犬MC1R基因多态性的研究

目的 利用PCR—RFLP和PCR—SSCP技术分别检测犬MC1R基因中两个序列T105A和R306Ter的基因多态性，为遗传育种、培育出更加优良的实验用犬奠定基础。方法 以224只犬为实验材料，对犬MC1R基因T105A片段和R306Ter片段分别进行PCR-RFLP和PCR—SSCP分析，并且分别对具有RFLP和SSCP多态性的片段进行克隆测序，找出等位基因的差异位点。结果 经对犬MClR基因的PCR-RFLP分析，发现犬MC1R基因的T105A序列具有多态性，表现为三种基因型：AA、AB和BB。通过对具有RFLP多态性的片段进行克隆测序发现MC1R基因在编码第105位氨基酸的密码子处存在由G到A的单碱基突变，该突变导致第105位氨基酸发生由精氨酸向苏氨酸的改变，此外在第207位氨基酸的密码子处还发现由A到G的单碱基突变，并产生了一个HhαI限制性内切酶位点。同时，经过犬MC1R基因的PCR—SSCP分析，发现犬MC1R基因的R306Ter序列具有多态性，表现为三种基因型：CC、CD、DD.通过对具有SSCP多态性的片段进行了克隆测序发现，MC1R基因在编码第306位氨基酸的密码子处存在一个由CGA到TGA的终止突变，而使翻译终止。结论 利用PCR—RFLP和PCR—SSCP分析技术证实犬MC1R基因具有明显的多态性。     

应用Heath-Carter法对葫芦岛市农村汉族儿童体型的研究

目的 研究葫芦岛市农村汉族儿童的体型发育规律和特点，为体质人类学补充必要的资料。方法 采用Heath-Carter体型法，以葫芦岛市农村7～10岁408名(男性213名，女性195名)汉族儿童为研究对象，男女各分4组，每组46～63人，测量身高、体重、上臂紧张围等十项指标，经计算和统计学处理，进行体型分析。结果 葫芦岛市农村汉族男孩的平均体型值为3．4-2．5-3．2，属中间型，女孩平均体型值为4．0-2．3-3．4，属偏外胚层的内胚层体型。男孩和女孩的内因子和外因子占优势，中因子值偏低，随着年龄的增长，体型频数不断变化，经体型差异的t检验，除7岁外，8、9、10岁的同龄男女孩体型差异显著，与国内外资料相比，葫芦岛市农村汉族儿童内因子偏高，中因子偏低，外因子相差不多。结论 葫芦岛市农村汉族儿童体脂发育较好，身材修长，但骨骼肌肉欠发达，儿童的体型发育随年龄呈多变倾向。     

雷公藤内酯醇在小鼠同种异体胰岛移植中的抗排斥作用

目的探讨雷公藤内酯醇（triptolide,TPT）在小鼠同种异体胰岛移植中的抗排斥作用及其机理。方法采用BALB/c小鼠作为供体,进行胰岛分离,以链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）诱导的C57BL/6糖尿病小鼠作为受体,行左肾被膜下胰岛移植。将移植后糖尿病小鼠随机（随机数字表法）分为3组,每组8只。于胰岛移植术后前5 d分别给予腹腔注射1%吐温80溶剂（对照组）、TPT 50μg/kg（L-TPT组）和100μg/kg（H-TPT组）,之后隔天注射1次,至术后第14天结束。术后监测受体血糖水平变化;并于术后第10天每组随机（随机数字表法）选取3只小鼠,切取左侧肾脏行病理学检查,流式细胞术检测脾淋巴细胞中CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞比例。结果对照组、L-TPT组和H-TPT组移植胰岛的中位存活时间分别为12.6 d（9～16 d）、21.4 d（14～27 d）和27.6 d（19～34 d）;脾淋巴细胞中CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞比例分别为（5.2±0.6）%、（12.0±1.3）%和（15.7±1.8）%。与对照组相比,L-TPT组和H-TPT组小鼠移植胰岛的中位存活时间明显延长（P〈0.05）,CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞比例显著增高（P〈0.05）。结论 TPT通过上调移植受体CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞比例,减轻了胰岛移植后的排斥反应,显著延长了移植胰岛的存活时间,其免疫抑制作用呈剂量依赖性。     

