抑制 BHK21细胞 STYK1/NOK基因的转录组分析 #br#

目的 转录组分析抑制丝氨酸-苏氨酸-酪氨酸激酶 1（STYK1/NOK）后仓鼠肾正常细胞 BHK21的基因表 达,并分析其可能作用的信号通路。方法 BHK21细胞分为空载体组（转染 6 µg空载体 pBs/U6）、低转染浓度组（2 µg si-STYK1/NOK质粒+4 µg空载体 pBs/U6）和高转染浓度组（6 µg si-STYK1/NOK质粒）。转染 48 h后,Western blot 检测 STYK1/NOK蛋白表达,基于检测结果,选取空载体组和高转染浓度组提取总 RNA进行转录组测序。将测序所 得的序列进行过滤比对,获得差异表达基因后,应用 R软件进行生物功能（GO）分析和 KEGG信号通路分析。应用 STRING蛋白质互作数据库中的互作关系进行差异基因蛋白互作网络的分析。采用 qRT-PCR验证关键差异表达基 因亚甲基四氢叶酸脱氢酶 2（Mthfd2）、转录激活因子 5（Atf5）,ⅡA分泌型磷脂酶 A2（Pla2g2a）、6-磷酸果糖-2-激酶/ 果糖-2,6-双磷酸酶 3（Pfkfb3）的表达。CCK-8法检测空载体组和高转染浓度组细胞增殖情况。结果 Western blot 结果表明高转染浓度组明显抑制 STYK1/NOK蛋白表达。高转染浓度组与空载体组相比,共发现差异表达基因 44 个,包括 19个上调基因和 25个下调基因。GO富集分析发现差异表达基因主要影响生物调控、细胞进程、代谢调控、 细胞生物过程、细胞、细胞部分、胞外区、配体和催化活性。KEGG通路分析发现差异表达基因主要集中作用于免疫 系统、癌症、细胞周期、信号转导和氨基酸代谢等方面。qRT-PCR结果表明,高转染浓度组Mthfd2、Atf5的相对表达量 显著上调（P＜0.05）,Pfkfb3、Pla2g2a的相对表达量显著下调（P＜0.05）,与测序结果相一致。细胞增殖实验表明高转 染浓度组细胞增殖明显高于空载体组（P＜0.01）。结论 抑制 BHK21细胞 STYK1/NOK表达后,致使 BHK21细胞原 癌基因表达增强,抑癌基因表达减少,促进细胞增殖。     

雷帕霉素联合索拉非尼在超米兰标准肝移植肝细胞癌复发患者中的疗效观察

目的观察雷帕霉素联合索拉非尼在超米兰标准的肝细胞癌肝移植术后复发患者中的疗效。方法回顾性分析2012年2月1日至2015年8月31日期间于天津市第一中心医院行经典非转流原位肝移植术且术后发生肿瘤复发的超米兰标准的41例肝细胞癌患者的临床资料,根据不同治疗方案分为局部治疗组(21例)和综合治疗组(20例),局部治疗包括手术切除、射频消融、经肝动脉介入化疗栓塞及放射性~(131)I粒子植入,综合治疗是指在局部治疗基础上加用雷帕霉素联合索拉非尼。结果局部治疗组治疗后疾病稳定12例、疾病进展9例,综合治疗组治疗后部分缓解2例、疾病稳定10例、疾病进展8例。局部治疗组和综合治疗组肿瘤复发后中位生存时间分别为9个月和12个月,复发后1年生存率分别为14%和55%,复发后2年生存率分别为0和15%,综合治疗组的生存曲线显示明显优于局部治疗组(P0.01)。结论对超米兰标准肝细胞癌肝移植术后肿瘤复发患者采用雷帕霉素联合索拉非尼综合性治疗可显著提高复发患者的生存时间。