人TERT基因启动子区生物信息学分析

目的：探讨人端粒酶逆转录酶基因启动子区的序列特征、转录因子及其结合位点。方法：从NCBI数据库中获取人TERT基因组序列及其启动子序列：利用EMBOSS 6.6.0、CpGfinder 1.0和MethPrimer 1.0软件预测启动子区CpG岛的位置;利用Patch 1.0和PROMO 3.0.2软件预测可与TERT基因结合的潜在转录因子及结合位点。结果：TERT基因定位于5q 13.33,基因序列全长共41 881bp,其启动子位于TERT基因5｀端上游2500bp处,全长2043bp。TERT基因启动子区可能存在２个CpG岛和118个转录因子。结论：通过生物信息学软件对hTERT基因启动子进行预测分析,可提高对hTERT基因启动子的研究效率,以便更加深入了解hTERT基因的调控机制及其生物学功能。     

跟骨骨折手术切口一期愈合的经验体会

目的 总结跟骨骨折手术切口一期愈合的经验体会.方法 2009年5月至2010年9月应用切开复位内固定治疗32例(36足)跟骨骨折患者,均为男性；年龄18～50岁,平均36.5岁.入院后即刻行手法复位石膏托外固定和脱水消肿.手术采用足外侧“L”形切口,于跟骨表面全层剥离软组织,显露跟骨外侧面,恢复跟骨的高度、宽度及距下后关节面平整,再用钢板螺丝钉内固定.结果 术后3周切口均获一期愈合.患者术后获6～12个月(平均9个月)随访,全部患者切口愈合平整,无切口感染、破溃及皮肤坏死等并发症发生.结论 选择合适手术时机,重视软组织保护和手术操作技巧,是确保切口一期愈合的重要因素.     

成熟成骨细胞中敲除基因fgfr1小鼠的制备

目的 制备在成熟成骨细胞中敲除基因fgfr1的特定细胞阶段性基因敲除小鼠.方法 从美国NIH引进SPF级fgfr1条件性基因敲除(fgfr1flox/flox)小鼠,进行饲养、繁殖和PCR鉴定;fgfr1flox/flox小鼠与在成熟成骨细胞表达Cre重组酶的OC-Cre小鼠交配,获得在成熟成骨细胞中敲除一个基因拷贝的杂合子小鼠;杂合子小鼠之间交配,或者杂合子小鼠与fgfr1flox/flox小鼠交配,可以获得在成熟成骨细胞中敲除fgfr1基因的小鼠fgfr1△/△/OC-CreTG/ .结果 成功制备在成熟成骨细胞中敲除fgfr1的细胞特异性敲除小鼠.结论 成功引进fgfr1flox/flox小鼠,应用合理的基因条件性敲除繁殖策略,获得在成熟成骨细胞中敲除fgfr1的基因敲除小鼠.     

高效稳定表达人缺氧诱导因子抑制因子肠上皮细胞株的建立

目的通过转染含有人FIH全长cDNA的质粒pcDNA3．1-V5．His-A-FIH，建立FIH高效表达的肠上皮细胞株。方法对pcDNA3．1-V5-His-A-FIH进行扩增、提取，用脂质体Lipofectamine 2000将pcDNA3．1-V5-His-A-FIH转入Caco-2细胞，经G418筛选并逐步传代，RT-PCR和Western blot法检测阳性细胞克隆FIH mRNA和蛋白表达。结果转染pcDNA3．1-V5-His-A-FIH后Caco-2细胞FIH mRNA是普通Caco-2细胞的1．98倍，而FIH蛋白含量是普通Caco-2细胞的1.70倍。结论成功建立了高效、稳定表达人FIH基因的肠上皮细胞株。     

新兵股骨疲劳性骨折诊断治疗与预防

疲劳性骨折是部队常见训练性损伤,如何早期诊断,正确治疗和有效预防是每一个基层军医要掌握的基本技能。现将我院2008-01～2011-03诊断治疗的46例股骨疲劳性骨折进行回顾性分析,总     

