酶法测定血清钙的方法学评价

目的:对脲酰胺酶(urea amidolyase)法测定血清钙进行方法学评价,探讨脂血.溶血等对其测定的干扰影响.方法:用脲酰胺酶法测定血清钙,按NCCLS评价方案系统评价其重复性、回收率、线性范围和脂血、黄疸、溶血、NH4 和Mg2 对血清钙测定的干扰影响,并与偶氮胂Ⅲ(Arsenazo Ⅲ)法测定血清钙相关性进行分析.结果:脲酰胺酶法与偶氮胂Ⅲ法有良好的相关性(y=1.046x 0.096,r=0.972,P=0.000);脲酰胺酶法测定血清钙浓度在0.5～4.5mmol/L性良好(r=0.997),检测低限为0.19mmol/L,批内变异为2.02%,日间变异为2.87%,回收率为98.9%;胆红素340μmol/L、血红蛋白500g/L.TG7.0mmol/L.NH4 2.5mmol/L、Mg2 3.5mmol/L无明显干扰.结论:脲酰胺酶法测定血清钙具有线性范围宽、抗干扰能力强、准确性高等特点,值得推广应用.     

强直性脊柱炎患者血清Dkk-1的检测及其临床意义

目的:探讨血清中骨形成抑制因子Dkk-l的表达水平在强直性脊柱炎(AS)中的应用价值。方法:应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测应用抗肿瘤坏死因子(TNF)-α类制剂治疗3个月以上以及未用任何抗TNF-α类制剂的疾病活跃期AS患者的血清Dkk-1表达水平。同时对比检测8例未用该剂治疗的疾病活跃期类风湿性关节炎(RA)患者和20例健康对照个体血清Dkk-1的水平。AS患者的病情活跃程度采用AS疾病活动指数(BASDAI)进行评估,RA患者的病情活跃程度采用疾病活动评分(DAS28)进行评估。所有研究对象均测定炎性指标血沉(ESR)和C反应蛋白(CRP)水平。结果:未用药AS患者血清中Dkk-l水平显著低于RA患者和健康对照组(均P<0.01)。AS患者血清Dkk-l水平与BASDAI、ESR和CRP均无明显相关性。使用该剂治疗的AS患者血清Dkk-l水平显著高于未治疗的AS患者(P<0.01)。结论:AS患者血循环中Dkk-1的水平降低,血清Dkk-1的水平与炎症活跃程度无关。抗TNF-α类制剂可诱导AS患者血清Dkk-1的表达。     

甲状旁腺激素对大鼠成骨细胞增殖分化的影响

目的 探讨甲状旁腺激素(parathyroid hormone,PTH)对大鼠成骨细胞增殖及相关细胞因子的调节作用.方法 将传代的成骨细胞分为对照组、PTH持续给药组、PTH间歇给药组.持续给药组48 h中持续给药;PTH间歇给药组前6 h给予PTH,后42 h撤除;对照组予溶媒液.每48 h为一循环,持续作用8个循环,每个循环结束时,MTT法测定细胞增殖,检测碱性磷酸酶(ALP)活性,实时荧光定量PCR法(RT-PCR)测定胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、骨形态发生蛋白-2(BMP-2)的表达水平.结果 间歇给药组细胞增殖在第7、8个循环时明显增加;而持续给药组在第5个循环时达到峰值,随后逐渐低于其他两组,在第7、8个循环时抑制作用明显.1～4个循环时3组间ALP活性差异无统计学意义,第5～8个循环ALP活性显著增加;持续给药组第6～8个循环对ALP活性有明显抑制作用.间歇给药组细胞IGF-1 mRNA的表达在第6个循环时达到高峰后有所下降,但始终明显高于其他两组;持续给药组前期IGF-1 mRNA表达水平较高,而后期则明显低于对照组.间歇给药组BMP-2 mRNA表达水平持续升高;持续给药组前3个循环表达水平较高,随给药时间的增长呈下降趋势.结论 间歇给予一定浓度的PTH可刺激成骨细胞的增殖与分化,后期作用大于前期.给药前期的ALP水平主要与IGF-1 mRNA表达水平相关,而后期则可能是通过BMP-2 mRNA表达的升高使ALP活性增强.     

持续给予hPTH1-34对体外成骨细胞增殖与分化的影响

目的研究持续给予人甲状旁腺激素（human parathyroid hormone,hPTH）1-34对体外培养成骨细胞增殖与分化的干预作用。方法体外培养乳鼠成骨细胞,将细胞分为空白培养液对照组和10^-6、10^-7、10^-8mol·L^-1hPTH（1-34）3个不同剂量的给药组。每48h换1次液,换液时采用MTT法进行细胞增殖测定,同时检测细胞裂解液中的碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）和骨钙素（bone gla protein,BGP）的水平,持续培养6d。结果持续给予hPTH1-34作用48h后,各给药组的MTT均明显高于对照组且各给药组间差异均有显著性（P〈0.05）,至第6天时各给药组则均明显低于对照组（P〈0.05）。ALP和BGP测定结果显示持续给予hPTH1-34作用48h后,10^-6mol·L^-1PTH给药组的BGP含量明显高于对照组（P〈0.01）,其余各组ALP及BGP含量与对照组比较差异虽无显著性,但均值高于对照组,至第6天各给药组均明显低于对照组（P〈0.05）。结论持续给予hPTH（1-34）对体外培养成骨细胞增殖与分化的影响与作用的时间和给药浓度密切相关。短期持续用药有促进作用,并且在10^-6-10^-8mol·L^-1浓度范围内呈剂量依赖性;长期持续用药抑制成骨细胞的增殖与分化,给药浓度越高抑制作用越强。