沉默BC047440基因对HepG2细胞侵袭能力的影响

目的:观察沉默BC047440基因后对HepG2细胞侵袭能力的影响。方法:实验分为3组,即HepG2细胞转染siRNA的沉默组,HepG2细胞转染无关质粒组及未转染的HepG2细胞组。利用前期构建的BC047440基因的小干扰RNA（siRNA）沉默BC047440基因,然后用MTT法检测细胞黏附率,细胞划痕法检测细胞迁移能力,Boyden小室法检测细胞侵袭性。结果:沉默组的细胞黏附率在20 min和40 min时与HepG2细胞组和无关质粒组比较,差异无统计学意义（P＞0.05）,但在60 min时沉默组显著低于后2组(P＜0.05); 划痕实验显示划痕48h后,无关质粒组和HepG2细胞组划痕区已基本长满,而沉默组划痕依然明显; 接种16 h后无关质粒组和HepG2细胞组侵袭到Boyden小室下室面的细胞数明显多于沉默(P＜0.05)。而无关质粒组与HepG2细胞组间差异均无显著性（P＞0.05）。结论:沉默BC047440基因后可明显抑制HepG2细胞其在细胞外基质上的黏附能力、运动能力和体外侵袭能力,提示BC047440基因可增加肝癌的转移侵袭性。     

BC047440-siRNA对肝癌HepG2细胞增殖抑制及其分子机制的初步探讨

目的 利用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制肝癌相关基因BC047440的表达,观察其受抑制后对细胞增殖能力的影响并初步分析其抑制增殖的分子机制.方法 设计针对BC047440基因的siRNA,构建pGenSil-1-BC047440-siRNA真核表达载体.分别用脂质体法将介导siRNA的真核绿色荧光表达载体pGenSil-1-BC047440-siRNA、空载体质粒pGenSil-1转染人肝癌HepG2细胞建立稳定细胞株;随后实验分为3组转染siRNA表达载体组(PP2)、转染空质粒组(PP1)和未处理的亲本HepG2细胞组(PP0).采用荧光定量PCR检测BC047440 mRNA表达变化;CCK-8分析细胞增殖活性;平板克隆形成实验检测单个细胞的增殖能力;最后选取NF-κB下游增殖相关基因c-myc、bcl-2、cyclin D1,用荧光定量PCR检测其mRNA水平的变化.结果成功转染并获得PP1、PP2组抗性克隆,PP2组与PP0组比较,BC047440 mRNA水平明显降低,抑制率约为75%;细胞增殖实验中PP2组细胞增殖能力明显降低,平板克隆形成实验结果显示PP2组克隆形成率为(8.42±0.82)%,明显低于PP1组[(39.31±5.39)%]和PP0组[(40.96±3.21)%](P＜0.01).检测NF-κB下游增殖相关的几个基因时发现PP2组c-myc mRNA表达明显降低,约为PP0组的12/25;其余基因无明显变化.结论 干扰BC047440基因表达可以抑制肝癌细胞的增殖,初步揭示BC047440基因可以对c-myc起正向调控作用,从而促进肝癌细胞的增殖,提示抑制BC047440基因可能成为控制人肝癌细胞生长的有效靶点.     

骨桥蛋白与肿瘤

骨桥蛋白(osteopontin，OPN)是一种磷酸化糖蛋白，是骨骼和牙齿矿化细胞外基质的主要组成成分。它不仅参与骨的吸收与形成，而且与肿瘤的浸润、转移密切相关，甚至有人认为，它既是肿瘤诊断的标记物，又可作为监测肿瘤预后的指标。关于OPN与肿瘤转移及血管生成的研究不多，作者对此作一综述。     

射频消融治疗肝癌的再认识

目前射频消融(radio frequency ablation,RFA)治疗在临床治疗肝癌方面取得了令人较为满意的疗效,已经成为继手术切除和肝移植术之后小肝癌的第3种根治性治疗手段。以往RFA治疗肝癌单纯依靠影像学方法的协助完成,而现在结合其他模式的治疗方法(如开腹或在腹腔镜下行RFA)可以提供更准确的定位;临时阻断肝脏血流可以获得更大的消融范围;RFA和经动脉导管化疗栓塞(TACE)联合应用比单纯RFA或     

一条肝癌相关新基因的全长cDNA克隆

在抑制性消减杂交技术基础上，我们利用cDNA末端快速扩增方法(RACE)从肝癌组织中得到了5条cDNA片段，其中编号为694447-3的cDNA片段，长550bp(登录号CK730345)，经GenBank检索，发现其与2002年公布的一条新的但功能未知的长1476bp的基因序列(登录号BC047440)同源性达63％。到目前为止，BC047440基因在肝癌中的表达情况仍不清楚。     

