大肠癌Lovo细胞E-Cadherin,N-Cadherin的表达及化学治疗药物对其表达的影响

目的：研究大肠癌Lovo细胞上皮钙粘附素(E-Cadherin)，神经钙粘附素(N-Cadherin)的表达及常用化学治疗药物对其表达的影响。方法：应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测大肠癌Lovo细胞E-Cad-herin，N-Cadherin的表达，并通过几种不同的化疗药物(顺铂、吡柔比星、丝裂霉素、5-FU)不同浓度和时间作用后，对E-Cadherin，N-Cadherin表达的影响。结果：不同化疗药物对大肠癌Lovo细胞N=Cadherin表达无影响，高浓度顺铂和高浓度吡柔比星二组出现-Cadherin表达，其它各组未见表达。结论：大肠癌常用的化疗药物无论低浓度持续用药，还是高浓度短时间用药，对大肠癌Lovo细胞N-Cadherin的表达无抑制作用，说明上述药物不能通过抑制N—Cadherin的表达，而起到抗癌作用。高浓度顺铂和吡柔比星二组显示E-Cadherin的表达，表现出抑癌的作用，从而提示在大肠癌化疗时，顺铂和吡柔比星更适合于高浓度短时间应用。     

HSV-TK/GCV系统联合多柔比星对SK-OV-3的杀伤作用

目的 :探讨HSV TK/GCV(单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激酶 /丙氧鸟苷 (substrateⅠofherpessimplexvirusthymidinekinase/ ganciclovir)系统及其与普通化疗联合用于治疗卵巢癌的可行性 ,研究分子化疗药物GCV与普通化疗药多柔比星 (阿霉素 )联合应用对卵巢癌SK OV 3/TK细胞的杀伤作用。这对于缺乏有效的早期诊断和治疗手段的卵巢癌具有特殊的意义。方法 :将携带HSV TK基因的逆转录病毒重组体 (XM 6 /TK)以磷酸钙共沉淀法导入包装细胞 ,经G4 18筛选获得产病毒的阳性克隆细胞。继而以包装好的复制缺陷型逆转录病毒为运载体将HSV TK基因导入SK OV 3卵巢癌细胞。再经G4 18筛选 ,确定目的基因在靶细胞内稳定表达后 ,观察GCV对细胞的杀伤作用。进一步观察GCV与多柔比星联合应用对SK OV 3/TK细胞的杀伤作用。结果 :HSV TK基因可由重组逆转录病毒导入卵巢癌细胞并能获得稳定表达 ;GCV(10mg·L-1)可明显抑制被转化的卵巢癌细胞 (SK OV 3/TK)的生长 ,对于SK OV 3/TK细胞 ,在单独应用GCV时 ,其最低有效 (质量 )浓度为 10mg·L-1;单独应用多柔比星时 ,其最低有效 (质量 )浓度为 1mg·L-1;而联合应用时 ,GCV 5mg·L-1、多柔比星 0 .2 5mg·L-1对SK OV 3/TK细胞即可产生明显的杀伤作用。结论 :逆转录病毒介导的HSV TK/GCV系统可     

HSV—TK／GCV系统联合多柔比星对SK—OV—3的杀伤作用

目的：探讨ＨＳＶ－ＴＫ／ＧＣＶ（单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激酶／丙氧岛苷（ｄｕｂｓｔｒａｔｅ Ⅰ ｏｆ ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ ｖｉｒｕｓ ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ／ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ）系统及其与普通化疗联合用于治疗卵巢癌的可行性，研究分子化疗药物ＧＣＶ与普通化疗药多柔比星（阿霉素）联合应用对卵巢癌ＳＫ－ＯＶ－３／ＴＫ细胞的杀伤作用。这对于缺乏有效的诊断和治疗手段的卵巢癌具有特殊的意义     

大肠癌中p53和p21WAF1/CIP1蛋白表达及其意义

野生型p53能够诱导p21表达,引起多种肿瘤细胞的生长抑制 ,而突变p53则无此作用 [1].目前发现在多种肿瘤中p53和p21两种基因都存在着较为明显的改变,其在大肠癌中的表达情况及其与临床资料的关系尚无统一结果,我们采用免疫组织化学方法对1994～19 96年间在北京大学第一医院进行手术的50例大肠癌患者的手术切除标本进行了突变型p53和 p21蛋白表达检测,探讨他们与大肠癌临床病理资料和预后之间的关系. 1 材料与方法 选取1994～1996年我院收治的50例大肠癌病人石蜡标本,男30例,女20例,平均年龄为 57.52 岁,所有病例均有完整的临床资料、明确的病理诊断和3年的随访纪录. 采用SP法进行石蜡切片免疫组化染色,p53抗体为小鼠IgG单抗(Dako公司产品),p21抗体为小鼠IgG单抗(Nococastra公司产品),SP试剂盒为美国ZYMED产品.实验参照SP试剂盒说明书进行.参考美国亚利桑那州癌症中心病理科及有关文献标准,按肿瘤着色数量多少将染色强度分为4级:不着色为阴性(-),0～25个细胞着色为弱阳性(+),26～50个细胞着色为阳性(++) ,着色细胞大于50个为强阳性(+++).统计学处理采用秩和检验、χ2检验、 Wilcoxon检验和Log-rank检验(spss/pc+软件).     

