外周血SEPT9基因甲基化检测在结直肠癌筛查及术后随访中的意义分析

目的探讨外周血SEPT9基因甲基化检测在结直肠癌筛查及随访中的应用。 方法回顾性分析2014年10月至2015年12月接受结直肠癌筛查人群共计783例,其中确诊结直肠癌患者72例,非结直肠癌患者711例。对所有纳入患者进行外周血SEPT9甲基化检测和病理检查。以病理诊断为金标准,采用ROC曲线分析SEPT9阳性对结直肠癌的诊断价值,术后随访1年,观察外周血SEPT9基因甲基化和患者生存情况的关系。应用SPSS 23.0软件进行统计学分析,性别、年龄段、病变位置、TNM分期等资料以[例(%)]表示,比较采用卡方检验,以P<0.05为差异有统计学意义。 结果结直肠癌患者SEPT9基因甲基化(70.8%)显著高于非结直肠癌患者(13.5%);SEPT9基因甲基化在TNM分期Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期及Ⅳ期结直肠癌患者的阳性率依次为：47.4%、 69.2%、 88.9%、 88.9%。ROC曲线分析显示,SEPT9的AUC＝0.787,高于CA125和CA199(P<0.05),其诊断结直肠癌的灵敏度为86.5%,特异度为70.8%。术后随访1年发现,88.2%的SEPT9基因甲基化阳性患者在结直肠癌根治术后转为阴性,与SEPT9甲基化转阴性的患者相比较,SEPT9甲基化未转为阴性的患者预后较差。 结论SEPT9基因甲基化检测可能作为评估结直肠癌风险和预后的一项重要检测指标。     

β-连环蛋白保护肝缺血再灌注损伤的机制研究

目的 应用特异性基因敲除小鼠模型研究β-连环蛋白(β-catenin)对小鼠肝缺血再灌注损伤的保护机制.方法 建立β-catenin基因敲除小鼠(实验组,6只)和野生型小鼠(对照组,6只)肝缺血再灌注模型,采用原位末端转移酶标记技术(TUNEL)法检测两组小鼠肝组织细胞凋亡;应用实时定量聚合酶链反应(PCR)技术测定两组小鼠再灌注后0、6h时的肝细胞白细胞介素-6(IL-6) mRNA及肿瘤坏死因子-α(TNF-α) mRNA表达水平.结果 肝脏缺血再灌注0h时,实验组肝细胞凋亡数、TNF-α mRNA、IL-6 mRNA与对照组间的差异均无统计学意义(P值均＞0.05).缺血再灌注6h时,实验组凋亡细胞数为(56±15)个/高倍视野,显著多于对照组的(27±8)个/高倍视野(P＜0.05);实验组TNF-α mRNA、IL-6 mRNA分别为2.5±0.3、7.8±2.6,均显著高于对照组的1.1±0.1、4.8±1.3,差异均有统计学意义(P值均＜0.05).结论 β-catenin可通过抗凋亡和抗炎作用对肝脏缺血再灌注引起的细胞损伤起保护作用.     

特异性敲除β-连环蛋白基因对小鼠肝缺血再灌注损伤的影响

目的 通过构建特异性敲除小鼠模型观察β-连环蛋白(β-catenin)基因在小鼠肝缺血再灌注损伤中的作用.方法 应用Cre-lox系统构建肝细胞特异性敲除β-catenin基因小鼠模型,90 min半肝血流阻断制造肝脏缺血再灌注小鼠模型,分为β-catenin基因敲除组及对照组,再灌注后0、3、6、20 h测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)及其肝脏组织学改变.结果 肝细胞特异性敲除β-catenin基因小鼠基因表型为:ctnnb纯合(loxP/loxP)并且Alb-Cre阳性表达,Western blot 方法证实其β-catenin蛋白表达丰度明显低于对照组.再灌注3、6、20 h敲除组小鼠血清ALT水平分别为282、405及128 U/ml;对照组分别为221、295及101 U/ml.敲除组AST水平分别为603、805及396 U/ml;对照组分别为421、398及336 U/ml,各时间点两组间差异均有统计学意义(P＜0.05).其肝细胞坏死、窦状隙充血以及炎细胞浸润程度明显重于对照组.结论 β-catenin对肝脏缺血再灌注引起的肝损伤起保护作用.

Abstract：

Objective To study the role of β-catenin in liver ischemia-reperfusion injury used a conditional knockout approach to delete p-catenin in the liver. Methods We adapted the Cre-lox recombination system to create the p-catenin conditional knockout (KO) mice and liver ischemia-reperfusion injury were made by 90min hemiliver blood supply block. Experimental animal were randomized into two groups:p-catenin conditional knockout group (KO group) and control group (C group). 0,3,6,20 h after reperfusion,serum samples were used for measurement of serum alanine transaminase ( ALT) and aspartate aminotransferase (AST) ,liver sections were subjected to hematoxylin-eosin staining. Results Genotyping identified that β-catenin KO mice showed ctnnb homozygosis ( - / - ) and Alb-Cre positive. Western blotting analysis showed an obviously lower expression of p-catenin in KO group. Three,6,20 h after reperfusion,KO group ALT level were 282,405 and 128 U/ml. C group were 221,295 and 101 U/ml. KO group AST level were 603,805 and 396 U/ml,C group were 421,398 and 336 U/ml. Hematoxylin and Eosin (HE)staining showed significant sinusoid inflation and congestion, extensive acidophilic necrosis, focal hemorrhages , hepatic lobula structure disorder and slightly lymphocyte inflammatory cells infiltration in KO group. In C group, HE staining show slightly sinusoid inflation and congestion, limited acidophilic necrosis and focal hemorrhages, hepatic lobula structure nearly integrity, slightly lymphocyte inflammatory cells infiltration.Conclusion β-catenin may play a protect role in liver ischemia-reperfusion injury.