肿瘤干细胞的研究现状

干细胞是一类具有自我更新能力和多向分化潜能的原始细胞, 目前已分离培养出多种组织来源的干细胞。同时, 人们亦发现恶性肿瘤进行性生长、转移和复发的特点与干细胞的基本特性十分相似, 继而推测肿瘤是干细胞分化增殖失调而产生的异常组织, 并提出了肿瘤发生的干细胞学说 [1]。近期的研究已从血液系统肿瘤、乳腺癌及脑部肿瘤中初步分离出肿瘤干细胞 [2-5], 为这一理论提供了有力的证据。1　肿瘤干细胞肿瘤干细胞的观念并非新生事物。早在四十多年前, 研究者就发现了它们可能存在的迹象。当时观察到只有 1%的白血病细胞可以在培养皿中生…     

天然角蛋白自身反应性B细胞亚群及功能的分析

目的:明确天然角蛋白反应性B细胞的亚群及解剖定位,初步分析其分泌天然抗角蛋白自身抗体(anti-keratinautoantibody,AKautoAb)的能力。方法:取SPF级C57BL/6小鼠的脾细胞和腹腔细胞,荧光抗体染色后用流式细胞仪分析角蛋白反应性B细胞亚群。将脾脏和腹腔淋巴细胞体外培养后,用ELISA分析AKautoAb的滴度,用ELISPOT法分析分泌AKautoAb的B细胞数。结果:腹腔中几乎所有结合角蛋白的B细胞均为B-1a细胞,脾脏中结合角蛋白的B细胞以边缘带B细胞为主。腹腔细胞中分泌AKautoAb的细胞数显著多于脾细胞,其培养上清中AKautoAb的滴度显著高于脾细胞。结论:角蛋白反应性B细胞存在于3个成熟B细胞亚群:B-1细胞、滤泡B细胞和边缘带B细胞,其中CD5 的B-1a细胞具有活跃的分泌AKautoAb的能力。     

大鼠β细胞素蛋白的表达、纯化及生物学活性鉴定

目的:获得大量重组大鼠β细胞素并检测其活性。方法:用PCR法从大鼠肾组织中扩增534bp的β细胞素基因片段,并按读框克隆到原核表达载体pET28a( )中。以构建的重组质粒pET28a-rBTC转化大肠杆菌BL-21(DE3)菌株,在IPTG诱导下表达β细胞素蛋白,表达产物用SDS-PAGE和Westernblot检测。采用镍柱亲和层析法纯化目的蛋白。结果:经IPTG诱导后,在大肠杆菌中可表达相对分子质量Mr为20000的目的蛋白。目的蛋白主要以包涵体的形式表达;表达量约占菌体蛋白总量的20%～30%。表达的目的蛋白与抗His标签抗体具有良好的反应性。结论:大鼠β细胞素基因在PET表达系统中得到高效表达;蛋白复性后能有效地促进NIH3T3细胞的体外增殖。     

兔BK通道β亚基多克隆抗血清的制备

目的:用小鼠制备抗兔BK通道β亚基的抗血清。方法:采用RT-PCR扩增编码兔BK通道β亚基胞内段的基因。在大肠杆菌中表达GST-β亚基融合蛋白。以从PAGE凝胶上切下的融合蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗血清。用ELISA和Westernblot鉴定抗血清的特异性。结果:用RT-PCR扩增出约300bp的兔BK通道基因。序列分析显示,扩增的序列与已发布的新西兰大白兔骨骼肌BK通道的序列完全一致。在E.coliDH5α成功地表达Mr约为37000GST-β亚基融合蛋白。ELISA和Westernblot检测证明,针对GST-β亚基融合蛋白的抗血清,不仅可特异性地识别GST-β,也可识别源于兔组织的β蛋白。抗血清的最高滴度达1∶128000。结论:克隆了编码兔BK通道β亚基胞内段的基因,并成功地获得可特异性识别新西兰大白兔BK通道β亚基的高滴度抗血清,为BK通道的进一步研究提供了物质基础。     