严重烧伤大鼠肝脏葡萄糖转运体1蛋白表达的实验研究

目的　探讨严重烧伤大鼠早期肝脏葡萄糖转运体 1(Glucosetransporter 1,GLUT 1)蛋白及其转录活性的变化和意义。方法　采用 3 0 %TBSAⅢ度烧伤大鼠模型 ,以正常大鼠为参照 ,WesternBlot法检测伤后 0 5、1、2、4、8、16h肝脏总蛋白中GLUT 1的表达 ;体外转染含有大鼠GLUT 1全长调控序列的报告基因构建体A ,2 4h后 ,1%氧浓度诱导表达 ,以 β 半乳糖苷酶为参照 ,分析报告基因表达强度的变化。结果　①与正常对照相比 ,严重烧伤后 1h大鼠肝脏Glut 1蛋白表达明显增加 (增加约 1 3 2倍 ) (P <0 0 5 ) ,在伤后 4～ 8h变化最为明显 ,约为正常对照的 2倍 (P <0 0 5 ) ,烧伤后 16h ,GLUT 1蛋白含量降低 (P <0 0 5 ) ;②构建体A转染 2 4h后 ,缺氧处理 3h ,报告基因的表达明显升高 ,增高约 3 19倍 (P <0 0 5 ) ,缺氧6h ,报告基因的表达增强 2 2 3倍 ,与 3h相比无明显差异 (P >0 0 5 )。本试验观察期内 ,缺氧处理 12h报告基因的表达强度最大 ,诱导表达倍数约 5 3 4倍 ,与缺氧 3、6h存在显著差异 (P <0 0 1)。结论　①严重烧伤以后 ,大鼠肝脏的GLUT 1蛋白含量增加。②缺氧诱导了大鼠GLUT 1基因 5′侧翼区全长序列介导的报告基因的表达     

经椎弓根及伤椎内固定治疗胸腰段椎体骨折体会

目的总结跨伤椎和经伤椎椎弓根置钉复位固定治疗胸腰椎骨折的临床效果。方法 2003年1月至2010年4月我们收治126例胸腰段椎体骨折,年龄23～61岁。采用后路减压椎管成形椎弓根内固定植骨融合术,跨伤椎固定97例,经伤椎置钉固定29例。结果所有伤椎椎体前缘高度与后缘高度（PVH）的比值由术前（0.34±0.11）增加到术后（0.84±0.10）;矢状位后凸Cobb角由术前（25.46±2.59）°减少至术后（12.12±1.23）°。跨椎体组伤椎椎体前缘高度与后缘高度的比值由术前（0.36±0.12）增加到术后（0.83±0.11）;矢状位后凸Cobb角由术前（25.40±2.50）°减少至术后（12.2±1.21）°。经伤椎组伤椎椎体前缘高度与后缘高度的比值由术前（0.345±0.11）增加到术后（0.882±0.12）,矢状位后凸Cobb角由术前（25.43±2.53）°减少至术后（10.17±1.21）°。两组间结果对比显示经伤椎组椎体高度恢复和矫正后凸畸形效果好于跨椎体组（P〈0.01）,末次随访显示跨椎体组矫正角度有所丢失。跨伤椎组发生断钉3例,松动2例,经伤椎椎弓根螺钉内固定组无松动,无断裂、断棒。结论椎弓根钉固定是治疗胸腰椎骨折的一种有效方法,经伤椎固定可以有效维持脊柱复位效果。     

