输注分子嵌合小鼠前体T细胞抑制异源小鼠T细胞增殖反应的研究

目的 研究分子嵌合前体T细胞（pre-T细胞）对异基因T淋巴细胞增殖能力的影响,旨在为研究同种异体器官移植诱导免疫耐受提供新策略.方法 RT-PCR获取C57BL/6小鼠MHC-Ⅰ等位基因H-2Kb和H-2Db基因,并与pIRES质粒连接,构建重组质粒并转染体外培养BALB/c小鼠pre-T细胞构建分子嵌合细胞,并设立未转染及转染空质粒对照组.各组细胞回输BALB/c小鼠,7d后提取各组小鼠脾脏T细胞,将其与C57BL/6小鼠T淋巴细胞混合培养,观察刺激指数（SI）.结果 构建质粒测序表明,插入序列的结果包含GenBank检索的C57BL/6小鼠H-2Kb和H-2Db序列,流式细胞仪检测质粒pIRES-H-2Kb和pIRES-H-2Db转染后,pre-T细胞表面H-2Kb及H-2Db蛋白的表达增高,与未转染组及转染空质粒组相比,其差异均具有统计学意义（P＜0.05）.单向混合淋巴细胞培养结果显示：2质粒共注射pre-T细胞组的SI值（0.764±0.074）较空质粒组（0.983±0.081）和未转染组（0.994±0.142）明显下降,其差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 分子嵌合细胞可降低受体T细胞对异基因T淋巴细胞刺激的增殖反应,有望应用于体内诱导免疫耐受.     

Her-2/neu表达对无淋巴结转移早期胃癌患者预后的影响

目的：探讨Her-2/neu表达及临床病理特征对无淋巴结转移的早期胃癌患者预后的影响。 方法：收集70例有完整随访记录和病理组织蜡块保存完整的无淋巴结转移的早期胃癌根治手术切除患者资料,采用免疫组化法检测病理组织切片Her-2/neu表达情况,分析Her-2/neu表达及临床病理因素与患者预后的关系。 结果：全组Her-2/neu阳性表达率为25.0%,Her-2/neu表达与患者的性别、年龄、肿瘤大小、分化类型及浸润深度均无明显关系（均P>0.05）。全组5年生存率为87.8%。单因素分析显示,患者性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤浸润深度及分化程度对患者生存状况无明显影响（均P>0.05）。Her-2/neu表达阳性患者的5年生存率72.0%,阴性患者为93.0%,差异有统计学意义（P<0.05）。多因素回归分析显示,Her-2/neu的表达为影响预后的危险因素（OR=5.036,P=0.035）。 结论：Her-2/neu的表达是影响无淋巴结转移早期胃癌患者预后的危险因素,并对早期胃癌的临床治疗有一定指导意义。     

机器人下近端胃切除后双通道吻合的初步临床效果分析

目的探讨机器人下近端胃切除后双通道吻合的临床效果。方法采用描述性系列研究方法, 回顾性纳入2020年4月至2021年12月期间于天津医科大学总医院胃肠外科因食管胃结合部癌进行机器人近端胃切除术+双通道吻合的5例患者的临床资料, 其中男性4例, 女性1例;年龄(67.2±4.5)岁, 体质指数(22.8±2.8)kg/m2, 美国麻醉医师协会分级Ⅱ级4例, Ⅲ级1例;Siewert分型Ⅱ型3例, Ⅲ型2例。总结术中术后情况, 并在术后1年进行上消化道造影检查和胃镜检查, 采用欧州癌症研究与治疗组织(EORTC)QLQ-STO22生命质量测定量表评估生活质量。结果 5例患者均顺利完成手术, 中位出血量为50(50, 125)ml, 手术时间(278.0±30.6)min, 术后住院天数(12.2±3.4)d。1例患者出现术后少量胸腹腔积液, 为Clavien-Dindo分级Ⅲ级以下并发症;且均未出现吻合口漏、吻合口出血以及吻合口狭窄等吻合口相关并发症, 未出现发热、腹腔出血、胃瘫及与进食有关的反流、疼痛等并发症。术后1年的双通道造影检查显示, 所有患者造影剂均可顺利通过食管空肠吻合口;食管...     