成人隔疝修补术麻醉体会

近来 ,我们成功地完成了多例成人膈疝修补术的麻醉。现将我们记录完整的 1例报告如下。1　临床资料男 ,36岁 ,体重 76ｋｇ。ＡＳＡⅡ级。病人主诉 1年前因活动后心悸 ,呼吸急促。Ｘ线报告 :膈疝 ,近几个月来症状加重 ,进食后返酸 ,消化不良。ＣＴ报告 :左胸腔内有胃、脾、小肠、结肠等腹腔器官 ,纵隔右移 ,气管右移 ,左肺下叶不张。心电报告 ,窦性心律 ,电轴正常 ,低电压 ,Ｔ波变化不正常心电图。实验室检查均正常。麻醉前检查 :病人精神状态佳 ,营养状态良好 ,屏气试验<30ｓ ,气管明显右移 ,心脏听诊心律齐 ,各瓣口未闻及杂音 ,心率 96次 /…     

安氟醚和七氟醚对腹部手术机体耗氧量的影响

对比安氟醚、七氟醚两种吸入麻醉药在腹部手术麻醉期间对机体耗氧量（ＶＯ２）的影响。方法选择择期腹部手术病３０例,ＡＳＡⅠ－Ⅱ级,随机分为安氟醚（Ｅ）组和七氟醚（Ｓ）组。记录手术开始前、麻醉吸醚后５ｍｉｎ及手术开始后３０、６０、９０、１２０、１５０ｍｉｎ时的吸入一呼出氧浓度差,分钟通气量,计算ＶＯ２。同时记录呼气末ＣＯ２浓度（Ｅ－ＴＣＯ２）,平均动脉压（ＭＡＰ）、心率（ＨＲ）,体温（Ｔ）,最低肺泡有效     

多媒体教学实践的价值定位与反思

多媒体教学是现代信息技术在高等教育领域运用的具体体现。多媒体教学的应用打破了传统教学的局限性,促进了课堂效率的提高,在教学实施过程中显示出传统教学方法无可比拟的优势。但随着多媒体教学的实践,其又带来了不可忽视的负面作用。通过反思多媒体教学实践过程中出现的负面问题,从教育学视角为合理利用多媒体教学、培养新世纪复合型人才提出了科学的建议。     

小鼠牙髓干细胞培养及诱导分化

目的 :分离、培养小鼠牙髓干细胞并诱导分化 .方法 :采用酶消化培养法获得小鼠的单个牙髓细胞悬液 ,细胞密度调整为 1× 10 4/孔细胞 ,用 2 0 0mL·L -1胎牛血清的α MEM培养液培养 14d ,挑出细胞克隆消化传代 ,TGF β、BMP2 、bFGF细胞因子诱导 ,PCR检测DSPP的mRNA的表达 .结果 :小鼠牙髓细胞呈集落状生长 ,克隆形成率为 1.6 -2 .5个 / 10 4细胞 ,所形成的集落细胞结合紧密 ,细胞体积小、胞核大 ,经细胞因子刺激后的细胞表达DSPP的mRNA .结论 :培养的小鼠牙髓集落状生长的细胞具有干细胞增殖快等特性 ,细胞因子可诱导小鼠牙髓干细胞定向分化     

血管内皮细胞调控血管平滑肌细胞表型的机制及其在动脉血管疾病中的作用研究进展

血管内皮细胞(vascular endothelial cells,VECs)与血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)在结构上紧密相连,在功能上互相影响。VECs可通过直接(Notch信号通路)或间接(细胞因子、外泌体)方式调控VSMCs表型转变,以应对缺氧、炎症或异常机械力等刺激并维持血管稳态,该过程异常是导致动脉粥样硬化、主动脉瘤、主动脉夹层等动脉血管疾病的重要原因。本文将对VECs调控VSMCs表型转变的机制及其在动脉血管疾病中的作用做一综述。     

应用胞内染色技术分析抗TNF-α单链抗体的活性

本文用TPA和LPS刺激培养的HL6 0细胞作为靶的 ,通过胞内染色技术和流式细胞仪分析了抗TNF α单链抗体 (ScFv)的活性。结果表明 ,抗TNF αScFv和其亲本单克隆抗体 (mAb)与TNF α竞争作用显示平均荧光强度 (MFC)为 2 2 7% ,而mAb与TNF α结合显示MFC为 6 9 5 % ,抗TNF αScFv E tag与TNF α结合显示MFC为 48 8% ,空白和阴性对照的MFC分别为1 1%和 2 5 %。相对于mAb ,ScFv的抑制率是 78 37% ,抗原相对结合力是 6 8 17%。本文的结果说明抗TNF αScFv具有与其亲本单抗相同表位的结合活性 ,也为定量和直观测定ScFv的活性提供了实验依据。