mtNJD5基因12338、12358和12406位点突变与弱精子症的相关性分析

目的：探讨miND5基因12338、12358和12406位点突变与弱精子症的相关性。方法：按照WHO标准收集55例弱精子症患者和33例精子活力正常者的精液标本,通过PCR及测序检测miND5基因12338、12358和12406三个位点的突变,分析比较两组基因突变频率及活力的差异。结果：弱精子症组中精子miND512338突变率（为i0．91％）、12358突变率（为9．09％）、12406突变率（为12．73％）和三位点总突变率（为32．73％）均高于正常对照组（分别为9．09％、3．03％、3．03％和15．15％）,但差异无统计学意义（Jp〉0．05）。进一步分析两组的精子活力发现,突变组与非突变组a级精子百分率分别为（20．63±13．63）％、（30．61±18．87）％,两组比较差异有统计学意义（P〈0．05）;a＋b级精子百分率分别为（29．66±17．08）％、（41．44±22．47）％,两组比较差异有统计学意义（Jp〈0．05）。结论：n1．12338T〉C、m．12358A〉G和m．12406G〉A可能与精子活力有一定的相美性．     

血清及精浆中乙型肝炎病毒的存在情况对精子质量的影响

目的 探讨血清及精浆中乙型肝炎病毒存在的情况与精子参数、形态学及精子DNA完整性等精子质量的相关性。方法 收集2016年1月至2021年12月在温州医科大学附属第一医院生殖医学中心就诊男性的精液标本,采用微粒子酶免疫分析法检测血清乙肝标志物滴度、荧光定量PCR技术检测血清和精浆中HBV-DNA拷贝水平,同时所有精液标本进行精液参数、精子形态学及精子DNA碎片指数(DFI)分析。根据HBV病毒检测情况将患者分为4组：A组(HBsAg阴性,n=1 122)、B组(血清HBsAg阳性,而HBeAg、HBV-DNA和精浆HBV-DNA拷贝数均阴性,n=460)、C组(血清HBsAg、HBeAg和HBV-DNA拷贝均阳性,而精浆HBV-DNA拷贝阴性,n=81)和D组(血清HBsAg、HBeAg和HBV-DNA拷贝均阳性,且精浆HBV-DNA拷贝阳性,n=112),比较各组之间的基本资料、肝功能及精子质量的差异。结果 根据纳排标准纳入2 063例患者,HBV感染者(HBsAg阳性检出者)占45.6%(941/2 063),最终纳入分组分析的患者共1 775例。与未感染者(A组)相比,HBV感染者...     

精子DNA冷冻损伤易感性与精子活动力相关性

目的研究不同活动力精子其核DNA对冷冻损伤的易感性。方法选取来本中心行精液常规分析,精子浓度5×106/ml、精子正常形态率4%者63例为研究对象。精子冷冻前后均采用染色质扩散(SCD)实验分析核DNA完整性,分别比较高活力组(d级30%,n=28)及低活力组(d级≥30%,n=35)精子在冷冻前后DNA完整性的差异。结果精液标本(n=63)经冷冻后,精子DNA碎片指数(SDF)较冷冻前显著升高[(23.1±12.5)%vs.(19.9±11.6)%,P0.05],其中代表精子DNA完整性较好的大晕轮精子比例显著降低[(71.9±13.3)%vs.(75.8±12.2)%,P0.05],而小晕轮精子比例则显著升高[(10.2±5.7)%vs.(8.2±3.9)%,P0.05]。在低活力组,精子SDF及大晕轮、小晕轮精子比例在冷冻前后亦差异显著(P0.05);而在高活力组,冷冻后仅小晕轮精子比例较冷冻前显著升高[(8.3±3.4)%vs.(6.8±3.0)%,P0.05],SDF及大晕轮、中晕轮、无晕轮的精子比例在冷冻前后均无显著差异(P0.05)。结论相比高活力组精子,低活力组精子核DNA冷冻耐受力较差,更易受损。     

mtND4基因突变与弱精子症精子的相关分析

目的 分析弱精子症精子mtND4基因突变与弱精子症的相关性,探索弱精子症的分子病因.方法 按WHO标准收集56例弱精子症精液标本和44例精子活力正常精液标本,用3对引物PCR扩增mtND4基因,纯化测序,分析mtND4基因突变,比较2组标本mtND4基因突变及多重单核苷酸多态性(SNP)的差异. 结果发现31个同义突变位点和12个错义突变位点,其中6个核苷酸变异位点未报道过,分别为A11026G、C11215T、A11488G、C11713T、C12908T、T10908C.对照组mtND4基因T10873C和T11944C变异率分别为61.4%(27/44)和11.4%(5/44),显著高于弱精子症组的39.3%(22/56)和0%(P＜0.05);除T10873C和T11944C变异外,错义突变分析发现,对照组10例中与T10873C或T11944C组成多重SNP 8例,而弱精子症组10例标本中仅2例,2组间比较差异有统计学意义(P＜0.05);上述20例错义突变标本分成多重SNP组(与T10873C或T11944C)和非多重SNP组,多重SNP组a级精子百分率和a+b级精子百分率均显著高于非多重SNP组(P＜0.05). 结论 mtND4基因错义突变可能影响精子活动力,T10873C和T11944C多态性变异对精子活动力可能是一个有益因子,两者同时存在组成多重SNP时,两者的作用可能具有相互抵消的效应.

