胞内钙离子浓度与咖啡因保护小脑颗粒神经元作用的关系

用凝胶电泳和fura-2荧光技术测定［Ca²⁺］_i方法研究咖啡因对低钾诱导的大鼠小脑颗粒神经元凋亡的保护作用与［Ca²⁺］_i升高之间的关系. 将体外培养的小脑颗粒神经元从高钾（25 mmol·L^-1 KCl）培养基中转移到低钾（5 mmol·L^-1 KCl）培养基中,神经元发生凋亡. 但低钾引起的神经元死亡可被咖啡因（5-20 mmol·L^-1）浓度依赖性地保护,且咖啡因的这种作用不受蓝尼定(ryanodine) 敏感钙释放阻断剂蓝尼定和丹曲林(dantrolene)的影响;也不被Ｌ-型钙通道阻断剂硝苯地平, 尼莫地平, 维拉帕米和NMDA受体阻断剂地佐环平抑制. 结果说明［Ca²⁺］_i的升高并不是咖啡因对小脑颗粒神经元的保护作用所必需的.     

反复种植失败妇女“种植窗”时期子宫内膜组织的细胞骨架蛋白质的差异表达

目的探讨体外受精-胚胎移植治疗周期中反复种植失败(RIF)和已生育正常妇女"种植窗"时期(LH+6~LH+9d)子宫内膜组织蛋白质表达的差异。方法选择RIF妇女和正常对照妇女各4名分为实验组和对照组。采用胶内差异双向电泳、(2D-DIGE)和基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术鉴定子宫内膜组织的差异表达蛋白质。结果两组之间获得16个差异表达蛋白质(其中6个下调表达,10个上调表达),其中10个参与细胞骨架构成,分别是:波形蛋白、埃兹蛋白、Septin 2蛋白、radixin蛋白、纽蛋白、角蛋白8、角蛋白10、角蛋白18、角蛋白19及肌动蛋白。结论本研究结果证实"种植窗"时期RIF妇女子宫内膜组织存在多个细胞骨架蛋白质表达的异常,可能是子宫内膜细胞"质膜转换"缺陷和胚胎种植失败的重要原因。     

SB203580对小脑颗粒神经元的保护作用

目的 :研究特异性p3 8分裂原激活的蛋白激酶 (MAPK)抑制剂SB2 0 3 580对低钾诱导的小脑颗粒神经元凋亡的作用及机制。方法 :体外神经元培养、凝胶电泳和SAPK/JNK分析盒测定JNK(c Jun氨基末端激酶 )活性。结果 :低钾 (KCl 5mmol/L)培养基诱导小脑颗粒神经元的具有典型形态学和生化特征的凋亡。但是 ,特异性的p3 8MAPK抑制剂SB2 0 3 580通过抑制凋亡 ,而促进低钾环境中培养的小脑颗粒神经元的存活。此保护作用具有浓度依赖性。培养于低钾环境中的神经元 ,其c Jun的表达和磷酸化水平升高 ,且激活了JNK的活性。当小脑颗粒神经元生长在含SB2 0 3 580 2 5μmol/L的低钾培养基中 ,c Jun的表达、磷酸化水平和JNK的活性都明显的降低。结论 :SB2 0 3 580可能通过抑制JNK的活性 ,降低c Jun的磷酸化水平而对低钾培养的小脑颗粒神经元具有保护作用。     

炎症性肠病患者混合样本策略的蛋白质组学研究

目的 应用混合样本策略的蛋白质组学方法在炎症性肠病患者血清中寻找与疾病相关的蛋白质.方法 选取2007年3月至2008年6月中山大学附属第六医院收治的炎症性肠病患者以及健康受试者血清蛋白样本各8例,混合样本后用不同的CyDye荧光染料标记后进行胶内双向差异凝胶电泳,并对获得的图谱进行分析及对差异蛋白质进行基质辅助激光解吸离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定和生物学信息分析.应用DeCyder V6.0软件中的胶内差异分析及生物学差异分析软件进行统计分析.组间比较采用t检验.结果 成功建立炎症性肠病和健康受试者的胶内荧光差异染色双向凝胶图谱,发现了炎症性肠病患者中存在56个表达异常蛋白质点,质谱分析和数据库检索筛选后共鉴定出30个点有意义,包括结合珠蛋白、补体B因子、载脂蛋白A-Ⅱ、K-ras基因等.结论 采取混合样本策略、双向差异凝胶电泳、MALDI-TOF-MS技术路线的蛋白质组学方法能很好显示炎症性肠病患者与健康受试者血清蛋白质表达差异,所鉴定的蛋白质可为研究炎症性肠病的生物学行为提供新的分子标志物.     

