rhBMP2作用下人牙周膜成纤维细胞中cbfα1的表达研究

目的：本实验通过反转录聚合酶链反应,测定不同浓度的重组人骨形成蛋白2（rhBMP2）对人牙周膜成纤维细胞中cbfα1mRNA在不同作用时间点表达,了解rhBMP2对骨改建过程的调控。方法：原代培养人牙周膜成纤维细胞,取生长良好的第6代细胞,分别用25ng/ml、50ng/ml及100ng/ml的rhBMP2作用于细胞,于作用1、3、5、7天后收集细胞。反转录聚合酶链反应检测各组细胞4个时间作用点cbfα1 mRNA含量,PCR产物1%琼脂糖凝胶电泳后,采用Image Pro Plus5.0图像分析软件对电泳胶带亮度进行分析。结果：不同浓度rhBMP2对cbfα1mRNA的表达均表现为初期降低,而后明显增高,至峰值后回落。不同浓度对cbfα1 mRNA表达上调的峰值没有明显差异。100ng/ml和50ng/ml的rhBMP2浓度组能够较快地上调cbfα1mRNA表达至峰值,然后100ng/ml组表现为缓慢下降,50ng/ml组迅速回落;25ng/ml组较慢上调cbfα1mRNA的表达至峰值后,迅速回落。结论：①根据实验各组中cbfα1的表达变化,提示笔者BMP2可以上调HPDLfs中cbfα1的转录水平,并且对cbfα1的表达调控主要为启动作用,cbfα1的表达增高幅度似乎与rhBMP2浓度并不相关。②高浓度组对cbfα1的上调作用迅速而持久,低浓度组的作用则相对迟缓而短暂。提示笔者BMP2可能通过上调cbfα1的表达而促进HPDLfs向成骨细胞转化。     

rhBMP2作用下人牙周膜成纤维细胞中OCIF、ODF的表达研究

目的：本研究通过反转录聚合酶链反应来测定不同浓度的重组人骨形成蛋白2（rhBMP2）对人牙周膜成纤维细胞中OCIF、ODFmRNA在不同作用时间点表达的影响,了解rhBMP2对骨改建相关基因的调控方式。方法：原代培养人牙周膜成纤维细胞,取生长良好的第六代细胞,分别用25ng/ml、50 ng/ml及100 ng/ml的rhBMP2作用于细胞,于作用1、3、5、7天后收集细胞。反转录聚合酶链反应检测各组细胞四个时间作用点OCIF、ODF mRNA含量,PCR产物1%琼脂糖凝胶电泳后,采用Image Pro Plus5.0图像分析软件对电泳胶带亮度进行分析。结果：在rhBMP2作用初期,由于OCIF mRNA的表达快速上升,ODF mRNA的表达缓慢增高,二者的表达差异远大于正常生理水平;随作用时间的延长,由于OCIF mRNA的表达下降,ODF mRNA的表达缓慢增高,二者的表达差异逐渐缩小,在作用末期低于正常生理水平。结论：基于OCIF与ODF二者表达的相对变化,HPDLfs在rhBMP2的作用下可能对破骨细胞的形成在初期表现为较强的抑制,随着作用时间的延长,HPDLfs对破骨细胞的抑制作用逐渐转变成为促进其活化的作用。     

阿霉素诱导SACC-83细胞凋亡的试验研究

目的：探讨阿霉素诱导腺样囊性癌细胞凋亡的最佳剂量。方法：采用SACC-83细胞系，于体外分别以含有5μg／ml、10μg／ml、20μg／ml阿霉素的培养液处理12小时后，进行凋亡DNA电泳梯状图谱、流式细胞仪凋亡率的检测和细胞形态学分析。结果：5μg／ml、10μg／ml组细胞检测到凋亡带，而20μg／ml组可见明显的坏死带。形态学上看到20μg／ml组主要表现为坏死；10μg／ml凋亡与坏死同时存在，；5μg／ml时表现为单纯的细胞凋亡。流式细胞仪检测结果发现，在5μg／ml浓度阿霉素作用下，凋亡细胞可达68．46％与其它组相比有显著性差异（P＜0．01）。结论：通过阿霉素诱导SACC-83细胞建立凋亡模型，检测发现阿霉素5μg／ml作用下可得到较高含量的凋亡细胞。     

