角膜缘干细胞培养体系的研究进展

正常角膜上皮形态稳定和功能的维持是依靠角膜缘干细胞的不断增殖和移行来实现。近年来，角膜缘干细胞的重要作用逐渐被人们所认识。本文从角膜缘干细胞的定位、体外取材、分离培养、培养条件的选择、常用体外培养的载体、鉴别方法等对角膜缘干细胞培养体系进行综述。     

兔脂肪间充质干细胞分离培养及其向神经细胞分化的特征

目的:分离培养兔脂肪间充质干细胞,探讨兔脂肪间充质干细胞在体外向神经细胞分化的能力。方法:实验于2002-09/2005-09在陕西省干细胞工程技术研究中心完成。选取清洁级新西兰大白兔5只,采用Ⅰ型胶原酶消化兔腹股沟皮下脂肪组织,分离培养脂肪间充质干细胞。取生长状况良好的第2,5,10代细胞,绘制生长曲线,计算细胞群体倍增时间。采用免疫组化方法对脂肪间充质干细胞表面分子标志[CD14,CD29,CD34,CD44,CD45,CD105及人白细胞抗原DR亚类(群)]进行鉴定,并采用1,2.5,5,10mmol/L不同浓度的β-巯基乙醇检测脂肪间充质干细胞向神经细胞分化的能力。结果:①脂肪间充质干细胞生长曲线分析:第2,5,10代细胞体外传代培养的潜伏期约为24～48h,传代培养细胞的对数增殖期为6d,接种后第9天进入平台期。在细胞生长的对数期,脂肪间充质干细胞的倍增时间为64.12h。②脂肪间充质干细胞分子特征的鉴定结果:第2～5代细胞90%以上CD29,CD44,CD105呈阳性表达,而不表达CD14,CD34,CD45及人白细胞抗原DR亚类(群)等表面分子标记。③脂肪间充质干细胞向神经细胞分化情况:体外能够分化为神经细胞。结论:兔脂肪组织可分离培养出脂肪间充质干细胞,并能够向神经细胞分化,有望成为组织工程的种子细胞来源。     

胰蛋白酶预消化后植块法分离培养人胚成骨细胞

目的:改良成骨细胞分离培养方法,为骨形成、骨代谢以及骨组织工程等基础研究提供种子细胞。方法:实验于2002-09/2005-09在陕西省干细胞工程技术研究中心完成。①无菌条件下取五六个月龄流产胎儿颅盖骨(家属知情同意),去除骨膜及周围结缔组织,然后用2.5g/L胰蛋白酶消化20min,终止消化后,去除骨缝组织,剪碎,将碎骨块接种于培养瓶中分离培养成骨细胞。②细胞纯化采用差速贴壁法。通过相差显微镜观察人胚成骨细胞原代和传代培养的生长特征。③用碱性磷酸酶染色、钙结节茜素红染色等方法对所获得的成骨细胞进行鉴定。结果:①人胚成骨细胞原代和传代培养的生长特征:原代培养至第5天,骨块边缘出现零散的细胞,这些细胞的形态主要为梭形、三角形或多边形。原代培养第14天后,形成融合层,细胞呈圆形、卵圆形或方形紧密排列,叠层生长。传代细胞主要呈三角形或方形细胞,细胞排列无方向性,出现集落样生长趋势。②人胚成骨细胞的鉴定结果:90%以上分离获得细胞碱性磷酸酶染色和钙结节染色均呈阳性。结论:采用酶消化后植块的改良植块培养法可在较短时间内获得大量成骨细胞,这些细胞具有典型的成骨细胞形态和功能,是一种较好的分离培养人胚成骨细胞的方法。     

哺乳动物胰腺干细胞研究进展

糖尿病是危害人类健康的重大疾病之一，目前的药物及胰岛素替代疗法尚不能从根本上医治该病。近年来，随着组织干细胞工程的兴起，体外分离、克隆胰腺干细胞，并定向诱导其分化为胰岛β细胞，移植β细胞根治Ⅰ型和部分Ⅱ型糖尿病已成为又一研究热点。本文综述了有关胰腺干细胞的分布、活性表现、相关标记物以及胰腺干细胞分离．培养及定向诱导分化为胰岛β细胞等领域的研究进展。     

组织修复中成体干细胞治疗新概念

在个体的大多数组织器官中已发现干细胞的存在。这些成体干细胞,尤其是骨髓或外周血源干细胞,表现出广泛的分化潜能。人们已对这些成体干细胞进行了大量的临床前和临床在体研究,表明成体干细胞在组织修复担当重要角色。综述骨髓源和外周血源成体干细胞临床前和临床在体研究、成体干细胞在体分化机制以及其潜在的治疗应用。     

