺癌。     

表达Panton-Valentine杀白细胞素(PVL)的金黄色葡萄球菌诱导人THP-1单核细胞自噬和凋亡

目的 研究表达Panton-Valentine杀白细胞素(PVL)的金黄色葡萄球菌诱导人THP-1细胞自噬和凋亡机制.方法 在大肠杆菌中表达重组杀白细胞素(rPVL),并免疫家兔制备多克隆抗血清.采用反转录PCR和Western blot法鉴定表达PVL的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA).分别使用表达PVL的MRS...     

鲍曼不动杆菌外膜囊泡诱发人单-核巨噬细胞THP-1的炎性反应

目的 建立超速离心法纯化鲍曼不动杆菌外膜囊泡(OMVs),并探讨OMVs诱发人单核-巨噬细胞THP-1炎性反应能力。方法 大量培养鲍曼不动杆菌标准菌株,从培养液上清中以超速离心法提纯OMVs并以透射电镜观察形态。分别以5和50μg/mL的OMVs与THP-1细胞共培养,RT-qPCR检测NOD样受体家族蛋白(NLRP3)和caspase-1表达量;ELISA检测培养液上清中IL-1β含量;蛋白质印迹法检测细胞自噬相关蛋白LC-3Ⅱ和Beclin-1表达量;酶促动力学法检测细胞caspase-3酶活性;流式细胞测量术检测细胞活性氧表达量。结果 成功提纯鲍曼不动杆菌OMVs。OMVs可以诱导THP-1细胞NLRP3炎性复合体活化,并增加自噬相关蛋白LC-3Ⅱ和Beclin-1表达量(P<0.05),以及上调凋亡关键因子caspase-3酶活性(P<0.05)。共培养1 h时,OMVs可以显著上调THP-1细胞活性氧表达(P<0.05)。结论 鲍曼不动杆菌OMVs可以显著活化巨噬细胞NLRP3炎性复合体。     

我院鲍曼不动杆菌携带blaOXA-23基因及其耐药机制研究

目的研究我院分离鲍曼不动杆菌携带bla_OXA-23基因的携带情况及其诱导细菌耐药机制。方法收集江阴市青阳医院2019年1月至2019年12月间临床分离鲍曼不动杆菌,经VITEK-2全自动微生物鉴定及药敏分析系统鉴定耐亚胺培南菌株100株,敏感菌株100株。通过多重PCR法检测上述菌株中bla_OXA-23、bla_OXA-24、blaOXA-51和bla_OXA-58基因携带情况。通过PCR法扩增亚胺培南耐药的鲍曼不动杆菌bla_OXA-23的ORF序列,构建过表达载体bla_OXA-23/pYMAb3并电转化鲍曼不动杆菌(ATCC 17978),以硫酸卡那霉素和美罗培南共同筛选过表达bla_OXA-23基因的菌株。采用稀释法检测转化bla_OXA-23/pYMAb3载体和pYMAb3空载体的菌株对亚胺培南的MIC。结果我院耐亚胺培南的鲍曼不动杆菌均携带bla_OXA-23,敏感株未检出携带该基因。RT-PCR法可检出转化bla_OXA-23/pYMAb3载体菌株表达bla_OXA-23基因,而转化pYMAb3空载体菌株未检出bla_OXA-23基因表达。转化bla_OXA-23/pYMAb3载体菌株对亚胺培南MIC为32μg/mL,转化空载体菌株MIC仅为0.5μg/mL。结论我院耐亚胺培南的鲍曼不动杆菌均携带bla_OXA-23基因,可以作为耐药菌株筛选的分子标记。由质粒携带的bla_OXA-23基因是诱发我院鲍曼不动杆菌耐药的重要原因,在院感工作中需高度重视。     

3种主要短链脂肪酸减轻5-氟尿嘧啶诱发的THP-1细胞炎症反应

目的:研究3种主要短链脂肪酸(short-chain fatty acids,SCFAs)即乙酸钠、丙酸钠和丁酸钠,对5-氟尿嘧啶(5-Fluorouracil,5-FU)诱发人单核巨噬THP-1细胞炎症反应的影响及其可能机制.方法:将THP-1细胞分为5组:对照组,细胞未经任何处理;5-FU组,2.5 mmol/L ...     

