脐血管去内皮细胞后血管顺应性及抗原表达量变化的实验研究

目的 评价酶原法、低温法去除脐血管内皮细胞的优劣，为研究开发符合生理、无排斥、结构和功能类似自体的血管支架提供理论依据。方法 自愿捐赠的健康、足月顺产、无损伤胎儿新鲜脐动、静脉各60根，每根长10cm，抗生素液37C灭菌24h后，分为正常组、酶原组和冷冻组（n=20）。分组时每根血管取0．5cm细菌培养。酶原组加入0．1％Ⅱ型胶原酶后夹闭两端，37C水浴消化5、10、15、20min，去除内皮细胞；冷冻组置入冷存管中，加入DMEM培养液，逐步冷冻，最后置入液氮中，贮藏24h以上，37C水浴30～60s快速复温，无菌生理盐水灌冲血管腔数次，去除残留血管内皮细胞；正常组4CKerb’s保存液恒温存放。将标本分别行HE、弹力纤维及胶原纤维染色及扫描电镜观察；比较各组血管顺应性差异；采用免疫组织化学染色测定人类白细胞抗原ABC（human leukocyte antigen ABC，HLA-ABC）和HLA-DR，分析抗原表达量的变化。结果 各组标本均无细菌生长。组织学观察：冷冻组，内皮细胞完全去除，脐动脉显示内皮下发达的纵行平滑肌层，脐静脉可见内弹力膜；酶原组，胶原酶作用20min，血管内皮细胞完全去除，脐动脉露出内层纵行平滑肌细胞，脐静脉显示内皮下层。血管顺应性：冷冻组脐血管顺应性大于正常组，正常组大于酶原组，但组间差异均无统计学意义（P〉0．05）；脐静脉的顺应性约为脐动脉的2～3倍。HLA-ABC、HLA-DR免疫组织化学染色：冷冻组、酶原组与正常组比较，脐动、静脉抗原性均明显降低（P〈0．01）；冷冻组与酶原组比较，脐动、静脉HLA-ABC、HLA-DR抗原表达量均降低，且差异有统计学意义（P〈0．01）。结论冷冻法及0．1％Ⅱ型胶原酶作用20min均可完整去除脐血管内皮细胞，低温冷冻法优于酶原法。