乌司他丁对炎症状态下血管内皮屏障功能的影响及机制

目的阐明乌司他丁（UTI）对炎症状态下血管内皮屏障功能的影响及具体分子机制。 方法以人脐静脉内皮细胞系EA.hy926为研究对象,建立炎症细胞模型及RhoA过表达细胞模型,分别用UTI和TNF-α处理细胞,采用Transwell法、TEER法检测细胞通透性;Western Blot法及RT-PCR法检测Rho/ROCK信号通路相关关键分子（RhoA、ROCK2、MYPT1、p-MYPT1及VE-cadherin）的表达变化情况。 结果与正常对照组相比,TNF-α作用后EA.hy926细胞电阻值明显降低,细胞通透性显著升高,差异具有统计学意义[（33.67±4.04）Ω/cm² vs（67.17±3.81）Ω/cm²,t=10.435,P<0.01],细胞内RhoA、ROCK2、p-MYPT1的表达量明显增加,差异具有统计学意义（均P<0.05）,VE-cadherin的表达量明显降低,差异具有统计学意义（P<0.05）,而UTI可逆转上述变化情况;与UTI处理组相比,RhoA过表达细胞模型中RhoA、ROCK2及p-MYPT1的表达显著增高,VE-cadherin表达降低,细胞通透性增加,差异具有统计学意义（均P<0.05）,而空载病毒组中上述分子的表达水平以及细胞通透性无明显变化,差异无统计学意义（均P>0.05）。 结论UTI能通过Rho/ROCK信号通路抑制TNF-α引起的血管内皮细胞通透性增加,改善血管内皮屏障功能障碍。     

直接抗病毒药物治疗六例丙型肝炎病毒相关性皮肤损害患者的回顾性研究

目的探讨基于索磷布韦方案治疗丙型肝炎病毒（HCV）相关性皮肤损害的疗效和安全性。 方法回顾性分析2016年2月至2019年9月西安交通大学第二附属医院收治的6例HCV相关性皮肤损害患者接受基于索磷布韦方案治疗的效果和安全性。评估其持续病毒学应答（SVR12）率，治疗过程和治疗结束后肝功能和皮损症状的变化以及安全性。 结果6例患者年龄25～56岁；其中5例女性；2例肝硬化；3例基因型为HCV 1b，3例基因型为HCV 2a。皮损分别表现为阴囊湿疹、结节性痒疹、结节性红斑、扁平苔藓、干燥综合征和混和冷球蛋白血症相关皮损。2例患者病理确诊为HCV相关性皮损，4例患者临床诊断为HCV相关性皮损。患者接受索磷布韦/维帕他韦（3例）、索磷布韦/雷迪帕韦（2例）12周或索磷布韦/利巴韦林（1例）24周治疗。与基线水平相比，治疗结束或随访12周的丙氨酸氨基转移酶（ALT）显著降低、白蛋白（ALB）不变或升高，6例患者均获得SVR12且皮损均明显缓解。3例患者（阴囊湿疹、结节性痒疹、干燥综合征）皮损完全治愈，其他皮损包括结节性红斑、扁平苔藓、混和冷球蛋白血症相关皮损明显缓解，但需要接受免疫抑制剂和（或）细胞毒药物维持治疗。治疗期间未出现明显不良反应，随访期间皮损无复发。 结论HCV可引起不同的肝外皮肤表现，基于索磷布韦的无干扰素方案治疗HCV相关皮肤损害有效且安全性良好。对于皮肤疾病经对症治疗后效果欠佳者，需要尽早行HCV筛查，确诊HCV感染后建议尽快给予抗病毒治疗。     

