SFRP2与Periostin的相互作用在瘢痕疙瘩形成机制中的研究

目的利用pull-down技术验证凋亡相关蛋白基因SFRP2（Secreted frizzled-related protein 2）和骨母细胞特异性因子-2 Periostin（Osteoblast-specific factor2）间的相互作用。方法构建能在哺乳动物细胞中表达带HA标签的Periostin融合蛋白（HA—Periostin）的重组载体pCMV—HA—Periostin,经酶切鉴定正确后,和表达带Myc标签的融合蛋白（Myc—SFRP2）的重组真核表达载体pCMV—HA—SFRP2,单独或共转染人293细胞,利用pull-down技术验证Periostin与SFRP2间的相互作用。结果成功构建重组载体pCMV—HA-Periostin．与抗Myc单克隆抗体沉淀Myc—SFRP2相互作用蛋白复合物后,可以检测到HA—PeMostin的表达。通过体外蛋白质结合实验证实了Periostin与SFRP2间的相互作用。结论成功构建带HA标签的Periostin融合蛋白（HA-Periostin）的重组载体,利用pull—down技术证实了Periostin与SFRP2间的存在相互作用。     

SFRP2基因重组腺病毒载体的构建与鉴定

目的:成功构建携带SFRP2基因的腺病毒载体。方法:从pGBKT-SFRP2质粒中扩增SFRP2基因,将SFRP2基因亚克隆至质粒穿梭载体pAd-Track-CMV。用脂质体转染法将重组腺病毒pAd-Track-PPARγ2-CMV和pAdEasy-1共转染293细胞,成功构建的重组腺病毒Ad-SFRP2,确定转染效率。原代培养增生性瘢痕成纤维细胞,利用Ad-SFRP2感染该细胞。通过RT-PCR和Western Blot分别检测感染后人瘢痕成纤维细胞及对照组细胞中SFRP2基因mRNA和蛋白表达水平。结果:RT-PCR检测结果显示腺病毒Ad-SFRP2的PCR产物约为904bp,SFRP2 mRNA表达水平明显增高;用抗SFRP2多克隆抗体进行Westernblot检测为阳性,感染的重组腺病毒载体在人瘢痕成纤维细胞中SFRP2蛋白有较高的稳定表达。结论:成功构建含有人SFRP2基因的重组腺病毒Ad-SFRP2;它可有效提高人增生性瘢痕成纤维细胞中SFRP2基因的表达水平。     

军人患胆碱能性红斑1例

Murphy等1983年曾报道过4例持久性胆碱能性红斑。张汝芝等2002年报道1例，并认为采用“胆碱能性红斑”命名比“持久性胆碱能性红斑”更确切。作者科室曾发现一名来自基层部队的典型胆碱能性红斑患者，现报告如下。     

瘢痕疙瘩分泌性卷曲相关蛋白2与骨母细胞特异性因子2的相互作用

目的 验证分泌性卷曲相关蛋白2(SFRP2)与骨母细胞特异性因子2(OSF-2)的相互作用.方法 构建能在哺乳动物细胞中表达带人膜联蛋白(HA)标签的OSF-2融合蛋白重组载体pCMV-HA-OSF-2,经酶切鉴定确认后,与Myc-SFRP2重组真核表达载体pCMV-HA-SFRP2单独或共转染人HK293细胞,利用免疫共沉淀技术及蛋白质印迹法验证OSF-2与SFRP2的相互作用.结果 重组载体经酶切电泳后,显示近800 bp处的条带为酶切后的目的 片段SFRP2编码基因,近2500 bp处的条带为酶切后目的 基因OSF-2.表明pCMV-Myc-SFRP2和pCMV-HA-OSF-2均构建成功.HK293细胞单独转染pCMV-Myc-SFRP2或pCMV-HA-OSF-2后,未检测到HA-OSF-2的表达;当pCMV-Myc-SFRP2和pCMV-HA-OSF-2共转染后,经Myc抗体进行免疫沉淀可见HA-OSF-2表达.结论 HA-OSF-2的重组载体能在哺乳动物细胞中表达,HA-OSF-2与SFRP2间存在相互作用.     

分泌型凋亡相关蛋白1调控成纤维细胞凋亡的研究

目的探讨分泌型凋亡相关蛋白1（secretedapoptosis-relatedprotein1,SARP1）调控增生性瘢痕患者的成纤维细胞（fibroblast,FB）凋亡的作用。方法构建SARP1腺病毒载体（Ad-sARPl）．感染瘢痕患者的皮肤FB,促进其表达SARP1蛋白,观察其蛋白表达后人FB增殖与凋亡的变化,明确SARP1蛋白对FB的调控作用,并通过转移酶介导的三磷酸脱氧鸟苷-生物素刻痕末端标记（TuNEL）方法、流式细胞仪（FACs）分析细胞增殖与凋亡动态变化。结果成功构建Ad-SARP1,并能够感染人FB,通过逆转录一聚合酶链式反应（RT-PCR）检测到SARP1的mRNA值明显增加,Western印迹方法检测SARP1蛋白表达明显增多（P〈0．05）;其蛋白表达后四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）法检测,与带荧光的腺病毒空载体（Ad-EGFP）及对照组相比,Ad-SARP1感染的FB增殖活力均显著增高;TUNEL检测Ad-SARP1感染FB前后细胞凋亡结果显示,细胞凋亡明显受到抑制,凋亡阳性细胞变少,接近瘢痕成纤维细胞（HSFB）凋亡;FACS分析表明,感染组FB的细胞凋亡指数与对照组相比明显下降（P〈0．01）。结论sARP1参与调控增生性瘢痕患者的FB功能,抑制细胞凋亡,促进细胞增殖加快。