孟鲁司特钠治疗小儿喘息性支气管肺炎的临床效果

目的 探究小儿喘息性支气管肺炎采用孟鲁司特钠治疗的临床疗效.方法 选取该院2017年5月—2020年5月收治的90例喘息性支气管肺炎患儿为研究对象,随机分为两组,对照组行常规治疗,观察组在对照组基础上采用孟鲁司特钠进行治疗,对比两组临床疗效、症状消失时间、不良反应发生情况.结果 观察组治疗总有效率为95.56％,高于对...     

类风湿性关节炎患者抗胶原蛋白Ⅱ抗体及其自身反应性T淋巴细胞的检测

目的:分析类风湿性关节炎(RA)患者T淋巴细胞免疫应答及抗胶原蛋白Ⅱ(CⅡ)抗体的异常表现。方法:应用流式细胞仪分析22例RA及6例骨关节炎(OA)患者外周血和关节滑膜液(SF)中T淋巴细胞免疫表型和趋化因子受体的表达。选用HSP-65和胶原蛋白Ⅱ(CⅡ)抗原诱导和分析患者自身反应性T淋巴细胞克隆频率,采用经典的酶联免疫吸附试验(ELISA)检测患者外周血和SF中抗CⅡ抗体以及IFN-γ、IL-10、IL-4和IL-12的含量。结果:RA患者关节SF中CD4+/CD8+T淋巴细胞的比值为1.09,显著低于外周血中CD4+/CD8+T淋巴细胞比值(2.02);SF中CD3+/CD25+双阳性的活化T淋巴细胞占(15.9±9.6)%。SF中T淋巴细胞表面趋化因子受体CCR5表达较低,与外周血相比无统计学意义,但趋化因子受体CD25+/CXCR3+表达量较高,为(16.0±4.0)%,远远高于外周血T淋巴细胞[仅为(0.5±0.3)%](P<0.01)。ELISA检测结果表明RA患者关节SF中抗CⅡ抗体阳性率明显高于其血清以及OA患者SF和血清;RA患者SF中IFN-γ、IL-12的含量高于外周血。来自RA患者病灶关节SF单个核细胞(SFMC)较外周血单个核细胞(PBMC)对HSP-65抗原和CⅡ的诱导具有更高的自身反应性T淋巴细胞应答频率(分别为8.5×10-6和11.5×10-6)。结论:RA患者关节SF中存在高活化状态的T淋巴细胞,其对CⅡ的高克隆反应频率以及SF中高表达抗CⅡ抗体,均提示自身反应性T淋巴细胞的浸润是造成患者病灶区组织损伤的关键因素。     

γδ T细胞诱导与分化的初步研究-Ⅰ

目的:探讨在异戊烯焦磷酸(IPP)作用下,健康人外周血和新生儿脐带血中γδT细胞的增殖和亚型变化,以期获得足够的具有不同特征的γδT细胞用于后续的实验研究。方法:流式细胞术分析经IPP诱导的单个核细胞表面分子的表达状态,评估其γδT细胞的比例、亚型和表型格局。结果:健康人外周血和新生儿脐带血中γδT细胞数量虽占较低比例,但两者的γδT细胞存在显著异质性。健康人外周血γδT细胞主要以Vγ9Vδ2 TCR亚群为主;初始分选的外周血单个核细胞中Vγ9Vδ2T细胞主要为中央记忆型(CD27+CD45RA-)和效应记忆型(CD27-CD45RA-);IPP诱导后,γδT细胞显著扩增,Vγ9Vδ2 T细胞亚群转变为以效应记忆型为主,并高表达HLA-DR和B7分子。而新生儿脐带血来源的γδT细胞却呈现出较为复杂的亚群异质性,其Vγ9Vδ2 T细胞主要为CD27+CD45RA+的幼稚型细胞;经IPP诱导14天后,γδT细胞获得扩增(比例增高)且Vγ9Vδ2 T细胞趋向中央记忆型和效应记忆型分化,但仍以幼稚型为主。结论:健康人外周血和新生儿脐带血中γδT细胞在数量、亚群诸方面存在差异;IPP具有诱导和扩增外周血γδT细胞的生物学作用,而脐带血来源的γδT细胞还需相关细胞因子的协同作用,才能呈现出其分化成熟为可用于理论研究和临床实验的效应记忆型γδT细胞的潜能。关于其具有的免疫调节和效应功能将另文报道。     