清开灵和双黄连口服液体内抗禽流感病毒作用

目的 评价清开灵和双黄连口服液体内抗禽流感病毒药效,探讨其对感染流感病毒小鼠免疫功能的影响。方法 建立H9N2亚型禽流感病毒鼠肺适应株人工感染BALB/c小鼠模型,以肺指数抑制率、生命保护率和肺病毒滴度为主要评价指标,研究清开灵和双黄连口服液对感染H9N2亚型禽流感病毒小鼠的防治效果;以脾指数、胸腺指数和T细胞亚群比率（CD4⁺/CD8⁺）为主要评价指标,探讨清开灵和双黄连口服液对感染流感病毒小鼠免疫功能的影响。结果 清开灵和双黄连口服液均能显著抑制H9N2亚型禽流感病毒引起的小鼠肺炎实变,攻毒后第4天小鼠肺指数抑制率分别为34.1%、26.3%。清开灵和双黄连口服液对感染小鼠有显著的生命保护作用,存活率分别为70.0%、60.0%,显著高于病毒对照组的存活率（30.0%）,鼠肺病毒滴度显著低于病毒组（P＜0.01）。清开灵和双黄连口服液对感染病毒后小鼠脾脏和胸腺萎缩具有显著的抑制作用,并能提升感染小鼠脾脏中CD4⁺/CD8⁺值。结论 清开灵和双黄连口服液具有显著的抗禽流感病毒作用,对病毒复制的抑制及对病毒感染导致的小鼠免疫功能下降的调节作用是其发挥抗病毒功效的重要机制。     

胚胎干细胞生物学特性

来源于早期胚胎或原始生殖细胞的胚胎干细胞(ES细胞)可在体外抑制分化培养条件下无限扩增,并保持未分化状态和多能性.ES细胞研究是国际生物科学的热点课题之一.多年来,众多学者对ES细胞形态结构、核型、分化潜能、碱性磷酸酶、胚胎阶段特异性细胞表面抗原的表达以及一些分子标记等生物学特性作了大量研究报道,为ES细胞分离鉴定提供了理论基础.     

胰蛋白酶预消化后植块法分离培养人胚成骨细胞

目的：改良成骨细胞分离培养方法，为骨形成、骨代谢以及骨组织工程等基础研究提供种子细胞。 方法：实验于2002—09／2005-09在陕西省干细胞工程技术研究中心完成。①无菌条件下取五六个月龄流产胎儿颅盖骨（家属知情同意），去除骨膜及周围结缔组织，然后用2．5g/L胰蛋白酶消化20min，终止消化后，去除骨缝组织，剪碎，将碎骨块接种于培养瓶中分离培养成骨细胞。②细胞纯化采用差速贴壁法。通过相差显微镜观察人胚成骨细胞原代和传代培养的生长特征。③用碱性磷酸酶染色、钙结节茜素红染色等方法对所获得的成骨细胞进行鉴定。 结果：①人胚成骨细胞原代和传代培养的生长特征：原代培养至第5天，骨块边缘出现零散的细胞，这些细胞的形态主要为梭形、三角形或多边形。原代培养第14天后，形成融合层，细胞呈圆形、卵圆形或方形紧密排列，叠层生长。传代细胞主要呈三角形或方形细胞，细胞排列无方向性，出现集落样生长趋势。②人胚成骨细胞的鉴定结果：90％以上分离获得细胞碱性磷酸酶染色和钙结节染色均呈阳性。 结论：采用酶消化后植块的改良植块培养法可在较短时间内获得大量成骨细胞，这些细胞具有典型的成骨细胞形态和功能，是一种较好的分离培养人胚成骨细胞的方法。     

组织修复中成体干细胞治疗新概念

在个体的大多数组织器官中已发现干细胞的存在。这些成体干细胞，尤其是骨髓或外周血源干细胞，表现出广泛的分化潜能。人们已对这些成体干细胞进行了大量的临床前和临床在体研究，表明成体干细胞在组织修复担当重要角色。综述骨髓源和外周血源成体干细胞临床前和临床在体研究、成体干细胞在体分化机制以及其潜在的治疗应用。     

成年山羊皮肤干细胞体外克隆与诱导分化

目的 探索山羊皮肤干细胞的分离方法与培养体系，为进一步研究皮肤干细胞增殖分化的分子机制订下基础。方法 从成年关中奶山羊耳尖获取皮肤，用组织块培养法分离皮肤干细胞，碱性磷酸酶(ALP)染色及体外分化实验鉴定，用条件培养基与细胞因子相结合行皮肤干细胞的体外诱导分化。结果 山羊耳尖皮肤分离得到类干细胞集落并传5代，细胞集落具有典型鸟巢状结构，ALP染色阳性，体外分化能形成类胚体。在细胞因子(IGF—1)及条件培养基的诱导下，所分离获取的皮肤干细胞能分化形成类毛囊，类星形胶质细胞及类成骨细胞。结论 用组织块培养法可以获得多能性皮肤干细胞；在体外培养条件下不仅能进行定向分化，还能进行横向分化。