负载腮腺腺样囊性癌抗原的树突状细胞诱导的抗肿瘤效应

目的：探讨腺样囊性癌肿瘤抗原负载的树突状细胞通过淋巴细胞介导的免疫反应,体外杀伤腺样囊性癌细胞的细胞毒性效应。方法：外周血单核细胞在GM—CSF＋IL-4的诱导下体外培养,用肿瘤细胞抗原冲击后,流式细胞仪检测树突状细胞抗原负载前后CD1a、CD83表达量的变化。MTT比色法检测同种异体的混合淋巴细胞反应和诱导细胞毒淋巴细胞CTL杀伤肿瘤细胞。结果：凋亡肿瘤抗原刺激后,CD83表达增加（P〈0．01）,而CD1a表达量下调（P〈0．05）。负荷肿瘤抗原树突状细胞体外诱导出明显的细胞不良反应,并刺激同种T淋巴细胞增殖。结论：GM—CSF＋IL-4诱导的单核细胞来源的树突状细胞,能在体外摄取肿瘤抗原而进一步成熟,通过激活淋巴细胞杀伤癌细胞。     

单次不同X线剂量照射对SACC-83细胞的放射生物学效应

目的了解体外培养的SACC-83细胞对不同剂量X线照射的反应。方法采用SACC-83细胞系，于体外分别给予2Gy、5Gy、10Gy、15Gy、20Gy、25Gy和30Gy的X线照射，进行集落细胞数、集落形成率、凋亡DNA电泳梯状图谱、流式细胞仪凋亡率的检测和细胞形态学观察。结果对照组细胞倍增迅速，2Gy、5Gy、10Gy细胞增殖缓慢，15Gy以上的其余各组细胞未见增殖；集落形成率检测显示，15Gy以上剂量照射各组均为0．2—15Gy照射能检测到凋亡带，15Gy以上为明显的坏死带。15Gy已达体外SACC-83细胞的致死剂量。在形态学上20—30Gy为坏死，在10Gy-15Gy为凋亡与坏死的过渡区，在10Gy剂量时表现为单纯的细胞凋亡，2-5Gy表现为凋亡细胞与活细胞同时并存。经2，5Gy剂量照射细胞主要表现为s期细胞的比例减少，G2／M期细胞的比例增多，经10、15、20Gy剂量照射细胞主要表现为s期细胞和G2／M期细胞的比例均减少。结论通过SACC-83建立的射线细胞模型，提示在单次连续低剂量的放射线作用下表现为凋亡和活细胞共存，随着放射剂量的增加为凋亡，进而为凋亡和坏死并存，大剂量时，为细胞的坏死，这说明放射线对腺样囊性癌的作用为致细胞凋亡和直接细胞毒作用。照射剂量不同可能引起不同时相的细胞发生凋亡，提示细胞对放射剂量的反应性与细胞周期检测点之间存在一定的关系。     

腺样囊性癌细胞凋亡抗原负载的树突状细胞诱导抗肿瘤效应的体外研究

目的 探讨负载腮腺腺样囊性癌细胞凋亡肿瘤抗原的树突状细胞,诱导淋巴细胞介导的免疫反应,观察其体外杀伤腺样囊性癌细胞的细胞毒性效应.方法 外周血单核细胞,在粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子(Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor GM-CSF) 白细胞介素-4(Interleukin-4 IL-4)的诱导下体外培养,用凋亡肿瘤细胞抗原冲击后,流式细胞仪检测树突状细胞抗原负载前后CD1a、CD83表达量的变化.采用MTT比色法检测同种混合淋巴细胞反应和诱导细胞毒性T细胞(Cytotoxic T lymphocyte CTL)反应.结果 凋亡肿瘤抗原刺激后,CD83 表达急剧增加(P＜0. 01),而CD1a表达量下调(P＜0.01).负荷凋亡肿瘤抗原树突状细胞体外诱导出明显的细胞毒性反应,并刺激同种T淋巴细胞增殖.结论 GM-CSF IL-4 诱导的单核细胞来源的树突状细胞 ,能在体外摄取凋亡肿瘤抗原而进一步成熟,通过激活淋巴细胞杀伤癌细胞.     

负载腮腺腺样囊性癌抗原的树突状细胞诱导的抗肿瘤效应

目的:探讨腺样囊性癌肿瘤抗原负载的树突状细胞通过淋巴细胞介导的免疫反应,体外杀伤腺样囊性癌细胞的细胞毒性效应.方法:外周血单核细胞在GM-CSF + IL-4 的诱导下体外培养,用肿瘤细胞抗原冲击后,流式细胞仪检测树突状细胞抗原负载前后CD1a、CD83表达量的变化.MTT比色法检测同种异体的混合淋巴细胞反应和诱导细胞毒淋巴细胞CTL杀伤肿瘤细胞.结果:凋亡肿瘤抗原刺激后,CD83 表达增加﹙P<0.01﹚,而CD1a表达量下调﹙P<0.05).负荷肿瘤抗原树突状细胞体外诱导出明显的细胞不良反应,并刺激同种T淋巴细胞增殖.结论:GM-CSF + IL-4 诱导的单核细胞来源的树突状细胞,能在体外摄取肿瘤抗原而进一步成熟,通过激活淋巴细胞杀伤癌细胞.