人工智能在麻醉学科的前景与挑战

随着社会人口老龄化的加剧及手术量日益增加,麻醉科医师的工作负荷不断加大,因疲劳工作导致发生人为错误的风险增加。人工智能的出现不仅可以协助麻醉科医师进行部分临床工作,提高麻醉科医师的工作效率,优化围术期的麻醉管理,还可以构建大型数据库、智能化教学等,为麻醉学科的发展带来了新的机遇。但是,人工智能在麻醉学科的应用也伴随着风险与挑战:数据收集、隐私保护、机器学习模型的透明化等。本文就人工智能在麻醉学科的前景与挑战进行综述,为人工智能的相关研究提供参考。     

槲寄生凝集素蛋白诱导肿瘤细胞凋亡的实验研究

目的研究从中药槲寄生中制备的槲寄生凝集素蛋白诱导肿瘤细胞凋亡机制。方法用经典的染色技术：流式细胞术、MTT法分析经分子生物学方法分离纯化的槲寄生凝集素蛋白诱导肿瘤细胞凋亡形态特征,AP峰值和抑制肿瘤细胞增殖的抑制率以研究其诱导肿瘤细胞凋亡机制。结果槲寄生凝集素蛋白具有诱导肿瘤细胞凋亡和显著抑制和阻断肿瘤细胞增殖且以Caspase依赖的方式发挥其生物学作用的。结论槲寄生凝集素蛋白具有直接抗肿瘤作用,在肿瘤免疫学的基础和临床应用研究中具有前景。     

小干扰RNA分子对增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响

目的 使用RNA干扰（RNA interference,RNAi）技术抑制黏着斑激酶（Focal adhesion kinase,FAK）基因的表达,观察增生性瘢痕成纤维细胞在生物学行为上发生的变化。方法设计特异性探针合成FAKSiRNA片段,脂质体法转染体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞,光学显微镜观察细胞形态;MTT检测细胞活性并绘制细胞生长曲线;流式细胞仪检测细胞周期。结果转染后的成纤维细胞呈短梭形改变,胞质、突触减少,细胞核内核仁减少。细胞生长曲线表明．转染FAKsiRNA的瘢痕成纤维细胞生长明显抑制。转染后瘢痕成纤维细胞阻滞在G1期,S期和G2期细胞比例减少。结论FAK与瘢痕增生相关密切,因此改变FAK在成纤维细胞中的表达可望调控增生性瘢痕成纤维细胞的生物活性．     

病毒分子模拟介导多发性硬化发病机制的初步分析

目的 研究多发性硬化(MS)患者所具有的与人类疱疹病毒6型(HHV-6)病毒/人类疱疹病毒4型病毒(EBV)和髓鞘碱性蛋白(MBP)发生交叉反应的CD4+/CD8+T细胞,以及MS患者血清和脑脊液中MBP和抗病毒抗体表达状况,探讨MS发病与HHV-6/EBV感染的关系.方法 通过氚标记胸腺嘧啶核苷(3HTdR)掺人实验分析HHV-6/EBV病毒肽和MBP肽段诱导的MS患者CD4+和CD8+T细胞的应答反应,以高灵敏ELISA试剂盒检测MS患者脑脊液和血清中抗HHV-6/EBV抗体水平,并以引物序列特异的PCR(SSPPCR)技术分析MS患者HLA-II类分子DRBl的表达格局.结果 (1)MS患者HLA-Ⅱ类分子DRBl 04基因(41.7%)与健康对照组(18.7%)相比具有较高的检出率,但差异无统计学意义(P>0.05).(2)MS患者血清中存在高水平抗HHV-6抗体,同时亦可检测出抗EBV壳蛋白抗原(VCA)IgG抗体和EBV核抗原-1(EBNA-1)的IgG抗体.(3)3H-TdR掺入实验结果表明,MS患者的CD4+T细胞或CD8+T细胞对自身MBP肽段及合成的HHV-6/EBV肽段的诱导作用均存在交叉反应.结论 HHV-6/EBV与MS患者MBP自身抗原存在结构上的同源性.该同源性可诱发MS患者自身反应性CD4+/CD8+T细胞活化而导致MS患者免疫损伤,可能是MS的发病机制之一.     

