大鼠内关注射去甲肾上腺素升压作用机理初探

去甲肾上腺素（ＮＡ）注射于大鼠内关穴，各种剂量下均可产生与静脉注射相似的升压效应，且呈剂理依赖关系。预先给于酚妥拉明后，可使内关注射ＮＡ的剂量反应曲线右移，说明内关注射ＮＡ的升压作用仍然有α受体的参予。捣毁大鼠脊髓后，内关注射ＮＡ仍可产生与静脉注射相当的升压效应，提示穴位注射所产生的强大作用，与神经系统无关。     

β-1,4-半乳糖基转移酶Ⅱ、Ⅴ表达的亚细胞结构定位研究

为了研究β-1,4-半乳糖基转移酶 和 (β-1,4-Gal T- and )蛋白表达的亚细胞结构定位 ,本实验构建了β-1,4-Gal T- 和 融合绿色荧光蛋白 (GFP)表达质粒 ,分别将构建的质粒转染到 PC12细胞和肝癌 772 1细胞中 ,在荧光显微镜下观察β-1,4-Gal T- 和 在其中表达的亚细胞结构定位。发现 ,β-1,4-Gal T- 和 主要表达在这两种细胞的细胞核旁的 Golgi复合体 ,说明它们主要分布在 Golgi复合体上。提示它们可能是在 Golgi复合体参与蛋白质的糖链修饰     

铅中毒对小鼠颌下腺神经生长因子基因表达的影响

目的 :探讨铅中毒对小鼠颌下腺的毒性作用及对神经生长因子基因 (NGF m RNA)表达的影响。方法 :采用小鼠实验性铅中毒模型 ,通过光镜与电镜观察颌下腺的病理组织学变化。应用地高辛标记的人 NGF DNA探针 ,采用原位杂交的方法 ,定量分析铅对小鼠颌下腺 NGF m RNA表达的影响。结果 :实验性铅中毒小鼠体重下降 ,血铅浓度升高 ,颌下腺铅含量增加。光镜和电镜结果呈现铅中毒小鼠颌下腺腺叶萎缩 ,纤维增生 ,腺间质血管扩张 ,腺间隙增加。粗面内质网扩张 ,线粒体肿胀。图像分析结果表明 ,铅中毒小鼠颌下腺纹状管和颗粒曲管直径减少。原位杂交的结果显示 ,铅中毒小鼠颌下腺颗粒曲管和纹状管的杂交信号显著减弱 ,颌下腺组织中 NGF m RNA表达减少。结论 :铅对小鼠颌下腺具有毒性作用 ,影响颌下腺 NGF的基因表达     

铅中毒对小鼠颌小腺神经生长因子mRNA的影响

为观察铅对小鼠颌小腺NGF基因表达的影响,以地高辛素标记人β-NGFcDNA为探针,采用原位杂交的方法,定量分析铅中毒小鼠颌下腺NGFmRNA的变化。给小鼠以0．5％醋酸铅经口染毒,造成小鼠实验性铅中毒模型。铅中毒后小鼠发育迟缓,体重下降。病理切片的结果表明,铅中毒后颌下腺腺导管上皮变薄,腺体萎缩,原位杂交的结果显示：铅中毒后颌下腺颗粒曲管和纹状管的杂交信号减弱,即颌下腺中NGFmRNA减少。     

实时定量PCR检测体外诱导条件下小鼠骨髓基质细胞S100mRNA表达水平变化

目的:检测S100 mRNA含量,初步探讨骨髓基质细胞体外诱导条件下向雪旺细胞样细胞分化的可能性。方法:采用差速贴壁的方法分离、培养小鼠骨髓基质细胞。经β-ME,ATRA,Forskolin,bFGF,PDGF,HRG体外诱导后,利用实时定量PCR检测S100 mRNA水平的变化。结果:诱导后,骨髓基质细胞S100 mRNA水平上升,诱导前后水平变化有统计学意义(P<0.05)。结论:实时定量PCR检测S100 mRNA含量具有较高的灵敏度和特异性。体外诱导后骨髓基质细胞S100 mRNA表达量增多。     

内毒素肝损伤中FADD mRNA表达及凉血化瘀方的影响

目的研究凋亡调节基因相关死亡区蛋白(FADD)mRNA在内毒素肝损伤中的表达与肝细胞凋亡的关系,以及凉血化瘀方对其的影响.方法腹腔注射内毒素脂多糖于D-氨基半乳糖致敏小鼠造成暴发性肝衰竭模型,用逆转录-聚合酶链反应半定量分析FADD mRNA表达情况,同时观察药物的影响作用.结果造模3h模型组和治疗组肝组织中FADD mRNA表达分别为110%、100%,至6h模型组的表达增加(124%),治疗组表达下调(81%).结论凉血化瘀方抑制肝细胞凋亡的作用,可能与其下调FADD mRNA表达有关.     

