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目的探讨序列相似性家族134成员B(FAM134B)介导的内质网自噬对内毒素/脂多糖(LPS)诱导的小鼠树突状细胞(DC)凋亡的影响, 为改善创面感染等引起的脓毒症免疫抑制提供依据。方法采用实验研究方法。取第3~10代对数生长期的小鼠DC系DC2.4进行实验。将DC分为LPS刺激0 h(不刺激)组、LPS刺激6 h组、LPS刺激12 h组、LPS刺激24 h组和LPS刺激72 h组, 采用1 μg/mL LPS(浓度下同)培养相应时间后, 采用蛋白质印迹法检测FAM134B、微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)以及转运蛋白SEC61B蛋白表达, 并计算LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值(样本数为3)。将DC分为进行相应处理的磷酸盐缓冲液(PBS)组与LPS组, 培养24 h, 采用免疫荧光法检测FAM134B表达情况及其分别与溶酶体探针、LC3B共定位情况, 通过透射电子显微镜观察细胞内自噬溶酶体数量。将DC分为转染含FAM134B基因小干扰RNA序列的慢病毒的敲减FAM134B组与转染空载慢病毒的空载体组, 转染后72 h, 于倒置荧光相差显微镜下观察细胞荧光表达情况, 另将仅常规培养的D... 相似文献
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目的探讨脂多糖(LPS)刺激下NUFIP-1介导核糖体自噬在树突细胞(DCs)凋亡中的作用及意义。方法将培养的树突细胞系DC2.4分为空白对照组及LPS刺激6、12、24、48、72 h组(n=5), LPS各亚组加入1 μg/mL LPS培养相应时间。采用Western blot检测各组细胞NUFIP-1及自噬相关蛋白p62和LC3B表达水平, 激光共聚焦显微镜检测NUFIP-1在细胞中的表达与定位及其分别与Lyso-tracker、LC3B共定位情况。将载有沉默空载体NS及沉默慢病毒载体NUFIP-1 siRNA感染DC2.4 (n=3), 以1 μg/mL LPS刺激24 h, 应用流式细胞分析术检测细胞凋亡情况, 并采用Western blot检测凋亡相关蛋白包括胱天蛋白酶(cleaved-caspase-3)和Bcl-2表达水平。多组间比较采用单因素方差分析(one-way ANOVA), 采用LSD-t法进一步进行组间两两比较。以P<0.05为差异有统计学意义。结果 Western blot结果提示, LPS刺激不同时间(6、12、24、48、72 h)后DC2.4中... 相似文献
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