抗人gp130单克隆抗体的制备及其生物学特性分析

目的:制备小鼠抗人IL-6Rβ(gp130)单克隆抗体,并分析其生物学特性及初步的免疫学功能。方法:用gp130抗原免疫BALB/c小鼠,经三次免疫获得高效价的ELISA结果后,取小鼠的脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经多次亚克隆筛选得到稳定分泌抗gp130单克隆抗体的杂交瘤细胞株。大量扩增杂交瘤细胞,收集细胞上清,随即过亲合层析柱进行纯化,对经纯化的抗人gp130单克隆抗体进行亚型鉴定,用Western blot及间接ELISA、biacore方法分析抗人gp130单克隆抗体的纯度、特异性及亲和力,用FACS术检测抗人gp130单克隆抗体与膜表面富含IL-6受体的U266细胞系的结合率,同时建立IL-6诱导的U266细胞增殖系统,用以检测和分析抗人gp130单克隆抗体的抑制和阻断效应。结果:本研究获得了多株能够稳定分泌抗人gp130单克隆抗体的细胞株,取其中一株(14C4)进行分析,表明其亚型属于IgG2b,轻链为κ链,经Western blot及间接ELISA证明此株抗体有较高的纯度及特异性,biacore结果显示14C4与抗原结合的亲和力为2.62E-10,FACS结果证实能与U266细胞表面的gp130特异性结合,并且呈剂量依赖性,细胞增殖实验说明14C4在一定程度上可抑制IL-6诱导的U266细胞的增殖。结论:初步成功制备了抗gp130单克隆抗体,并且具备较好的生物学特性,为研究人IL-6gp130在抗感染、炎症以及肿瘤和自身免疫病学中的诊断和治疗中的意义提供了有效的工具和手段。     

Vγ9Vδ2T细胞亚群的建立与功能分析

目的:建立γδT细胞的一个亚群(Vγ9Vδ2 T细胞亚群),分析其免疫学相关功能。方法:对健康人外周血单个核细胞进行磁珠分选,获得富含γδT细胞的细胞群,用异戊烯焦磷酸(isopentenyl pyrophosphate,IPP)、白细胞介素2(IL-2)刺激γδT细胞增殖。通过流式细胞仪检测分析Vγ9Vδ2 T细胞(γδT细胞主要亚群)在IPP刺激后的分化趋势及表面标志,分离出效应型Vγ9Vδ2 T细胞,对其抗原递呈功能进行研究,并分析不同表型的Vγ9Vδ2 T细胞的分泌格局。结果:Vγ9Vδ2 T细胞在IPP作用下可被激活,不断增殖并分化为效应记忆型(TEM、CD45RA-CD27-γδT),该细胞群高表达HLA-DR和CD80/86等分子,呈现出专职性抗原递呈细胞的表型特征;此群效应记忆型Vγ9Vδ2 T细胞能有效递呈PPD、TT等可溶性抗原给CD4+T细胞,具有与B细胞相当的抗原递呈功能。实验还发现,不同表型的Vγ9Vδ2 T细胞具有不同的细胞因子分泌格局,新鲜分离的健康人外周血Vγ9Vδ2 T细胞(非效应型)以分泌IFN-γ为主,而效应记忆型Vγ9Vδ2 T细胞在产生IFN-γ的同时能分泌IL-17。结论:Vγ9Vδ2 T细胞亚群能在IPP的作用下激活、增殖,并分化为具有抗原递呈细胞功能的效应记忆型细胞,其分泌IFN-γ的同时可分泌IL-17。     

类风湿关节炎患者自身反应性B细胞异常表达相关分子的检测和分析

目的:分析类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者自身反应性B细胞及与之功能相关的自身抗体和信号分子的表达。方法:采用流式细胞仪分析22例RA患者及10例正常对照者的外周血自身反应性B细胞比率及RA和骨关节炎(OA)患者(n=10)外周血单个核细胞(PBMC)Th2的表达。用荧光定量PCR(FQ-PCR)检测RA患者及正常对照者PBMC细胞外信号调节激酶(ERK)、黏着斑激酶(FAK)基因的相对表达量,并采用蛋白印迹法检测NF-κB信号通路的磷酸化格局;用ELISA法检测和分析RA及OA患者血清及关节滑膜液抗Ⅱ型胶原抗体水平,同时检测RA患者血清及关节滑膜液中基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)的表达状况。结果:相对于正常对照者,RA患者外周血中存在高表达CD19+的自身反应性B细胞;同时其PBMC中ERK基因相对表达量提高、NF-κB信号通路磷酸化活跃。相对于OA患者,RA患者关节滑膜液中抗Ⅱ型胶原抗体水平显著升高。RA患者关节滑膜液中MMP-3及TIMP-1等水平较其自身血清中升高。结论:RA患者自身反应性B细胞及相关分子的异常表达可能是介导RA发病的又一重要因素。