乌司他丁抑制肿瘤坏死因子-α诱导血管内皮细胞高通透性的机制研究

目的探讨乌司他丁（UTI）对肿瘤坏死因子-α（TNF-α）诱导的血管内皮细胞通透性增高的影响及其主要分子机制。 方法离体培养人脐静脉内皮细胞系EA.hy926,分别以UTI和TNF-α作用于EA.hy926,小室法测单层细胞通透性,免疫荧光法测磷酸化肌球蛋白磷酸酶靶向亚基1（p-MYPT1）的表达;分别采用免疫细胞化学法、Western Blot法测与通透性相关的关键分子（RhoA、ROCK2、MYPT1、p-MYPT1及VE-cadherin）表达的变化情况。 结果TNF-α作用下EA.hy926单层细胞通透性增加,细胞内p-MYPT1的表达量较正常对照组明显增加,而UTI可改善EA.hy926细胞的上述变化情况;免疫细胞化学结果显示,与正常对照组比较,TNF-α作用下RhoA、ROCK2的表达明显增加,而UTI可抑制RhoA、ROCK2的高表达;Western Blot结果显示,与正常对照组比较,TNF-α作用下p-MYPT1、RhoA和ROCK2的表达明显增加,VE-cadherin的表达明显降低（均P<0.05）,而UTI可抑制p-MYPT1、RhoA和ROCK2蛋白的高表达,增加VE-cadherin的表达。 结论UTI可能通过Rho/ROCK信号通路抑制TNF-α引起的EA.hy926细胞通透性增加。     

Chromofungin抑制TNF—α诱导血管内皮通透性增加的钙信号机制北大核心CSCD

目的探讨嗜铬粒蛋白A（chromogranin A,CGA）衍生多肽Chromofungin（CHR）对肿瘤坏死因子-α（TNF—α）诱导血管内皮细胞钙内流的影响。方法以人脐静脉内皮细胞系EA．hy926细胞为研究对象,建立TNF—α刺激炎症模型,实验分为对照组、TNF—α组、10nmo/LCHR＋TNF—α组、100nmol/LCHR＋TNF-α组和1000nmol/L CHR＋TNF—α组。Transwell小室法检测EA．hy926细胞通透性,激光共聚焦法检测EA．hy926细胞内钙离子浓度（[Ca2＋]1）的变化。结果与对照组比较,TNF-α组明显增加EA．hy926细胞通透性[（1．189±0．086）vs．（1．771±0．195）,t=4．343,P=0．01];10nmol/L、100nmol/L和1000nmoL／LCHR抑制TNF-α诱导的EA．hy926细胞通透性增加,其中10nmol/L和100nmol/L CHR显著降低TNF-α诱导的EA．hy926细胞高通透性[（1．771±0．195）vs．（1．315±0．134）,t=3．403,P=0．042;（1．771±0．195）vs．（1．236±0．181）,t=3．985,P=0．017],1000nmol/LCHR降低TNF-α诱导的EA．hy926细胞高通透性,差异无统计学意义[（1．771±0．195）vs．（1．411±0．255）,t=2．679,P=0．126]。10nmol/L、100nmol/L和1000nmol/LCHR作用于EA．hy926细胞时细胞内Ca2＋浓度无明显变化。TNF-仪诱导EA．hy926细胞外Ca2＋快速内流,各时间点细胞内Ca2＋荧光强度F140、F1100与起始荧光值F1100比较,差异具有统计学意义[荧光强度分别为：（41．497±3．788）vs．（56．193±3．082）,F=196．129,P=0．000;（41．497±3．788）vs．（53．457±4．536）,F=101．19,P=0．000],10nmol／L、100nmol/L和1000nmol/LCHR能够抑制TNF-仪引起的Ca2＋快速内流。结论CHR抑制TNF-α诱导的EA．hy926细胞通透性增加,这一作用可能是通过阻止TNF-α诱导的细胞外Ca2＋内流来实现的。     

