脐血CD34+细胞体外诱导肝样细胞的研究

目的 探讨通过细胞因子及其组合体外诱导脐血CD34^＋细胞转分化成肝样细胞的效果。方法 采用密度梯度离心法分离脐血单个核细胞（mononuclear cell，MNC），从MNC中获得富集CD34^＋细胞。选用人白血病抑制因子、制瘤素M、bFGF、aFGF、肝细胞生长因子、EGF及干细胞生长因子7种细胞因子，浓度分别为10、10、10、10、20、20和50ng／mL，设计了49种细胞因子组合，分别采用这些细胞因子组合体外培养脐血CD34^＋细胞，培养周期为28d。以新鲜脐血CD34^＋细胞作为对照。每7天检测诱导后细胞中细胞角蛋白19（cytokemtin19，CK-19）、CK-18、谷氨酰胺合成酶（glutamme synthetase，GS）、人血清白蛋白（albumin，ALB）以及甲胎蛋白（a-fetoprotem，AFP）的mRNA转录情况，并应用免疫荧光法、过碘酸-雪夫（periodic acid-schiff，PAS）染色与吲哚菁绿（indocyanine green，ICG）染色法检测细胞分泌ALB、合成糖原以及解毒能力，以此判断是否存在脐血CD34^＋细胞体外向肝样细胞的转分化。结果 在经细胞因子诱导后的CD34^＋细胞中均可检测到人肝细胞所能表达的CK-19、CK-18和GS的mRNA条带，未能检测出肝细胞特征性的ALB与AFP的mRNA条带；而新鲜脐血CD34^＋细胞中以上5种蛋白的mRNA均未能检出。免疫荧光染色观察示诱导前后的细胞中均未能检测到ALB的表达，且均不能有效吞噬ICG染料。PAS反应检测结果显示，经细胞因子诱导后的细胞紫红色糖原沉积区域较新鲜脐血CD34^＋细胞增大，出现紫红色区域的细胞增多。结论 脐血CD34^＋细胞体外经细胞因子组合诱导后，虽有肝细胞相关蛋白mRNA表达，但未能转分化为肝样细胞。