脑胶质瘤p16基因转染对细胞生长及放射敏感性的影响

目的　探索p16基因在脑胶质瘤发生发展过程中的作用及p16基因与肿瘤细胞放射敏感性间的关系。方法　将外源野生型p16基因导入胶质瘤细胞株U251、C6,筛选阳性克隆。同时以空载体质粒pCDNA3为对照,免疫组化检测p16基因表达,用MTT法测定细胞生长曲线及肿瘤杀伤率。结果　转染p16基因的U251、C6细胞有外源p16基因的整合及表达,克隆形成率减少,生长速度明显减慢,对辐射的敏感性增强。结论　导入外源野生型p16基因可抑制胶质瘤细胞恶性增殖,提高胶质瘤细胞对辐射的敏感性。     

p16基因的不同转染方法对脑胶质瘤细胞的不同作用

目的：探讨Ｐ１６基因在脑胶质瘤发生发展过程中的作用。方法：分别采用脂质体、磷酸钙＋ＤＭＳＯ休克转染的方法,观察外源野生型Ｐ１６基因短暂转染与长期稳定转染对人胶质瘤细胞系Ｕ２５１、ＳＷＯ的作用,并筛选阳性克隆。同时以空载体质粒ＰＣＤＮＡ３为对象。免疫组化、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交检测Ｐ１６基因表达,对转染后细胞生长、细胞周期及细胞凋亡的变化进行分析。结果：Ｐ１６基因短暂转染有明显的凋亡诱导作用;而Ｐ１６     

中西医结合综合康复疗法治疗持续性植物状态的疗效观察

目的探讨中西医结合综合康复疗法对持续性植物状态患者的治疗作用.方法选择符合持续性植物状态诊断标准的患者19例,进行催醒中药、脑循环代谢改善药、高压氧、电刺激等综合治疗.结果19例患者中基本痊愈4例(21.1%),明显好转5例(26.3%),好转8例(42.1%),总有效率为89.5%.结论持续性植物状态患者采用中西医结合综合康复疗法治疗可取得显著疗效.     

p16基因对脑胶质瘤细胞生长及放射敏感性的影响

目的探索p16基因在脑胶质瘤发生发展过程中的作用及p16基因与肿瘤细胞放射敏感性间的关系.方法将外源野生型p16基因导入胶质瘤细胞株U251、C6,筛选阳性克隆.同时以空载体质粒为对照,免疫组化检测p16基因表达,用MTT法测定细胞生长曲线及肿瘤杀伤率.结果转染p16基因的U251、C6细胞有外源p16基因的整合及表达,克隆形成率减少,生长速度明显减慢,对辐射的敏感性增强.结论导入外源野生型p16基因可抑制胶质瘤细胞恶性增殖,提高胶质瘤细胞对辐射的敏感性.     

高温对血脑屏障内皮细胞紧密连接的作用及其机制

目的　探讨高温对血脑屏障内皮细胞间紧密连接的影响及其分子机制。　方法　利用内皮细胞与胶质细胞共培养建立体外血脑屏障模型。采用Millicell-ERS系统检测血脑屏障模型的跨内皮阻抗 (transendothelialresistance,TER)。对内皮细胞间紧密连接采用银染的方法研究其结构的完整性。运用半定量逆转录 -聚合酶链式反应 (RT -PCR)及Westernblotting的方法分析高温作用后血脑屏障内皮细胞紧密连接蛋白 (zonulaoccluden 1,ZO - 1)与occludin的表达变化。　结果　 4 3℃高温作用 2h后 ,体外血脑屏障模型TER均值由 (32 1.30± 5 8.5 9)Ω·cm2 下降至 (6 5 .6 7± 6 .0 2 )Ω·cm2 。同时 ,内皮细胞紧密连接完整性明显破坏 ,内皮细胞ZO - 1及occludin的表达水平明显降低。　结论　高温可以明显破坏血脑屏障内皮细胞间紧密连接的完整性 ,高温条件下内皮细胞ZO - 1与occludin表达水平的降低是血脑屏障热损伤的重要分子机制。     

