人大隐静脉平滑肌细胞体外培养及其生长特性分析

目的：探讨人血管平滑肌细胞（VSMC）体外培养方法及其生长的特性。 方法：采用组织块贴壁结合酶消化法培养人大隐静脉VSMC并传代,以形态学观察、免疫荧光染色法、考马斯亮蓝染色法鉴定细胞;以台盼蓝染色法、四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法、绘制生长曲线、划痕法测定细胞成活率、增殖及迁移能力。 结果：原代培养5~7 d细胞从组织块爬出,传代细胞呈“峰-谷”样生长;胞质内α-平滑肌肌动蛋白免疫荧光染色阳性;考马斯亮蓝染色可见VSMC细胞骨架呈致密束状;传代细胞成活率为97%;生长曲线呈类“S”形;细胞生长3~6 d内光密度值变化明显;无血清培养的VSMC在24 h内划痕宽度变化显著。 结论：体外培养的VSMC纯度高,结构、功能良好,为收缩表型,细胞生长第3~6天增殖活力较强,24 h内迁移能力最强。     

新基因nelin在下肢曲张静脉中的表达及其意义

目的：从基因的转录和翻译水平探讨nelin在下肢曲张静脉中的表达及意义。方法：分别利用RT-PCR技术以及免疫组织化学技术比较静脉曲张患者（实验组）以及正常人（对照组）之间大隐静脉血管组织中nelin基因及其蛋白的表达水平。结果：实验组的病变静脉组织中,nelin的表达低于对照组。RT-PCR显示,实验组与对照组目的条带亮度不同,对照组较实验组亮;免疫组织化学显示,对照组中nelin蛋白大量分布于正常静脉管壁血管平滑肌细胞的胞质,呈棕黄色,平均阳性细胞百分比为（80.67±10.20）%;而实验组中染色较弱,呈浅黄色,平均阳性细胞百分比为（18.39±7.78）%,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论：与正常人相比,原发性下肢静脉曲张患者的病变静脉组织中nelin基因在转录和翻译水平均存在明显的表达下调,这可能与病变静脉组织的形态学改变有一定的关系。     

SM22α和α-SMA在静脉曲张组织中的表达及其意义

目的 探讨下肢静脉曲张中平滑肌22α (smooth muscle 22 alpha,SM22α)及α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达与下肢静脉曲张的关系.方法 收集下肢静脉曲张患者的曲张大隐静脉组织作为实验组,另收集冠脉搭桥术患者正常下肢大隐静脉组织为对照组.RT-PCR方法检测标本中SM22α mRNA的表达水平,免疫组织化学法检测标本中SM22α及α-SMA的表达.结果 SM22α mRNA表达量在实验组和正常对照组中分别为0.2614±0.1168和0.5114±0.1554,差异有统计学意义(t=5.020,P＜0.01).免疫组化示:SM22α和α-SMA均表达于血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)胞质中.SM22α阳性蛋白累计吸光度(integrate optical density,IOD)值在实验组和对照组分别为10 055±3584和16226±3378,差异有统计学意义(t=4.991,P＜0.01),与PCR结果一致.α-SMA阳性蛋白IOD值在实验组和对照组分别为9746±3903和15 371±4318,两组比较差异有统计学意义(t=3.861,P＜0.05).结论 SM22α和α-SMA在曲张静脉中低表达表明曲张静脉发生了VSMC由收缩型向合成型的表型转换,进而导致静脉管壁的重塑和静脉曲张的发生.     

下肢静脉曲张患者外周血Nelin水平测定及意义

目的 探讨下肢静脉曲张患者与正常人外周血中Nelin表达水平的差异及其意义。方法 选取下肢静脉曲张患者57例为对照组,健康查体者60例为正常组,利用RT-PCR技术检测外周血单个核细胞中Nelin mRNA的表达水平,利用生物素双抗体夹心ELISA技术测定外周血血清中Nelin蛋白的表达水平。结果 RT-PCR结果显示,Nelin在对照组与正常组的相对表达量分别是 0.226±0.070、0.718±0.114,两组差异有统计学意义(t=9.028,P<0.01);ELISA结果显示,96例血清中均可检测到Nelin蛋白的表达,对照组和正常组的表达量分别是(2.61±1.73)ng/mL、(3.64±1.65)ng/mL,两组差异有统计学意义(t=2.92,P<0.01)。结论 与正常人相比,下肢静脉曲张患者Nelin基因在转录和翻译水平均存在明显的表达下调,提示Nelin基因的表达可能与下肢静脉曲张发生发展有一定的关系。