Abstract：

Objective To investigate the relationship between mtND4 point mutation in sperms and asthenospermia. Methods Fifty-six asthenospermia cases and 44 control cases were collected using the WHO criterion for defining asthenospermia, the regions of mtND4 gene were amplified by using PCR of 3 pairs primers. Consequently, the point mutation, missense mutation and multiple single nucleotide polymorphisms (SNP) were analyzed by employing sequencing technology and bioinformatics tools. Results Six mutations never before identified were found. The frequency of single point mutation T10873C and T11944C in the control group were significantly higher than those in the asthenospermia group (P＜0.05). Eight cases involved T10873C or T11944C among the 10 cases in control groups with missense mutations were found. But, there were only 2 cases with such mutation in the 10 asthenospermia cases with missense mutations (P＜0.05). The previous 20 cases of missense mutations can be described as either multiple SNP group (with T10873C or T11944C) or nonmultiple SNP group. The percentage of a range and a plus b range of multiple SNP group of sperm was significantly higher than the non-multiple SNP group(P＜0.05). Conclusions mtND4 gene mutation, especially the missense mutation may induce loss of sperm motility. The mutations of T10873C and T11944C may be useful for sperm motility or counteract the influence for the sperm motility caused by these harmful mutations.     

实时荧光定量PCR检测精子线粒体DNA的提取效率

目的：测定宝生物工程有限（大连）公司和上海杰美基因医药科技有限公司两种试剂盒精子线粒体DNA提取的效率,以及核基因组DNA的残留。方法：CASA法计数精子数量,试剂盒提取线粒体DNA,TaqMan法荧光实时定量PCR,利用标准曲线测定线粒体基因Cox-I片段、核基因β-actin片段的拷贝数,计算出精子线粒体DNA的提取效率和核基因组DNA的残留。结果：两种试剂盒精子线粒体DNA提取效率分别是：0.44%±0.03%和6.19%±0.17%。核基因组DNA的残留率分别为4.71%±0.76%和38.1%±1.97%。结论：后者线粒体DNA提取效率高一个数量级,但核基因组DNA的残留率也高一个数量级。     

无精子症竟会传染

由于生活方式、环境、遗传等因素影响,男性不育的数量逐渐增加.其中,还有部分男性患上了无精子症.导致睾丸生精障碍的病因很多,其中的一个致病因素,是一种会在人们之间相互传染的病毒.而这种可能会引起男性睾丸萎缩、精子生成障碍,导致无精子症的病毒,竟然是腮腺炎病毒.     

维生素E和B12对冷冻精子活力和DNA的保护作用

目的探讨维生素E(Vit E)和Vit B12对冷冻精子活力和DNA的保护作用。方法收集在我院生殖医学中心就诊的32例正常男性精液标本,按照添加维生素的不同分为3组:对照组:精液中只添加常规冷冻保护剂;Vit E组:添加常规冷冻保护剂和5mM的VitE;Vit B12组:添加常规冷冻保护剂和0.5%的Vit B12。比较3组精子复苏后的精子活动力、存活率、顶体酶活性、精子DNA碎片率(SDF)等指标。结果经液氮冷冻72h复苏后,Vit E组活动力(a+b)级的精子数、精子存活率均显著高于对照组(P0.01);顶体酶活性在各组间比较无显著性差异(P0.05);Vit E组和Vit B12组的SDF[分别为(12.16±0.50)%、(13.02±0.48)%]均显著低于对照组的(15.18±0.78)%(P0.01);Vit E组的精子DNA平均晕轮直径[(6.76±0.14)μm]显著高于对照组[(6.09±0.18)μm](P0.01),Vit B12组与对照组比较无显著性差异(P0.05)。结论精子冷冻保护剂中添加适当浓度的Vit E可以缓解冻融过程对精子造成的伤害,在一定程度上提高冻融后精子活动力、存活率及精子DNA完整性。     

精子DNA损伤、核蛋白组型转换与顶体酶活性及精液参数的相关性分析

目的:探讨精子DNA损伤、精子核蛋白组型转换与顶体酶活性及精液参数的相关性。方法:收集535例精液标本,采用精子染色质扩散(sperm chromatin dispersion,SCD)检测精子DNA损伤,并与精子核蛋白组型转换、顶体酶活性和WHO手册(第4版)精液参数进行相关性分析。结果:精子DNA损伤与精子核蛋白组型转换、顶体酶活性、精子浓度及前向运动精子这些指标之间比较均具有显著性差异(P<0.01);精子DNA损伤与年龄、核蛋白组型转换、精子浓度和D级精子比例之间呈显著正相关(P<0.01或P<0.05),而与顶体酶活性呈显著负相关(P<0.001),多元逐步回归分析显示年龄、精子浓度、D级精子比例、核蛋白组型转换及顶体酶活性是5个独立的相关变量。精子核蛋白组型转换、顶体酶活性、精子密度和前向运动精子这4个指标的异常率在精子DNA异常组(DFI≥30%)中均显著的高于正常组(DFI<30%)。结论:精子DNA损伤与精子核蛋白组型转换、顶体酶活性及WHO(第4版)精液各参数之间存在密切的联系,可能是评价精子质量的另一项重要的指标。