成年大鼠纹状体神经干细胞的体外培养及分化

目的 探讨成年大鼠纹状体神经干细胞多向分化的可能性。方法 分离成年大鼠纹状体神经干细胞,单克隆连续传代培养并诱导分化,将分化产物进行免疫细胞化学染色及RT-PCR检测分析。结果 无血清单克隆培养时期可见大量的细胞团出现,以血清诱导分化后出现多种细胞类型,免疫细胞染色发现分化细胞中有Nestin阳性、NSE阳性、GFAP阳性细胞,RT-PCR法分析mRNA水平有脑因子-1、γ-氨基丁酸α-受体γ-亚单位、酪氨酸羟化酶及色氨酸羟化酶等基因的表达。结论 成年大鼠纹状体内分离出的干细胞样细胞具有自我增殖和多向分化潜能。     

血管内皮细胞生长因子介导的免疫毒素抗胶质瘤的体外实验研究

目的 构建血管内皮细胞生长因子(VEGF)基因和铜绿假单胞菌外毒素衍生物(PE38)基因的真核融合表达载体,并研究其表达产物对U251细胞的影响.方法 通过PCR获得本实验需要的VEGF165基因片段,通过酶切pRB391质粒获得铜绿假单胞菌外毒素衍生物PE38基因,再通过适当的酶切及连接反应,构建VEGF165与PE38融合基因的真核表达载体pIREs2-VEGF165-PE38-EGFP,经酶切及DNA测序证实构建成功后,用Lipofectamine2000脂质体转染293细胞,然后用RT-PCR及Elisa法检测VEGF165-PE38融合蛋白在293细胞的表达,并利用转染细胞后的培养上清体外测定VEGF165-PE38融合蛋白对U251的选择性细胞毒作用.结果 酶切分析及DNA测序证实,VEGF165-PE38融合基因被成功克隆入真核表达质粒载体pIRES2-EGFP,RT-PCR及Elisa法检测证实重组基因可在293细胞表达.细胞转染上清对U251具有较强的细胞抑制效应.结论 VEGF165-PE38融合基因构建,表达及其功能的初步研究,为进一步研究其对胶质瘤的靶向毒性及临床应用奠定基础.     

脑胶质瘤p16基因转染对细胞生长及放射敏感性的影响

探索ｐ１７基因在脑胶质瘤发生发展过程中的作用及ｐ１６基因与肿瘤细胞放射敏感性间的关系。方法将外源野生型ｐ１６基因导入胶质瘤细胞珠Ｕ２５１、Ｃ６，筛选阳性克 时以空载体质粒ｐＣＤＮＡ３为对照，免疫组化检测ｐ１６基因表达，用ＭＴＴ法测定细胞生长曲线及肿瘤杀伤率。结果转染Ｐ１６基因的Ｕ２５１、Ｃ６细胞有外源Ｐ２１６基因的整合及表达，克隆形成率减少，生长速度明显减慢，对辐射的敏感性增强。结论导入外源野生型     

成年大鼠纹状体神经干细胞的体外培养及分化

目的 探讨成年大鼠纹状体神经干细胞多向分化的可能性。方法 分离成年大鼠纹状体神经干细胞，单克隆连续传代培养并诱导分化，将分化产物进行免疫细胞化学染色及RT-PCR检测分析。结果 无血清单克隆培养时期可见大量的细胞团出现，以血清诱导分化后出现多种细胞类型，免疫细胞染色发现分化细胞中有Nestin阳性、NSE阳性、GFAP阳性细胞，RT—PCR法分析mRNA水平有脑因子-1、γ-氨基丁酸α-受体γ-亚单位、酪氨酸羟化酶及色氨酸羟化酶等基因的表达。结论 成年大鼠纹状体内分离出的干细胞样细胞具有自我增殖和多向分化潜能。