大鼠体内红景天苷浓度的测定及药代动力学研究

目的 建立一种HPLC方法测定大鼠血浆和器官中红景天苷浓度,研究大鼠单剂量静脉注射红景天苷后器官分布情况及药代动力学模式.方法 HPLC色谱柱为Phenomenex C18(250 mm×4.6 mm id,5.0μm),流动相为甲醇-水(20∶80,V/V),流速为1.0ml/min,柱温为25℃,检测波长为278 nm.大鼠经股静脉注射单剂量红景天苷,于不同时间点采集血浆和器官样品,检测其中红景天苷的浓度.采用DAS软件对血药浓度-时间曲线选行统计矩拟合,得出系列药代动力学参数.结果 HPLC方法检测红景天苷的检测限为1.2 ng/ml,日内和日间精密度均小于8.2％,提取回收率大于76.4％.大鼠单剂量静脉注射红景天苷后,其药代动力学呈一房室模型特征.结论 采用HPLC方法可精密快速检测出血浆及器官匀浆中红景天苷的浓度,大鼠单剂量静脉注射红景天苷的半衰期(t1/2)约为4h,表现分布容积(Vd)为1.46 L/kg.     

神经生长因子高亲和力受体互补核糖核酸探针的研究

目的 制备用地高辛标记的神经生长因子高亲和力受体(Trk A)正、反义互补核糖核酸(cRNA)探针的研究。方法 设计Trk A引物，构建pGEM-T Easy-Trk A重组质粒，分别用ApaI和SacI进行酶切得到线性DNA片段，以SP6和T7RNA聚合酶转录合成带有地高辛标记的高比活度的正、反义单链cRNA探针。结果 经斑点杂交证实，该探针敏感性高、特异性强。Trk A-ApaⅠ探针稀释12500倍后的浓度为40ng／μl；Trk A-SacⅠ稀释1：2500倍后的浓度为8ng/μl。结论 成功制备了地高辛标记的Trk A cRNA探针，为毒理学中有关Trk A mRNA在组织、细胞的表达和分布的研究提供了有效工具。     

犬S100β蛋白的体外克隆表达及抗体制备

目的:制备犬S100β蛋白抗血清,为组织工程和神经损伤及修复研究提供实验基础。方法:提取犬坐骨神经总RNA,采用RT-PCR方法扩增S100β基因,并克隆入pGEM-T载体。经测序验证后,将S100β基因亚克隆入原核表达载体pGEX-4T-1中,IPTG诱导GST-S100β融合蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中表达。GST-S100β融合蛋白经Glutathione Sepharose亲和层析纯化后免疫新西兰大白兔,获得抗血清,经酶联免疫吸附试验(ELISA)法、Western Blot和免疫组化法检测抗体的效价和特异性。结果:测序结果表明,扩增的犬S100β基因序列与GenBank中的序列一致;并得到了较高纯度的GST-S100β融合蛋白和兔源性抗S100β血清,经Western Blot、免疫组织化学及ELISA实验证实所得抗体具有较高的特异性及效价。结论:构建了犬S100β基因的重组原核表达质粒,并获得了高效表达。成功制备了兔抗犬S100β抗血清,并具有较高的效价和特异性,为进一步研究神经损伤与修复机制提供实验基础。     

神经生长液对D-半乳糖衰老模型小鼠的影响

目的　观察中药合剂神经生长液对 D-半乳糖衰老模型小鼠的影响。方法　建立 D-半乳糖致小鼠衰老模型 ,以 Y型电迷宫检测其学习记忆能力 ,分别采用黄嘌呤氧化酶法、TBA比色法测定大脑 SOD活性和 MDA含量 ,观察小鼠服用神经生长液后上述指标的变化。结果　与 D-半乳糖模型组相比 ,神经生长液低、中、高剂量均可显著提高衰老模型小鼠的学习记忆能力 (P<0 .0 5或 P<0 .0 1 ) ,显著增加 D-半乳糖所致衰老模型小鼠大脑 SOD活性、降低 MDA含量 (P<0 .0 5或 P<0 .0 1 )。结论　神经生长液能改善 D-半乳糖所致衰老小鼠的多项体征。