大鼠糖原合成酶激酶-3β过表达基因慢病毒载体的构建与鉴定

糖原合成酶激酶-3β( Gsk-3β)是哺乳动物中广泛表达的丝氨酸/苏氨酸激酶,它不但能磷酸化糖原合成酶,促进糖代谢,还可磷酸化一系列底物,包括代谢相关蛋白、信号转导蛋白、结构蛋白和一些转录因子,并参与PI-3K、Wnt及Hedgehog等信号通路,影响细胞的生存与凋亡、运动与迁移及肿瘤的生成等[1].我们通过构建大鼠Gsk-3β基因过表达慢病毒载体并实现该基因在WBF-344细胞中的稳定高表达.     

小切口负压引流加冲洗在肛周脓肿治疗中的临床疗效分析

目的 探讨小切口负压引流加冲洗在肛周脓肿治疗中的临床疗效.方法 本研究选择本院肛肠科2015年1月~2017年1月之间收治100例肛周脓肿患者的临床资料进行统计分析,随机分为对照组和实验组,对照组实施传统切开引流法治疗,实验组实施小切口负压引流加冲洗治疗,比较两组治疗效果.结果 实验一次性治愈率为96%,二次手术治愈率为4%,对照组一次性治愈率为74%,二次手术治愈率为24%,三次手术治愈率为2%,两组对比差异具有统计学意义(P<0.05).实验组肛周脓肿患者术后疼痛评分、住院时间、并发症发生率和肛瘘形成等观察指标结果均明显优于对照组(P<0.05).结论 肛周脓肿患者接受小切口负压引流加冲洗治疗,患者一次性治愈几率较高,能够有效减轻患者痛苦,且治疗安全性较高.     

LKB1在肝细胞癌中的表达及其对预后的影响

目的 探讨LKB1基因在肝细胞性肝癌（HCC）中的表达及其与肝细胞癌患者预后的关系。方法 采用免疫组化技术检测70例HCC患者肝癌及癌旁组织和20例正常肝组织中LKB1蛋白的表达,采用x2检验分析LKB1表达与临床病理因素的关系。对该组70例患者进行随访,并应用COX比例风险回归模型对其预后影响因素进行评估。结果 LKB1蛋白在HCC组织中的阳性表达率明显低于正常肝组织和癌旁组织（P＜0.05）。HCC患者中,LKB1蛋白表达与HCC的分化程度,门静脉侵袭,TNM分期有关（P＜0.05）。LKB1阳性表达的患者生存时间比阴性表达的显著延长（P＜0.05）。门静脉侵袭、胆管癌栓、TNM分期和LKB1表达是影响HCC预后的独立危险因素（P＜0.05）。结论 LKB1蛋白表达是影响HCC患者生存时间的独立因素之一,检测LKB1蛋白可能为HCC患者预后判断提供参考。     

大鼠GSK3β基因RNAi腺病毒载体的构建与鉴定及其对肝卵圆细胞增殖的促进作用

目的构建并鉴定特异性大鼠糖原合成酶激酶3β(GSK3β)基因siRNA腺病毒载体,观察其对肝卵圆细胞系WB-F344增殖的影响。方法用DNA重组技术将针对GSK3β基因不同部位所设计的2对shRNA序列克隆到高效RNAi真核表达质粒载体pGenesil-1.1中,构建shRNA表达载体pGenesil-1.1-GSK3β。分别酶切重组质粒及pDC312载体,转化连接,构建腺病毒载体pDC312-GSK3β,PCR扩增与鉴定。脂质体法介导腺病毒载体与骨架质粒pPE3-F11共转染293细胞,包装产生腺病毒颗粒AdD C3 12-GSK3β并测定滴度。取病毒上清感染WB-F34 4细胞,荧光显微镜观察细胞荧光含量,Western blotting检测GSK3β蛋白表达。CCK-8测定转染前后WBF-344增殖变化。结果经PCR酶切及Western blotting技术证实成功构建了针对大鼠GSK3β基因RNAi质粒pGenesil-1.1-GSK3β及GSK3β基因RNAi重组腺病毒载体AdDC312-GSK3β。Western blotting证实该重组腺病毒载体可抑制WBF-344细胞GSK3β的表达。CCK-8结果显示干扰GSK3β可促进WBF-344细胞增殖。结论成功构建了针对GSK3β基因RNAi的腺病毒载体,并在大鼠肝卵圆细胞系WBF-344中稳定表达,促进细胞增殖。     

中老年患者胆道出血27例临床分析

目的了解中老年患者胆道出血的原因、表现、诊治及其预后。方法对本院收治的中老年胆道出血患者27例的临床资料进行回顾性分析。结果胆道出血大部分发生在胆道手术后,出血部位有右肝动脉、胆囊动脉、胆管壁血管等,经介入、药物等非手术治疗或手术治疗后,26例(96.3%)治愈,1例(3.7%)死亡,原因为晚期胃癌、胰头转移。治愈患者均无再次出血。结论胆道出血多发生于胆道手术后,出血量少,首先选择保守治疗或动脉栓塞术等介入治疗,治疗无效或出血量大时及时手术治疗。     

亚硒酸钠诱导胰腺癌PANC-1细胞凋亡

目的 探讨亚硒酸钠( Na2SeO3)对胰腺癌细胞系PANC-1生长的影响及其作用机制.方法 以PBS为对照,用2、5、10、20μmol/L Na2SeO3处理胰腺癌PANC-1细胞株,用四甲基偶氮唑盐(MTT )比色法检测细胞活性,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,观察Na2SeO3对PCNA-1细胞株生长的影响;通过ELISA法检测Caspase-3蛋白含量,Western blotting法检测细胞内及线粒体内细胞色素C( cytochrome C,Cyt C)含量.结果 与时照组相比,用不同浓度Na2SeO3作用24 h、48 h后,对PANC-1细胞抑制作用有明显差异(P<0.05);呈浓度时间依赖性.与PBS对照组相比,Na2SeO3作用组Caspase-3含量明显升高(P<0.01),细胞色素C从线粒体向胞质释放明显增多,但蛋白含量无明显变化.结论 Na2SeO3抑制PANC-1细胞的生长,促进细胞凋亡,其机制可能与Caspase-3的激活及细胞色素C的释放有关.     

肝细胞癌中氨基肽酶N(CD13)的表达及其临床意义

目的 探讨氨基肽酶N(CD13)在肝细胞癌中的表达水平及其临床意义.方法 应用免疫组织化学染色方法检测CD13在55例肝癌组织及其相应癌旁组织和13例正常肝组织中的表达水平.运用X2检验分析肿瘤组织中CD13表达与临床病理因素的关系.运用Kaplan-Meier法分析肿瘤组织CD13与患者术后总生存时间的关系.结果 CD13在肝癌组织中的阳性表达率为72.73％(40/55),在癌旁组织的阳性表达率为21.81％(12/55),在正常肝组织的阳性表达率为7.69％(1/13).与癌旁组织和正常组织比较,肝癌组织中CDI3的阳性表达率显著升高,差异有统计学意义(P＜0.05).进一步分析显示CD13表达与肝癌的分化程度、包膜侵犯、淋巴结转移、门静脉癌栓形成、临床TNM分期等临床病理因素相关(P＜0.05).K-M生存曲线提示肿瘤CD13阳性表达的病例较阴性表达者生存率降低,差异具有统计学意义(P＜0.05).多因素COX逐步回归分析提示CDI3是影响总体生存率预后的独立危险因素.结论 CD13在肝癌的发生和发展中可能发挥重要的作用,可作为肝癌临床诊断和判断预后的一项重要指标.