基于索磷布韦方案治疗HCV相关性肾小球肾炎的效果和安全性

目的探讨基于索磷布韦方案治疗HCV相关性肾小球肾炎的疗效和安全性。方法回顾性分析2015年4月-2018年10月西安交通大学第二附属医院5例HCV相关性肾小球肾炎患者接受基于索磷布韦方案抗病毒药物治疗的效果和安全性。评估治疗结束12周持续病毒学应答(SVR12),治疗过程和治疗结束肝肾功能、尿蛋白的变化和安全性。结果 5例患者纳入研究,年龄27～81岁; 4例男性,2例合并肝硬化; 4例基因1b,1例基因2a。2例患者进行肾活组织检查,病理诊断分别为膜增生性肾小球肾炎和系膜增生性肾小球肾炎。患者接受索磷布韦+利巴韦林(n=2)、雷迪帕韦/索磷布韦(n=2)和索磷布韦/维帕他韦(n=1)治疗12或24周。5例患者均取得SVR12。与基线相比,治疗结束和随访12周ALT明显降低,24 h尿蛋白定量明显降低伴有血清白蛋白水平的轻度升高,血清尿素氮和肌酐改善或维持不变。仅有1例患者出现利巴韦林相关的消化道副作用。结论基于索磷布韦的无干扰素方案治疗HCV相关性肾小球肾炎有效且耐受性良好。需要长期随访患者以明确HCV清除后肾脏疾病的长期预后。     

胰体尾切除术后胰瘘发生率及其影响因素分析

背景与目的 胰瘘是胰体尾切除（DP）术后最常见并发症,其与患者的预后及转归有着密切的关系。因此,本研究在探讨DP术后胰瘘发生情况及其影响因素,为制订防治措施提供依据。方法 回顾性分析2015年1月—2021年2月中国人民解放军空军军医大学第二附属医院收治的99例因胰腺肿瘤行DP术患者的临床资料,统计患者术后胰瘘的发生率,对可能导致术后胰瘘发生的相关因素行单因素及多因素Logistic回归分析。结果 99例患者DP术后生化漏发生率为34.3%（34/99）,B级胰瘘发生率18.2%（18/99）,C级胰瘘发生率1.0%（1/99）。单因素分析结果示,年龄、手术时间、胰管直径及是否联合脾切与胰瘘发生明显有关（均P<0.05）,多因素Logistic回归分析结果示,年龄<42岁（OR=0.955,95% CI=0.914~0.998）、手术时间≥253 min（OR=1.013,95% CI=1.005~1.021）及联合脾切术（OR=4.152,95% CI=1.043~16.535）为DP术后胰瘘的独立危险因素（均P<0.05）。结论 DP术后有一定的胰瘘发生率,年龄、手术时间、联合脾切是DP术后胰瘘的独立危险因素。这些危险因素评估对术后胰瘘的风险预测及防范措施的制定提供了一定的依据。     

嗜铬粒蛋白A衍生多肽CHR抑制LPS诱导的永生化脑微血管内皮细胞高通透性

目的 探讨嗜铬粒蛋白A衍生多肽CHR (chromofungin)对LPS所诱导的永生化人脑微血管内皮细胞高通透性的影响.方法 分别用LPS、CHR、CGA4-16作用于人脑微血管内皮细胞(human brain microvascular endothelial cells,HBMEC),用CCK8法检测不同浓度LPS刺激HBMEC细胞活力变化;EVOM法及Transwell小室法检测内皮细胞相对通透性;Western blot及RT-PCR法检测紧密连接蛋白(ZO-1和Claudin-5)的表达情况.结果 与空白组相比,随着LPS浓度增加,HBMEC细胞的活性受到显著抑制(P＜0.05).随着LPS作用时间延长,其细胞内紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-5的表达逐渐下调,6h后蛋白表达量降到最低(P＜0.05),12 h和24 h后其蛋白表达与6h相比无明显差异.LPS作用下HBMEC单层细胞电阻值明显降低(t=-18.214,P＜0.001),细胞通透性显著升高(t=6.083,P =0.004),ZO-1、Claudin-5的蛋白和mRNA表达明显下调(P＜0.05),而CHR可显著改善上述变化.结论 嗜铬粒蛋白A衍生多肽CHR能通过上调紧密连接相关蛋白的表达从而改善LPS所致的脑微血管内皮细胞高通透性.     