不同浓度丁酸钠抑制氧化型低密度脂蛋白诱导THP-1细胞炎症反应的研究

目的 探讨不同浓度的丁酸钠抑制氧化型低密度脂蛋白(Ox-LDL)诱发人单核巨噬THP-1细胞炎症反应能力及其机制.方法 分别使用终浓度为50、100、200、400、800μmol/L的丁酸钠预处理THP-1细胞24 h,再以终浓度为50 mg/L的Ox-LDL刺激THP-1细胞24 h,采用实时荧光定量PCR法和EL...     

鲍曼不动杆菌OmpA经ROS/NLRP3信号通路调控THP 1细胞自噬和凋亡

目的: 探讨鲍曼不动杆菌外膜蛋白A(outer membrance protein A, OmpA)对人单核巨噬THP-1细胞自噬和凋亡的影响及其可能机制。方法: 构建OmpA/pET-28a载体,转化大肠埃希菌BL21(DE3)表达纯化重组OmpA蛋白,并免疫家兔制备多克隆抗体;采用蛋白质印迹法检测呼吸机相关性肺炎患者发病前后血清中OmpA抗体水平变化。以不同浓度(1、10 μg/mL)重组OmpA蛋白分别刺激THP-1细胞1、3、6 h,采用蛋白质印迹法检测自噬相关蛋白LC-3和Beclin-1表达,流式细胞术检测细胞凋亡率及活性氧产生,荧光实时定量PCR检测细胞含NLR家族Pyrin域NOD样受体家族3(NLRP3)、Caspase-1和IL-1β等mRNA表达。结果： 自制多抗可以识别临床菌株OmpA蛋白。呼吸机相关性肺炎患者发病前后,血清中均可检出OmpA抗体(IgG型),且发病后OmpA抗体水平显著高于气管插管前(P<0.05)。重组OmpA蛋白刺激THP-1细胞后,细胞自噬相关蛋白LC3-Ⅱ和Beclin-1表达显著上升,细胞凋亡率显著升高,呈一定的时间和浓度依赖性(P<0.05)。与对照组比,在重组OmpA蛋白作用1 h时,细胞IL-1β mRNA表达和活性氧含量显著增加(P<0.05);3 h和6 h时,3种mRNA表达量和活性氧含量显著降低(P<0.05)。结论： OmpA通过激活THP-1细胞NLRP3炎症小体,释放活性氧和IL-1β等炎症介质,诱导THP-1细胞自噬和凋亡发生。     

整肠生对新型冠状病毒肺炎患者细胞因子水平和临床预后的影响

目的: 探讨整肠生（地衣芽孢杆菌活菌胶囊）改善新型冠状病毒肺炎（coronavirus disease-19, COVID-19）患者高细胞因子水平和临床预后的效果,为临床开展肠道微生态疗法提供实验依据。方法: 回顾性分析2020年2月至3月武汉市同济医院中法新城院区收治的38例成年重症/危重症COVID 19患者,其中,18例患者接受了整肠生治疗（治疗组）,20例患者未接受整肠生治疗（对照组）。两组患者除接受常规治疗外,治疗组患者每天还服用整肠生以调节肠道微生态。记录两组患者临床基本特征,治疗前后白细胞、淋巴细胞及血小板计数,TNF-α、IL-1β、IL-6、PCT、CRP、ALT、白蛋白和肌酐水平,以及临床预后指标。结果： 治疗2周后,治疗组和对照组患者外周血中淋巴细胞计数明显高于治疗前（P<0.01）,血清C反应蛋白水平显著低于治疗前（P均<0.01）,但两组患者间淋巴细胞计数和C反应蛋白差异无统计学意义（P>0.05）。经整肠生治疗2周后,治疗组患者血清中TNF α和IL-1β水平显著低于治疗前,并低于对照组（P<0.05）,但是两组患者的临床结局尚无显著差异（P>0.05）。结论： 整肠生可以降低COVID 19患者血清中TNF-α和IL-1β水平,但尚未观察到患者临床结局的显著改善。