转化生长因子β1诱导肾小管上皮细胞转分化的蛋白质组学研究

目的 研究转化生长因子（TGF）β1诱导肾小管上皮细胞（NRK52E）转分化（EMT）过程中相关靶蛋白的表达变化。 方法 应用比较蛋白质组学方法。用双向凝胶电泳（2-DE）对TGF-β1刺激组和对照组 NRK52E细胞总蛋白进行分离。两组间差异蛋白点用质谱和数据库搜索鉴定，并用RT-PCR和Western 印迹在蛋白质和mRNA水平上进一步检测验证。 结果 鉴定出22个差异蛋白，包括与细胞骨架相关蛋白、参与物质转化和能量代谢的酶类、与蛋白翻译后修饰相关蛋白、细胞因子及其他蛋白等。应用RT-PCR验证了转胶蛋白（transgelin）、ATP合成酶α亚型、苹果酸脱氢酶、丝氨酸（半胱氨酸）蛋白酶抑制因子、泛素结合酶9（Ubc9）和表皮生长因子8在mRNA水平的表达差异，与2-DE结果一致。用Western 印迹验证了transgelin、ATP 合成酶α亚型两种蛋白的表达差异，亦与2-DE结果一致。 结论 TGF-β1刺激NRK52E细胞EMT发生过程中可诱导包括与细胞骨架相关蛋白、与翻译后修饰相关蛋白、代谢酶类及细胞因子等多种蛋白表达变化。本研究结果有助于深入理解EMT的具体分子机制及阐明肾脏疾病慢性进展的机制。     

SM22蛋白在结肠癌组织中的表达

目的 通过比较结肠腺癌与正常结肠黏膜的蛋白质组表达差异,寻找结肠腺痛相关的蛋白质.方法 运用蛋白质组学技术,对8例结肠腺癌组织和8例正常结肠黏膜组织进行胶内差异双向电泳(2-D),选择差异表达超过2倍的蛋白质进行MALDI-TOF/TOF质谱分析和生物学信息分析,并对结肠癌组织中表达下调的蛋白SM22进行Western blot验证.结果 成功建立结肠腺癌和正常结肠黏膜的双向凝胶电泳图谱,结肠腺癌和正常黏膜组织凝胶电泳图谱中平均蛋白质斑点数分别为3289和3122,其中表达差异超过2倍的斑点共有22个,质谱分析和数据库检索共鉴定出14种蛋白质,包括keratin 8、S100A6、protein disulfide isomerase、SM22等.从功能分析,这些差异蛋白与癌细胞的发生、增殖、分化、转移等相关;SM22在结肠癌组织中的表达水平Western blot结果与电泳结果一致.结论 蛋白质组学能提示结肠腺癌与正常组织间的蛋白质表达差异,SM22在结肠癌组织中表达下降,可作为结肠癌组织的分子标记物.     

磷酸化C—JUN不参与谷氨酸诱导的小脑颗粒神经元凋亡

观察磷酸化 C- JUN与谷氨酸诱导的小脑颗粒神经元凋亡的关系。在培养的小脑颗粒神经元建立谷氨酸凋亡模型 ;采用 MTT法分析细胞存活率 ,相差显微镜观察形态学 ,DNA凝胶电泳法分析细胞凋亡和原位细胞荧光免疫组织化学法检测磷酸化 C- JUN。结果显示 ,谷氨酸诱导大鼠小脑颗粒神经元细胞体积缩小 ,突触断裂、消失 ,DNA电泳呈典型的“梯状”条带 ;谷氨酸处理 2 4 h后细胞存活率为 2 8.6%± 5.2 %。神经元在谷氨酸处理 5,30 min及 1 ,2 ,4,8,1 6和 2 4 h后均未检测到有磷酸化 C- JUN阳性细胞 ,与去极化组 ( 2 5mmol/L KCl)相同。而复极化组 ( 5mmol/L KCl)则在 30 min检测到大量的磷酸化 C- JUN阳性细胞 ,4h荧光最强并持续。处理 4h后 ,40 0倍荧光显微镜下 ,复极化组、去极化组和谷氨酸组的磷酸化 C- JUN阳性细胞数分别为 1 2 4± 1 7,8± 3,5± 3。上述结果提示 ,谷氨酸诱导小脑颗粒神经元凋亡 ,磷酸化 C- JUN不参与谷氨酸诱导的大鼠小脑颗粒神经元凋亡。     

磷酸化C-JUN不参与谷氨酸诱导的小脑颗粒神经元凋亡

观察磷酸化C-JUN与谷氨酸诱导的小脑颗粒神经元凋亡的关系.在培养的小脑颗粒神经元建立谷氨酸凋亡模型;采用MTT法分析细胞存活率,相差显微镜观察形态学,DNA凝胶电泳法分析细胞凋亡和原位细胞荧光免疫组织化学法检测磷酸化C-JUN.结果显示,谷氨酸诱导大鼠小脑颗粒神经元细胞体积缩小,突触断裂、消失,DNA电泳呈典型的"梯状"条带;谷氨酸处理24 h后细胞存活率为28.6 %±5.2 %.神经元在谷氨酸处理5,30 min及1,2,4,8,16和24 h后均未检测到有磷酸化C-JUN阳性细胞,与去极化组(25 mmol/L KCl)相同.而复极化组(5 mmol/L KCl)则在30 min检测到大量的磷酸化C-JUN阳性细胞,4 h荧光最强并持续.处理4 h后,400 倍荧光显微镜下,复极化组、去极化组和谷氨酸组的磷酸化C-JUN阳性细胞数分别为124 ±17,8±3,5±3.上述结果提示,谷氨酸诱导小脑颗粒神经元凋亡,磷酸化C-JUN不参与谷氨酸诱导的大鼠小脑颗粒神经元凋亡.     

利多卡因在抗心律失常时的个体化给药

利多卡因(1idocaine)是局部麻醉药，也有抗心律失常的活性，在抗心律失常药分类中属ⅠB类抗心律失常药，临床用于需要迅速控制的严重室性心律失常。利多卡因口服生物利用度低，在肝脏迅速被酰胺酶代谢，有明显的首关效应，作用时程短。因此须迅速静脉注射1～2mg／kg以求尽快起效，然后以1～4mg／min维持抗心律失常疗效。