以颈椎压迫症状为首发表现的肝细胞癌伴椎管转移1例报告

我国每年死于肝细胞癌(HCC)患者约38.3万人,占全球肝癌死亡人数51%[1],死亡率居于我国癌症死因第2位,仅次于肺癌[2]。肝癌最常见的转移部位为肝内转移、肺、局部淋巴结、骨骼及肾上腺[3],罕见有椎管转移。现报道1例以脊髓压迫症状为首发表现的HCC伴椎管转移患者。     

乌司他丁抑制TNF-α诱导血管内皮细胞高通透性的研究

目的 探讨乌司他丁(UTI)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的血管内皮细胞高通透性的影响.方法 建立人脐静脉内皮细胞系EA.hy926细胞TNF-α诱导炎症模型,将其分为正常组、TNF-α组、UTI组及TNF-α+不同浓度的UTI组(T+U组),分别采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测EA.hy926细胞活性,EVOM法测单层细胞电阻,RT-PCR法、免疫细胞化学法检测血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)的表达.结果 与正常组相比,TNF-α作用下EA.hy926单层细胞电阻值明显降低(67.200 ±8.937 vs.33.600±8.771,P=0.010),通透性增加,UTI在1～ 100 U/mL范围内以剂量依赖性方式改善TNF-α所致的EA.hy926细胞高通透性(40.133 ±7.484 vs.33.600±8.771,P=0.382;49.232±3.162 vs.33.600±8.771,P=0.044;63.700±8.515 vs.33.600±8.771,P=0.013).TNF-α作用下EA.hy926细胞VE-cadherin mRNA的表达较正常组显著降低(1.089 ±0.018 vs.0.835±0.021,P=0.000),UTI可抑制TNF-α引起的VE-cadherin低表达,其中UTI浓度为10 U/mL和100U/mL时VE-cadherin mRNA的表达较TNF-α组差异具有统计学意义(0.976±0.014 vs.0.835±0.021,P =0.001;1.115 ±0.015 vs.0.835 ±0.021,P=0.000),UTI的上述作用在1～ 100 U/mL浓度范围内呈现出剂量依赖性.免疫细胞化学结果显示,与正常组相比,TNF-α作用下VE-cadherin的表达明显降低(0.061 ±0.013 vs.0.093 ±0.014,P=0.049),而UTI可改善TNF-0导致的VE-cadherin表达降低(0.032 ±0.004vs.0.061 ±0.013,P=0.016).结论 UTI可抑制TNF-α引起的EA.hy926细胞通透性增加,且在一定范围内呈现出剂量依赖性.     

脓毒症患者中横纹肌溶解综合征与预后关系的研究

目的 探讨脓毒症患者中横纹肌溶解综合征（RM）与病情严重程度及预后的关系。方法 采用前瞻性研究方法,入选2014年10月~2015年9月重庆医科大学附属第一医院中心ICU连续收治的脓毒症患者151例作为研究对象。检测入ICU当天的血清肌酸激酶（CK）,以CK≥1000U/L作为RM的诊断标准,比较发生RM的患者与未发生RM患者的感染标志物、危重症评分、器官功能障碍和28天病死率等。结果 151例脓毒症患者中37例（24.5%）发生RM。RM组的PCT水平、APACHEⅡ评分和SOFA评分较非RM组高（P<0.05）。RM组ICU期间肝脏功能障碍、循环障碍、肾脏功能障碍的发生率、人均器官障碍数、血肌酐峰值水平、接受连续肾脏替代治疗（CRRT）患者的比例和28天病死率较非RM组高（P<0.05）,而呼吸功能障碍、凝血功能障碍和神经系统障碍的发生率比较,差异无统计学意义（P>0.05）。CK对预测脓毒症患者28天死亡风险具有统计学意义,ROC曲线下面积（AUC）为0.694（P<0.05）,低于APACHEⅡ评分（0.841）和SOFA评分（0.805）（P<0.05）。结论 脓毒症患者中RM的发生率高,发生RM的患者的病情更危重,其ICU期间肝脏功能障碍、循环障碍、肾脏功能障碍的发生率和28天病死率均显著增加,CK可以作为预测脓毒症患者28天病死率的参考指标。