激动性CD40抗体通过调节Th1/Th2平衡增强抗肿瘤作用的机制研究

  目的  探讨激动性CD40抗体中单链抗体（CD40ScFv）和单克隆抗体（CD40mAb）抑制小鼠乳腺癌细胞生长情况及对癌组织中Th1和Th2平衡的改变，分析通过调节Th1/Th2平衡达到抗肿瘤作用的机制。  方法  将含CD40ScFv基因片段的重组质粒转化至Rosetta大肠杆菌中，诱导表达并经纯化后获得有功能的CD40ScFv蛋白，行SDS-PAGE和Western blot检测。体外培养小鼠乳腺癌4T1细胞，在Balb/C小鼠皮下成瘤建立模型，分为CD40ScFv组、CD40mAb组和生理盐水组（NS组），分别给予CD40ScFv、CD40mAb和生理盐水，观察各组小鼠肿瘤体积的变化。取出瘤体组织，ELISA法检测肿瘤组织上清中IL-12的浓度。提取肿瘤组织浸润淋巴细胞（TILs），应用流式细胞技术检测TILs中Th1与Th2的比例。  结果  诱导表达的CD40ScFv鉴定表达成功，分子大小约为27 KDa，蛋白纯化后经BCA测定浓度为1.12 mg/mL。CD40ScFv组与CD40mAb组肿瘤大小分别为（3.044±0.239）cm3与（2.749±0.261）cm 3，均小于NS组的（3.933±0.326）cm3，差异具有统计学意义（P <0.05）。CD40ScFv组、CD40mAb组肿瘤组织中IL-12浓度分别为（396.27±48.13）pg/mL、（457.63±58.37）pg/mL，均显著高于NS组的（79.51±14.97）pg/mL，差异具有统计学意义（P <0.05）。CD40ScFv组与CD40mAb组的Th1/Th2细胞比值分别为6.32±0.87与5.54±0.71，均显著高于NS组的1.79±0.38，差异具有统计学意义（P < 0.05）。  结论  激动性CD40抗体在体内通过调节Th1与Th2的比例，发挥抑制肿瘤生长的作用，其中通过促进DC活化后分泌IL-12是影响肿瘤微环境中Th1/Th2平衡的重要机制之一。      

长链非编码RNA肿瘤蛋白翻译控制反义RNA 1对结肠癌细胞增殖和侵袭能力的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)肿瘤蛋白翻译控制反义RNA 1(TPT1-AS1)在结肠癌组织中的表达和临床意义,及其对结肠癌细胞增殖、细胞周期、迁移和侵袭的影响。方法收集2016年7月至2017年9月于天津医科大学总医院胃肠外科进行结肠癌根治术的72例结肠癌患者的癌组织标本及相应的癌旁组织,采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测lncRNA TPT1-AS1在结肠癌组织的相对表达量,并分析其表达与结肠癌临床病理特征的相关性。构建lncRNA TPT1-AS1敲低和对照载体(si-TPT1-AS1、si-NC),分别设为敲低组和对照组,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)细胞增殖实验、细胞周期分析实验、Transwell迁移侵袭实验检测结肠癌细胞SW620的增殖、细胞周期阻滞、迁移和侵袭能力。计量资料组间比较采用t检验,计数资料采用χ²检验。结果LncRNATPT1-AS1在结肠癌组织中的相对表达量显著高于对应的癌旁组织(3.99±0.21比1.78±0.09,t=35.433,P<0.05),且其表达与TNM分期(χ²=9.000,P<0.05)和远处转移(χ²=4.600,P<0.05)呈正相关,差异均有统计学意义。CCK-8实验结果显示,敲低TPT1-AS148 h(0.47±0.02比0.83±0.05,t=10.543,P<0.05)、72 h后(0.69±0.02比1.23±0.09,t=10.145,P<0.05),SW620细胞的增殖能力均显著低于对照组,差异均有统计学意义。细胞周期分析显示,敲低TPT1-AS1可使G0/G1期细胞比例高于对照组[(68.47±2.79)%比(44.69±1.26)%,t=14.672,P<0.05],S期细胞比例低于对照组[(22.87±1.96)%比(37.48±1.57)%,t=17.246,P<0.05],G2/M期细胞比例低于对照组[(8.22±0.87)%比(20.78±0.45)%,t=18.772,P<0.05],差异均有统计学意义。Transwell迁移侵袭实验结果表明,敲低TPT1-AS1可使SW620细胞的迁移能力显著低于对照组[[(87±8)个比(177±10)个,t=15.237,P<0.05],侵袭能力显著低于对照组[(47±5)个比(122±8)个,t=19.578,P<0.05],差异均有统计学意义。结论lncRNA TPT1-AS1在结肠癌组织中表达升高,敲低TPT1-AS1可抑制结肠癌细胞增殖、细胞周期G1/S期转换、迁移和侵袭。