大肠癌组织和正常黏膜中端粒酶活性表达及临床意义

目的:探讨端粒酶活性检测作为一种新的肿瘤临床诊断的生物学标志的可行性.方法:应用端粒重复扩增实验(telomerase repeat amplification protocol,TRAP法)结合非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳银染法测定35例大肠癌标本及正常黏膜端粒酶活性.结果:35例大肠癌标本中,29例为端粒酶阳性,阳性率为82.86%;而相邻正常黏膜中全部为阴性.两者之间差异有显著性,经统计学分析,端粒酶活性与大肠肿瘤Dukes'分期有关.结论:端粒酶表达具有很高的肿瘤特异性,对大肠肿瘤的临床诊断有应用价值,并且有判断预后和指导临床治疗的潜在意义.     

化学治疗药物对大肠癌细胞端粒酶活性的影响

目的：研究常用化学药物对大肠癌细胞HT－29端粒酶活性的影响。方法：利用端粒酶重复扩增实验（TRAP）结合非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳银染法。测定HT－29细胞经过几种化学药物（顺铂，阿霉素，吡柔比星，丝裂霉素，5－FU）不同浓度和时间作用后端粒酶活性的变化。结果：当各种药物大剂量处理细胞4h后再祛除药物培养20h,顺铂对酶的活性完全抑制，丝裂霉素，吡柔比星，阿霉素和5－FU无明显抑制作用。而未经20h再培养则无作用；小剂量药物处理细胞6d。其结果同大剂量相似。结论：顺铂对大肠癌HT－29细胞端粒酶活性有明显抑制作用，而其他几种化学药物没有明显的抑制作用。     

大肠癌端粒酶各组分表达及其与端粒酶活性的关系

目的：研究端粒酶的3种组分与其活性的关系,探讨端粒酶激活的关键因素。方法：采用TRAP法检测大肠癌组织及相邻正常黏膜组织中端粒酶活性,用RT－PCR检测端粒酶3种组分的表达。结果：在64例（85．33％）癌组织中检测到端粒酶活性,正常黏膜中没有端粒酶活性,两者差异有显著性（P＜0．01）;hTR和TP1基因的表达在癌组织和正常黏膜没有差别,hTERT在癌组织中的表达要明显高于正常黏膜,差别具有显著性（P＜0．01）,hTERT基因表达强度与端粒酶活性密切相关。结论：大肠癌端粒酶活性表达具有肿瘤特异性,hTERT在癌组织中的表达明显高于正常粘膜,大肠癌中端粒酶活性和hTERT基因表达强度密切相关,hTERT基因表达可能是端粒酶激活的关键因素。     

组织因子对人类大肠癌培养细胞侵袭能力的影响

目的：分析组织因子表达对人类大肠癌细胞(HT—29细胞)体外侵袭能力的影响。方法：利用构建有正义／反义组织因子cDNA(TF cDNA)的真核表达载体pcDNA3．1／Zeo，以脂质体法转染HT—29细胞，经验证转染成功的HT—29细胞采用Western印迹分析检测组织因子的蛋白表达水平并进行基质胶(Matrigel)侵袭实验观察细胞体外侵袭能力的变化。结果：转染了正义TFcDNA的HT—29细胞的组织因子表达水平及侵袭能力较未转染的HT—29细胞升高；转染了反义TFcDNA的HT—29细胞的组织因子表达水平及侵袭能力较未转染的HT—29细胞相比降低。结论：组织因子可以增加人类大肠癌细胞的体外侵袭能力。     

反义人类端粒酶 RNA逆转录病毒载体构建及其对结直肠癌细胞的抑制作用

目的 研究反义人类端粒酶RNA逆转录病毒载体对结直肠癌HT29细胞端粒酶活性及细胞生长的抑制作用。探讨以端粒酶为酸点的结直肠癌基因治疗的可能性。方法 将端粒酶hTR的cDNA反向插入逆转录病毒载体pLXRN中，转染包装细胞PT67后获得反义重组病毒，感染结直肠癌HT29细胞，采用RT-PCR检测hTR表达。端粒酶重复扩增法（telomerase repeat amplification protocol,TRAP)检测端粒酶活性，绘制生长曲线了解细胞生长状态，倒置显微镜观察和DNA片段电泳检测细胞凋亡。结果 反义hTR作用后的结直肠癌细胞hTR表达下降，端粒酶活性和细胞生长受到明显抑制，细胞出现凋亡。结论 反义hTR对结直肠癌HT29细胞的生长和端粒酶活性具有明显的抑制人舰艇可能以hTR为靶点对结直肠癌进行基因治疗。