人端粒酶逆转录酶-双自杀基因对肝癌的靶向杀伤作用

目前联合基因治疗最常用的是有单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)和大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶(CD).同时,肿瘤的基因治疗要求导人的自杀基因表达严格限制于靶细胞(肿瘤细胞),而对正常细胞的生长无影响,因此寻找肿瘤细胞的靶点成为哌待解决的现实问题[1].端粒酶是维持端粒长度的一种逆转录酶,对细胞增殖、衰老及永生化和癌变起重要作用[2].在端粒酶的二三个亚单位中端粒酶逆转录酶(hTERT)是其活性的关键限速步骤,因而hTERT启动子将成为基因靶向表达的理想开关[2].已有研究证实CD、TK自杀基因治疗肿瘤已取得了初步成效[4,5],但是两者联合应用,尤其是在hTERT启动子特异调控下靶向抗肝癌,研究尚少.本研究旨在观察评价hTERT启动子驱动下的联合自杀基因体系对肝癌细胞靶向高效表达.     

survivin和livin与肿瘤细胞凋亡

细胞凋亡的过程通过多种信号转导实现,并由许多凋亡相关基因调节控制。凋亡蛋白抑制因子(IAP)与肿瘤细胞的无限增殖关系密切。新近发现的IAP包括survivin、livin与肿瘤密切相关,其抗凋亡机制有待进一步研究。     

抑制端粒酶活性引起肝癌细胞凋亡的caspase机制探讨

目的本文探讨hTERTp-TK/GCV系统诱导HepG2细胞凋亡的caspase分子机制。方法 hTERTp-TK/GCV转染HepG2,免疫印迹技术检测caspase-3,8,10,survivin活化裂解情况;MTT法检测caspase-8,3,10抑制剂对hTERTp-TK/GCV诱导HepG2细胞凋亡的抑制作用。结果免疫印迹技术结果显示随时间延长,caspase-8、3酶原逐渐减少、活化片断增多,caspase-10酶原无明显改变,survivin则逐渐减少;caspase-8抑制剂能明显抑制hTERTp-TK/GCV系统诱导的肝癌细胞凋亡,其抑制作用大于caspase-3抑制剂。结论 hTERTp-TK/GCV系统诱导的肝癌细胞凋亡主要是激活了细胞凋亡死亡受体途径上游的caspase-8引起的,同时还涉及caspase家族其它成员,caspase-10没有参与此凋亡过程,此外还涉及survivin的活性减少。     

抑制端粒酶活性引起肝癌细胞凋亡的caspase机制探讨

目的 本文探讨hTERTp-TK/GCV系统诱导HepG2细胞凋亡的caspase分子机制.方法 hTERTp-TK/GCV转染HepG2,免疫印迹技术检测caspase-3,8,10,survivin活化裂解情况;MTT法检测caspase-8,3,10抑制剂对hTERTp-TK/GCV诱导HepG2细胞调亡的抑制作用.结果 免疫印迹技术结果显示随时问延长,caspase-8、3酶原逐渐减少、活化片断增多,caspase-10酶原无明显改变,survivin则逐渐减少;caspase-8抑制剂能明显抑制hTERTp-TK/GCV系统诱导的肝癌细胞凋亡,其抑制作用大于caspase-3抑制剂.结论 hTERTp-TK/GCV系统诱导的肝癌细胞凋亡主要是激活了细胞凋亡死亡受体途径上游的caspase-8引起的,同时还涉及caspase家族其它成员,caspase-10没有参与此调亡过程,此外还涉及survivin的活性减少.