构建FGFR3基因沉默慢病毒载体及其对ATDC5细胞增殖和分化的影响

目的 通过构建慢病毒介导的FGFR3 RNAi,观察FGFR3对小鼠前软骨细胞系ATDC5增殖和分化的影响.方法 针对FGFR3基因的有效靶序构建FGFR3RNAi慢病毒载体,并转染293T细胞进行病毒包装.用包装成功的慢病毒转染ATDC5细胞,Real-time PCR和Western blot检测ATDC5中FGFR3RNAi效率,细胞计数及MTT检测ATDC5的增殖变化,Real-time PCR检测ATDC5中软骨分化相关分子Ⅱ型胶原(collagenⅡ,ColⅡ)、X型胶原(collagen X,Col X)和基质金属蛋白酶-13(MMP-13)的表达与变化.结果 FGFR3RNAi慢病毒载体构建成功,并包装出相应的慢病毒,滴度为5×108TU/mL.FGFR3RNAi慢病毒转染ATDC5后FGFR3 mRNA水平分别较空白组和阴性对照(NC)组下降了65.2％和68.8％ (P ＜0.01).Western blot结果显示,与空白组和NC组相比,FGFR3RNAi组FGFR3蛋白水平显著降低(P＜0.01).细胞计数及MTT检测结果显示,FGFR3RNAi组细胞增殖能力较空白组和NC组增强(P ＜0.05,P＜0.01).Real-time PCR 结果显示,经向软骨诱导分化后,FGFR3RNAi组细胞中ColⅡ、Col X和MMP-13的表达水平较空白组和NC组显著增加(P＜0.01).结论 成功包装的FGFR3RNAi慢病毒能有效降低ATDC5细胞中FGFR3基因的表达.FGFR3表达水平降低后对ATDC5细胞增殖和分化的抑制作用明显减弱.     

内毒素血症小鼠骨骼Toll样受体4基因的变化

目的 通过检测内毒素血症模型动物骨骼相关基因表达变化,进一步明确内毒素对机体的损害机制,为下一步研究骨骼变化对脏器产生何种影响奠定基础.方法 腹腔注射内毒素脂多糖(LPS)制作内毒素血症小鼠模型.将48只小鼠随机分为正常组和LPS处理4、6、8、12、24、48和72 h组,每组6只.采尾血计数全血白细胞;取眼眶血检测肝、肾功能;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测骨骼中TLR4 mRNA表达;苏木素-伊红(HE)染色,镜下观察骨骼病理学变化.结果 与正常组比较,LPS 4 h组白细胞计数显著下降(P＜0.01),之后逐渐升高,于72 h时显著高于正常组(P＜0.05);LPS 4 h和6 h组丙氨酸转氨酶(ALT)水平显著升高(P均＜0.05),于8 h降至正常水平(P＞0.05);LPS 6 h组血尿素氮(BUN)水平逐渐升高(P＜0.05),于8 h达峰值(P＜0.05),然后下降,12 h趋于正常(P＞0.05);LPS 6 h组TLR4 mRNA表达增加(P＜0.01),24 h达峰值(P＜0.01),然后逐渐下降,72 h仍处在较高水平(P＜0.05).LPS作用于骨骼后,HE染色显示骨骼无明显改变.结论 内毒素血症中骨骼TLR4 mRNA表达量显著增加.     

脓毒症模型大鼠循环内皮细胞与肝功能状态间关系的相关性研究

目的 探讨大鼠脓毒症中循环内皮细胞(circulating endothelial cells, CEC)数量的变化及其与肝功能改变的关系.方法 利用盲肠结扎穿孔模型(CLP)在大鼠制作脓毒症模型.观察CEC数量、白细胞数量的变化、以及肝组织病理组织学、血天冬氨酸转氨酶(AST)和丙氨酸转氨酶(ALT)的改变.并探讨CEC数量与AST和ALT的相关关系.结果 CLP 6 h后动物肝细胞明显肿胀,24 h组肝细胞大量空泡变性,乃至坏死.CLP 3 h组白细胞和CEC数量比对照组明显升高.而CLP 6 h后AST、ALT才出现明显增高.CEC数量与AST和ALT水平呈负相关,Pearson相关系数(r)分别为-0.774 和-0.734(P＜0.01).用非线性回归分析CEC数量与AST和ALT的关系,发现CEC数量对ALT的最佳拟合曲线为幂函数(P＜0.05),其方程为ALT=33.052 681 24.097 309 CEC -1.CEC数量对AST的最佳拟合曲线为对数函数,但无统计学意义(P=0.607).结论 在大鼠脓毒症模型中,比起常规肝功能指标,CEC数量更能敏感反映肝脏病理进程.当肝功能指标高于正常阈值时肝细胞已经出现了显著损伤.因此,早期监测CEC数量结合已有的肝功能指标有助于早期提示肝功能损害,及时针对治疗.