从少火生气理论探讨肾气丸促巨噬细胞M2型极化影响成骨的作用

目的 基于少火生气理论探讨肾气丸原组方（SQW）和肾气丸去除桂枝、附子（SQQ）诱导巨噬细胞M2型极化对小鼠骨髓间充质干细胞（BMSC）成骨分化作用的效果差异。方法 采用CCK8法分别检测SQW、SQQ对RAW264.7细胞存活率的影响,以确定药物干预的安全作用浓度。将RAW264.7细胞分为CON组、IL-4组、IL-4+SQW组、IL-4+SQQ组。将不同药物组诱导巨噬细胞M2型极化后分泌的细胞上清液作为条件培养基培养BMSC,评估BMSC成骨分化的能力。用碱性磷酸酶染色法（ALP）及茜素红染色法（ARS）检测各组BMSC成骨分化能力;使用免疫荧光技术（IF）检测BMSC成骨标志蛋白骨形态发生蛋白4（BMP4）、骨保护素（OPG）的分布和表达;使用蛋白免疫印迹法（Western Blot）检测M2型巨噬细胞极化相关的精氨酸酶1（ARG1）、白细胞介素10（IL-10）的表达以及BMSC成骨相关的BMP4、RUNT相关转录因子2（RUNX2）的表达。结果 与IL-4+SQQ组相比,IL-4+SQW组更加显著促进M2型巨噬细胞极化相关因子ARG1、IL-10上调（P＜0.01）,且其条件培养基培养的BMSC的ALP及ARS染色增强,成骨蛋白BMP4、OPG、RUNX2表达升高（P＜0.05）。结论 肾气丸原组方与肾气丸去除桂枝、附子两味药相比,具备更强的促进巨噬细胞M2型极化与增强BMSC成骨分化能力,为少火生气理论提供了实验依据。