甲鱼油对胰岛素抵抗细胞模型胰岛素敏感性和葡萄糖代谢的影响

采用高浓度胰岛素诱导建立胰岛素抵抗(IR)HepG2细胞模型,评价甲鱼油对IR细胞模型胰岛素敏感性和葡萄糖代谢的影响.利用甲鱼油处理IR细胞模型,通过葡萄糖氧化酶及3H-D-葡萄糖参入实验分别检测其葡萄糖消耗和3H-D-葡萄糖参入率.结果表明,HepG2细胞模型的葡萄糖参入率在各种浓度的胰岛素刺激下均低于对照细胞(P＜0.05),并且HepG2细胞模型与对照细胞的3H-D-葡萄糖参入率随着胰岛素浓度的升高而升高,但前者升高的幅度低于后者.MTT(甲基噻唑基四唑)结果显示甲鱼油均具有促进对照细胞和IR细胞模型增殖作用.与对照组细胞相比,采用不同浓度胰岛素诱导的模型细胞经甲鱼油处理后其葡萄糖摄取和消耗显著增加(P＜0.05).甲鱼油明显增加该IR细胞模型的葡萄糖消耗和3H-D-葡萄糖参入率,提高IR细胞模型的胰岛素敏感性,改善其糖代谢.     

高职护理专业正常人体形态学实验规范化教学方案的探索与实践

正常人体形态学实验是将人体解剖学和组织胚胎学二门实验课程融合而成的一门独立设置的实验课程。探索制定了高职护理专业本课程规范化教学方案,并对2012级高职护理专业学生实施。结果发现,正常人体形态学实验考核成绩通过率达到98%,人体形态学理论成绩也大幅提高。该规范化教学方案的应用,不仅提高了学生的学习效率,而且对学生综合素质的培养起积极的作用。     

犬MC1R基因多态性与毛色表型相关性的研究

目的利用PCR—RFLP技术检测犬MC1R基因中T105A位点的多态性,分析该多态性与犬毛色表型的相关性。方法抽取36只比格犬血液并提取DNA,记录毛色表型。采用PCR—RFLP技术,对MC1R基因T105A位点进行基因多态性分析。用相关分析的统计学方法分析位点多态性与毛色性状之间的相关性。结果PCR—RFLP分析结果表明,T105A位点序列具有多态性,表现为A、B二个等位基因和AA、AB及BB三种基因型。A、B等位基因频率分别为58．33％和41．67％,基因杂合度（H）为0．59。基因型从频率为33．33％,BB为16．67％,AB为50．00％。经统计分析结果表明MC1R基因多态性与毛色性状不存在显著的相关性,这可能与Agouti蛋白对毛色的影响有关。结论在比格犬中MC1R基因的T105A位点表现出明显多态性并与毛色性状无相关性。     

分子标记及在犬中的应用进展

分子标记这种技术已被广泛应用于遗传学、实验动物学及免疫学等研究领域中，本文概述了分子遗传标记的种类及其在犬中的应用情况。随着分子生物学技术的不断发展及人类基因组测序的完成，分子标记必将不断改进完善，人们也将会不断地发现更为有效和便捷的分子标记技术应用于犬的遗传及应用研究中。     

共沉默miR-221-3p/222-3p表达抑制骨髓间充质干细胞增殖及促成软骨分化

背景：基于干细胞的组织工程技术作为治疗骨关节损伤修复的有效手段,具有广泛的应用前景。研究表明miRNA在调控干细胞向软骨分化过程中具有重要的作用。 目的：探讨共感染慢病毒介导的反义miR-221-3p/222-3p(microRNA-221-3p,microRNA-222-3p)对人骨髓间充质干细胞成软骨分化的作用,为临床软骨损伤修复提供新的策略。 方法：利用miRNA基因芯片技术筛选转化生长因子β3诱导人骨髓间充质干细胞成软骨分化过程中不同阶段表达差异的miRNA,并利用荧光实时定量PCR(RT-qPCR)验证;构建慢病毒人反义miR-221-3p/222-3p载体(Lv-miR-221-3p-inhibition,Lv-miR-222-3p-inhibition)并共转染人骨髓间充质干细胞,空载体组(Lv-GFP)以及未转染组作为对照。利用CCK-8法检测沉默miR-221-3p/222-3p 6 d后细胞的增殖情况;通过番红O染色法、免疫组织化学方法以及RT-PCR验证各组软骨诱导21 d后软骨分化相关标志物的表达。 结果与结论：构建的Lv-miRNA-221-3p/222-3p inhibition 共转染人骨髓间充质干细胞,成功沉默了细胞中的miR-221-3p/222-3p表达水平;miRNA基因芯片与RT-qPCR验证结果显示miR-221-3p/222-3p在软骨分化后期表达明显降低;转染组与未转染组以及空载体组相比：①细胞增殖明显受到抑制。②番红Ｏ染色以及免疫组织化学显示软骨分化特征标志物硫酸软骨素以及Ⅱ型胶原表达增强。③RT-qPCR也证实硫酸软骨素以及Ⅱ型胶原的mRNA表达也明显上调。结果显示沉默人骨髓间充质干细胞miRNA-221-3p/222-3p,抑制了细胞增殖并促进了成软骨分化。  中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程