外周血AFP mRNA表达与大鼠肝细胞癌微转移的关系

【目的】探讨肝细胞癌外周血AFP mRNA表达水平与早期微转移的关系。【方法】用0．2％二己基亚硝胺（DEN）诱导Wistar大鼠建立肝癌模型,提取外周血总RNA,经转录后,采用巢式反转录聚合酶链反应（巢氏RT-PCR）技术检测大鼠AFP mRNA水平。【结果】20只对照组大鼠外周血标本中未检测到AFP mRNA,而在79只存活的实验组大鼠中,肝硬化组AFP mRNA检出率为6．3％（1／16）,未转移肝癌组AFP mRNA检出率为42．3％（22／52）,伴转移肝癌组AFP mRNA检出率为81.8％（9／11）。【结论】以AFP mRNA为标志物,通过巢氏RT—PCR来检测肝细胞癌外周血微转移是可行的,有助于提高肝细胞癌外周血微转移检测的敏感性和特异性。早期检测外周血微转移可以提高预测肝细胞癌复发、转移的能力。     

BC047440基因通过NF-κB调节HepG2细胞增殖的初步研究

目的观察Bc047440基因能否通过增强NF—κB的活化而促进HepG2细胞的增殖。方法设计针对BC047440基因的小干扰RNA（siRNA），构建pGenesil-1-BC047440-siRNA真核表达载体，用脂质体法将介导siRNA的真核绿色荧光表达载体pGenesil-1-Bc047440．siRNA、pGenesil—1—HK—siRNA转染人肝癌HepG2细胞建立稳定细胞株；实验分为3组：转染siRNA表达载体组、无关质粒组和未处理的亲本HepG2细胞组。采用平板克隆形成实验分析细胞的增殖活性，通过Westernblot检测细胞质p50含量，EMSA检测NF—κB的核转位，荧光素酶试验检测各组细胞的NF—κB活化情况。结果细胞增殖实验显示转染siRNA组细胞增殖能力明显降低，BC047440基因沉默后的HepG2的细胞质p50含量低于野生株HepG2，NF-κB核转位低于野生株HepG2，其荧光素酶和海肾荧光素酶活性比值只有野生株的1／4。结论BC047440基因能促进肝癌细胞的增殖，其调节机制可通过NF—κB信号途径实现，提示BC047440基因可能成为抑制人肝癌细胞生长的有效靶点。     

金仓鼠肝内胆管癌中VEGF的表达与血管生成的相关性研究

目的　探讨血管内皮生长因子 (Vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)和血管生成在金仓鼠肝内胆管癌发生、发展的关系。方法　应用氨基比林和亚硝酸钠诱导金仓鼠肝内胆管癌 ,免疫组化方法检测标本中VEGF、MVD的表达。结果　VEGF在肝内胆管癌组和实验对照组中的阳性率分别是 78 6 %和 10 0 % ,有明显的统计学意义 (P <0 0 1)。肝内胆管癌中VEGF阳性组MVD值明显高于阴性组 (P <0 0 1)。结论　VEGF与肝内胆管癌的血管生成相关 ,并且促进其生长、侵袭及转移 ,血管生成在肝内胆管癌的形成及生长过程中可能起重要的作用。     

肿瘤组织血管内皮生长因子的血管生成作用

1　ＶＥＧＦ的来源与结构ＶＥＧＦ(ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ)血管内皮生长因子是血管内皮细胞的特异性有丝分裂原 ,是目前发现的血管生成因子中唯一能增加血管通透性的因子 ,也是目前所知的最强的提高血管通透性的因子[1] 。Ｍｉｌｅｓ     

腹腔镜处理胆囊变异的临床体会

目的 探讨腹腔镜技术处理胆囊变异的可行性及其临床疗效.方法 对近10年间施行腹腔镜胆囊切除时遇到的46例胆囊变异病例(A组)进行回顾性分析,并随机选择同期进行的无胆囊变异的80例LC病例(B组)进行对比.结果 A组有3例中转开腹(中转率6.5%),B组无中转开腹病例.平均手术时间:A组(46.7±10.3)min,B组(36.5±4.8)min,P<0.05;平均术后胃肠功能恢复时间:A组(26.3±6.2)h,B组(25.8±6.1)h,P>0.05;术后平均住院时间:A组(3.4±0.6)d,B组(3.2±0.5)d,P>0.05.A组有1例发生右肝管损伤,B组无术中及术后并发症,两组治疗效果均较满意.结论 胆囊变异给LC带来一定困难,术中应重视胆囊可能的变异情况,只要能及时发现胆囊变异并采取相应措施,腹腔镜下处理胆囊变异是安全有效的.